关键词:
受体相互作用蛋白2
氧化型低密度脂蛋白
动脉粥样硬化
巨噬细胞
摘要:
[目的]观察受体相互作用蛋白2(RIP2)对巨噬细胞炎性活化及极性转化的影响,探讨RIP2在巨噬细胞吞噬氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)过程中的作用机制。[方法]用不同剂量(10、25和50 mg/L)的ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞24 h,及用50 mg/L ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞8、16及24 h,应用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测THP-1源性巨噬细胞中RIP2 mRNA和蛋白的表达,应用ELISA检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的分泌。设计3对RIP2 siRNA,应用hiperfict转染试剂转染RIP2 siRNA进入细胞,应用实时荧光定量PCR和Western blot检测THP-1源性巨噬细胞转染后RIP2 mRNA和蛋白的表达,从而筛选最适siRNA转染浓度和最有效的一对siRNA。用最有效RIP2 siRNA转染细胞后,50 mg/L ox-LDL处理24 h,应用ELISA检测TNF-α、MCP-1、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12)的分泌,应用实时荧光定量PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)的表达,应用流式细胞术检测细胞表面抗原CD86、CD80和CD163的表达。[结果]ox-LDL以剂量和时间依赖的方式诱导巨噬细胞中RIP2的表达,随着ox-LDL处理剂量及时间的增加,RIP2 mRNA及蛋白的表达增加,其中50 mg/L组RIP2蛋白的表达是对照组的7.6倍,24 h组RIP2蛋白的表达是对照组的17.9倍(P<0.001)。ELISA结果显示,随着ox-LDL处理剂量及时间的增加,TNF-α和MCP-1的分泌升高(P<0.05)。RIP2 siRNA转染细胞后,ELISA检测结果显示,ox-LDL组TNF-α、MCP-1、IL-10的分泌是对照组的2.4倍、2.9倍、1.8倍(P<0.01),IL-12的分泌较对照组下降了34.2%(P<0.01);siRNA+ox-LDL组TNF-α、MCP-1、IL-10的分泌较ox-LDL组分别下降了37.4%、45.3%、27.4%(P<0.01),IL-12的分泌增加了31.4%(P<0.05)。流式细胞术和实时荧光定量PCR结果显示,ox-LDL组CD86、CD80和iNOS mRNA的表达分别是对照组的14.2倍、33.8倍和4.5倍,CD163和Arg-1 mRNA的表达较对照组分别下降了33.4%和43.0%(P<0.05);siRNA+ox-LDL组CD86、CD80和iNOS mRNA的表达较ox-LDL组分别下降了27.6%、29.3%和34.3%,CD163和Arg-1 mRNA的表达分别升高了30.3%和38.6%(P<0.05)。[结论]巨噬细胞中RIP2能被ox-LDL以剂量和时间依赖的方式诱导表达。RIP2基因沉默后可以抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞M1型转化。