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关键词： 艾灸   动脉粥样硬化   线粒体自噬   脂肪酸氧化   脂质蓄积   内皮功能  

摘要： 背景:动脉粥样硬化是心血管疾病的核心病理基础,与脂质代谢紊乱和内皮功能障碍密切相关。前期研究发现艾灸可有效保护线粒体形态及功能,抑制细胞凋亡。目的:探讨艾灸通过介导线粒体自噬调节脂肪酸氧化抗动脉粥样硬化的可能作用机制。方法:将30只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组、艾灸组和艾灸+Mdivi-1组,每组10只,高脂饲料饲养12周复制动脉粥样硬化模型;10只雄性C57BL/6J小鼠作为对照组,普通饲料饲养。各组小鼠均在造模第1天开始干预,对照组、模型组仅抓取固定,艾灸组在“膻中”“神阙”及双侧“内关”“血海”穴进行艾灸干预,每次30 min,每周连续5次;艾灸+Mdivi-1组在艾灸前30 min腹腔注射线粒体分裂抑制剂1[Mdivi-1,1.2 mg/(kg·d)],每周连续注射5 d,连续治疗12周后取材。用酶法测定血清三酰甘油、总胆固醇浓度,用比色法测定血清低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇浓度;苏木精-伊红染色法观察小鼠胸主动脉及肝脏病理形态,油红O染色观察小鼠肝脏脂质变化,酶联免疫吸附试验检测小鼠肝脏中CPT1α、MCAD及血清内皮素1水平,硝酸还原酶法检测小鼠血清一氧化氮浓度,蛋白免疫印迹法检测小鼠肝脏组织BNIP3、becline-1、TOMM20蛋白表达及小鼠胸主动脉组织中内皮型一氧化氮合酶、磷酸化内皮型一氧化氮合酶蛋白表达。结果与结论:①与对照组比较,模型组小鼠血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇浓度均显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇水平明显降低(P<0.05);胸主动脉血管内壁不平整,内膜增厚,基质溶解;肝脏组织细胞肿胀变圆,出现肝细胞点状坏死,中性粒细胞浸润,可见较多的脂肪空泡及脂肪变性;小鼠肝脏油红O染色亦显示大量脂滴蓄积;肝脏组织中CPT1α、MCAD含量及BNIP3、Becline-1蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01),TOMM20蛋白表达量明显升高(P<0.05);小鼠血清中一氧化氮浓度显著降低(P<0.01),内皮素1质量浓度显著增加(P<0.01),胸主动脉组织中内皮型一氧化氮合酶、磷酸化内皮型一氧化氮合酶蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01)。②与模型组比较,艾灸组小鼠血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇浓度显著降低(P<0.01);胸主动脉管腔较规则,中膜排列较为整齐;肝脏组织细胞肿胀显著减轻,纹理清晰,脂滴沉积减少;油红O染色显示脂滴蓄积显著减少;肝脏组织中CPT1α、MCAD含量及BNIP3、Becline-1蛋白表达量显著增加(P<0.05,P<0.01),TOMM20蛋白表达量明显降低(P<0.05);小鼠血清中一氧化氮浓度显著升高(P<0.01),而内皮素1质量浓度显著降低(P<0.01),胸主动脉组织中内皮型一氧化氮合酶、磷酸化内皮型一氧化氮合酶蛋白表达升高(P<0.01)。③与艾灸组相比,艾灸+Mdivi-1组小鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇浓度显著增加(P<0.05,P<0.01);胸主动脉血管内壁稍不平整,内膜增厚,有少量泡沫细胞;肝脏组织细胞肿胀加重;肝脏组织油红O染色示脂滴蓄积增加;肝脏组织中CPT1α、MCAD含量及BNIP3、Becline-1蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01);小鼠血清中一氧化氮浓度下降(P<0.05),而内皮素1质量浓度显著增加(P<0.01),胸主动脉组织中内皮型一氧化氮合酶、磷酸化内皮型一氧化氮合酶蛋白表达下降(P<0.01)。④结果表明,艾灸可改善ApoE^(-/-)小鼠血脂水平、脂肪酸氧化、脂质蓄积,恢复内皮损伤,减轻动脉粥样硬化症状,其机制可能与调控线粒体自噬影响脂肪酸氧化减少肝脏组织脂质蓄积水平、改善主动脉内皮功能障碍有关。

关键词： 生物信息学   机器学习   动脉粥样硬化   线粒体功能障碍   铁死亡   免疫细胞   中药  

摘要： 背景:线粒体功能障碍和铁死亡广泛参与了动脉粥样硬化的发病,研究动脉粥样硬化发病过程中线粒体功能障碍与铁死亡相关生物标志物对该病的诊断与治疗具有重要意义。目的:基于生物信息学和机器学习算法,探究动脉粥样硬化发病过程中线粒体功能障碍与铁死亡相关生物标志物,并预测潜在调控中药。方法:从GEO数据库(由美国国立生物技术信息中心于2000年开发的基因表达数据库,收录并整理了全球研究机构和科研工作者提交的基因表达数据)获取动脉粥样硬化疾病数据集GSE100927,并筛选差异表达基因,基于差异基因开展免疫浸润分析。利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)获得动脉粥样硬化相关的关键模块基因,将关键模块基因与线粒体功能障碍基因、铁死亡基因以及差异表达基因取交集,基于交集基因对疾病组数据共识聚类分析,鉴定每个聚类亚型之间的差异基因。对差异基因进行富集分析,基于最小绝对收缩和选择算子与随机森林等机器学习方法筛选Hub基因。进一步使用RAW264.7细胞构建动脉粥样硬化细胞模型,基于qPCR对Hub基因进行验证,使用数据库进行Hub基因调控的中药预测。结果与结论:①将差异表达基因、WGCNA模块基因,线粒体功能和铁死亡特征基因取交集得到5个交集基因,基于这5个基因进行共识聚类分析得到2个亚型,亚型之间的差异分析得到994个线粒体功能与铁死亡相关亚型差异表达基因。通过2种机器算法预测出3个Hub基因,分别为DMTN、FCGR3A与MGST1,结合细胞实验验证后发现DMTN、MGST1可能具有较高的诊断价值。中药预测结果显示,当归、肉桂等中药可能是DMTN、MGST1的调控中药。②结果表明,DMTN、MGST1基因对动脉粥样硬化有一定诊断价值,还可作为动脉粥样硬化发病过程中线粒体功能障碍与铁死亡相关的特征基因,当归、肉桂等中药作为调控以上基因的药物具有一定研究潜力。

关键词： 瓜蒌   类外泌体囊泡   NLRP3炎症小体   动脉粥样硬化   炎症反应   高效液相色谱-质谱   网络药理学   冠心病  

摘要： 背景:瓜蒌具有抗氧化功能和抗炎作用,常用于治疗心血管疾病。然而,瓜蒌的疗效往往受到成分复杂和生物利用度低的限制。目的:探讨瓜蒌类外泌体囊泡防治动脉粥样硬化的生物学机制。方法:①采用密度梯度离心法从瓜蒌中提取细胞外囊泡,通过透射电镜、纳米粒径检测仪与纳米颗粒追踪分析仪鉴定,共聚焦扫描显微镜观察THP-1来源巨噬细胞摄入瓜蒌类外泌体囊泡情况。②THP-1来源巨噬细胞随机分为空白组、模型组及瓜蒌类外泌体囊泡低、中、高剂量组,其中空白组正常培养,模型组加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白,瓜蒌类外泌体囊泡低、中、高剂量组加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白和5,10,20 mg/L瓜蒌类外泌体囊泡,干预24 h,采用Western blot检测细胞NLRP3和Cleaved-Caspase-1表达水平。③33只Apoe^(-/-)小鼠随机分为空白组、模型组和瓜蒌类外泌体囊泡组,其中空白组小鼠喂养普通饲料,其余2组小鼠喂养高脂饲料16周后,瓜蒌类外泌体囊泡组小鼠腹腔注射瓜蒌类外泌体囊泡,空白组与模型组小鼠腹腔注射生理盐水,隔日给药1次,连续4周,采用油红O染色检测主动脉斑块面积,苏木精-伊红染色观察主动脉组织病理变化,ELISA检测血清白细胞介素1β、白细胞介素18水平,试剂盒检测血脂水平,免疫组化检测主动脉NLRP3和Cleaved-Caspase-1表达水平。④高效液相色谱-质谱联用技术与网络药理学预测瓜蒌类外泌体囊泡治疗冠心病的潜在靶点。结果与结论:①瓜蒌类外泌体囊泡呈茶托状,粒径在50-150 nm之间,能被THP-1来源巨噬细胞有效摄入;②细胞实验显示,与模型组相比,瓜蒌类外泌体囊泡低、中、高剂量组NLRP3和Cleaved-Caspase-1表达水平呈浓度依赖型降低;③小鼠实验显示,与模型组相比,瓜蒌类外泌体囊泡组小鼠主动脉斑块面积减少,炎症细胞浸润较少,三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平下降,高密度脂蛋白胆固醇水平升高,NLRP3及Cleaved-Caspase-1蛋白表达降低;血清白细胞介素1β、白细胞介素18水平降低;④筛选并富集到的关键通路有HIF-1信号通路、PI3K-Akt信号通路、代谢通路、脂质和动脉粥样硬化通路等。结果表明,瓜蒌类外泌体囊泡可有效缓解小鼠动脉粥样硬化,作用机制可能与抑制NLRP3炎症小体介导的炎症反应有关。

关键词： 间充质干细胞   动脉粥样硬化   下肢动脉硬化闭塞症   溃疡愈合   外泌体   临床疗效   Meta分析   随机对照试验  

摘要： 目的:系统评价间充质干细胞治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床疗效。方法:计算机检索PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane Library、Scopus、Google Schola、中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库,检索间充质干细胞治疗下肢动脉硬化闭塞症的随机对照试验,检索时限均从各数据库建库至2024年7月。按照制定的纳入和排除标准进行文献筛选、提取相关资料。使用RevMan 5.3软件对纳入文献进行Meta分析,包括截肢率、无截肢生存率、溃疡愈合率、踝肱指数、经皮氧分压以及无痛行走距离。结果:共纳入9个随机对照试验。Meta分析结果显示:与对照组比较,间充质干细胞治疗组患者无截肢生存率[RR=1.23,95%CI(1.07,1.42),P=0.004]、截肢率[RR=0.55,95%CI(0.35,0.85),P=0.007]、溃疡愈合率[RR=1.95,95%CI(1.51,2.52),P<0.001]、踝肱指数[MD=0.16,95%CI(0.13,0.19),P<0.001]、经皮氧分压[SMD=1.62,95%CI(0.87,2.37),P<0.001]以及无痛行走距离[MD=131.81,95%CI(3.56,260.06),P=0.04]均有显著改善,但死亡率[RR=1.13,95%CI(0.62,2.06),P=0.68]差异无显著性意义。结论:间充质干细胞对下肢动脉硬化闭塞症的部分临床指标有改善趋势。但由于纳入文献的局限性,未来尚需更多高质量、多中心、大样本的随机对照试验验证。

关键词： 结肠癌   腺瘤性息肉   癌前病变   结直肠癌  

摘要： 近年来,我国结肠癌发病率呈现上升趋势。腺瘤性息肉作为结肠息肉的主要类型,是结肠癌公认的重要癌前病变,中国国家癌症中心公布的《中国年度癌症报告(2022年)》显示,2022年我国结直肠癌新发病例51.71万例,死亡病例24万例,我国结直肠癌发病率和死亡率在全部恶性肿瘤中分别位居第2位和第4位,且大多数患者在确诊时已属于中晚期。我国已成为全球结直肠癌每年新发病例数和死亡病例数最多的国家,其严重影响和威胁我国居民的身体健康。

关键词： 脑血管事件   斑块特征   生化指标   凝血指标   动脉粥样硬化   风险评估  

摘要： 目的:本研究旨在采用超声技术动态监测颈动脉粥样硬化斑块特征,联合生化指标及凝血指标分析,探讨其与脑血管事件发生之间的关系,评估斑块特征随时间变化对事件发生的预测价值,并建立多因素模型以识别脑血管事件的独立预测因素。方法:本研究纳入200例患者,依据是否发生脑血管事件分为事件组(n=100)和无事件组(n=100)。收集患者的基本资料、斑块特征(包括斑块面积、容积、回声特征等)、生化指标(CRP、IL-6、LDL-C等)、凝血指标(D-二聚体、纤维蛋白原等)和临床结局。通过倾向评分匹配法控制混杂因素,使用Kaplan-Meier生存曲线评估事件发生率,Cox回归模型评估各变量与脑血管事件的独立关系。结果:事件组在斑块面积、斑块容积、低回声斑块比例、狭窄程度、PSV和EDV等影像学指标上显著高于无事件组(P<0.001)。生化指标CRP、IL-6、LDL-C及凝血指标D-二聚体、纤维蛋白原在事件组中也明显升高(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示,斑块特征和生化指标可显著区分高风险与低风险患者(Log-rank P<0.001)。Cox回归分析表明,斑块面积、CRP和狭窄程度是脑血管事件的独立预测因素(HR=2.34、1.56、1.98,P<0.05)。结论:本研究发现,斑块特征、炎症因子和凝血指标与脑血管事件的发生密切相关。斑块特征的动态变化是评估脑血管事件风险的重要依据。未来应进一步验证这些因素的临床应用价值,并探索其他潜在的生物标志物。

关键词： 核桃油   花生油   动脉粥样硬化   大鼠   信号通路   骨骼肌   炎症因子   工程化组织构建  

摘要： 背景:核因子κB/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3信号的激活会导致内皮功能障碍、氧化应激等,在引发脂质代谢紊乱以及动脉硬化中起着关键作用,目前核桃油和花生油对动脉硬化大鼠骨骼肌炎症因子的影响仍不清楚。目的:探讨核桃油和花生油对动脉粥样硬化的改善效果及其作用机制。方法:40只8周龄雄性SD大鼠,适应性喂养1周后,随机分为正常对照组(n=10)和高脂组(n=30)。采用高脂饮食结合腹腔注射维生素D3建立动脉粥样硬化大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为模型组(n=10)、花生油组(n=8)和核桃油组(n=8),后2组连续灌胃4周花生油或核桃油[5 d/周,1.2 g/(kg·d)]。干预结束后,采用ELISA法检测大鼠血脂相关指标,苏木精-伊红染色观察大鼠主动脉形态学改变,RT-qPCR、Western blot检测骨骼肌中核因子κB、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3、半胱氨酸蛋白酶1、白细胞介素1β、白细胞介素18 mRNA表达水平及核因子κB、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3、白细胞介素1β蛋白表达水平,免疫荧光染色检测核因子κB和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3的表达。结果与结论:①与正常对照组相比,模型组大鼠主动脉血管壁增厚,破损、脂质沉淀现象较为严重,血脂水平和动脉硬化指数显著上升(P<0.01),骨骼肌中的核因子κB、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3、半胱氨酸蛋白酶1、白细胞介素1β、白细胞介素18 mRNA表达以及核因子κB、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3、白细胞介素1β蛋白表达显著增加(P<0.01);②与模型组相比,花生油组和核桃油组主动脉组织易损面积明显减少,血清中总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇水平以及动脉硬化指数显著下降(P<0.01),骨骼肌中核因子κB、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3、半胱氨酸蛋白酶1、白细胞介素1β、白细胞介素18 mRNA表达以及核因子κB、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3、白细胞介素1β蛋白表达均显著降低(P<0.01或P<0.05);③与花生油组相比,核桃油组血清中总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇水平显著降低(P<0.01或P<0.05),骨骼肌中核因子κB、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3、半胱氨酸蛋白酶1、白细胞介素18 mRNA表达以及核因子κB、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3、白细胞介素1β蛋白表达下降更显著(P<0.01或P<0.05)。结果表明:花生油和核桃油对动脉粥样硬化主动脉病变均有改善作用,可能与核因子κB/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3信号通路有关,且核桃油的改善作用优于花生油。

关键词： 血浆动脉粥样硬化指数   脑卒中   中老年人群   风险预测   队列研究  

摘要： 目的探讨基线及累积血浆动脉粥样硬化指数(AIP)与中老年人群新发脑卒中的关系,为脑卒中的早期筛查和预防提供依据。方法研究基于中国健康与养老追踪调查(CHARLS)数据,纳入参与2011年、2015年、2018年和2020年四次调查的中老年人。采用限制性立方样条(RCS)模型分析AIP与脑卒中风险的剂量反应关系;并通过Cox比例风险回归模型评估基线AIP和累积AIP水平对脑卒中风险的影响。结果在9年的随访期间,共记录到551(6.54%)例新发脑卒中事件。结果显示,随着基线AIP水平的升高,中老年人群发生脑卒中的风险呈现出增长趋势。基线AIP四分位数分组中,与最低四分位数组(Quartile 1)相比,Quartile 2、Quartile 3和Quartile 4组的脑卒中风险分别增加了33%、60%和61%,其D和95%CI分别为1.33(1.03~1.74)、1.60(1.24~2.07)和1.61(1.23~2.08)。累积AIP四分位数分组中,与最低四分位数组(Quartile 1)相比,仅观察到最高四分位数组(Quartile 4)的脑卒中风险增加了39%(HR=1.39,95%CI:1.03~1.88)。结论基线AIP和累积AIP水平升高总体上与脑卒中风险增加相关。

关键词： 白藜芦醇   洗脱支架   超声雾化喷涂   动脉粥样硬化   生物相容性   血液相容性   抗血栓   药物释放  

摘要： 背景：传统药物洗脱支架虽然已成为冠状动脉粥样硬化性心脏病介入治疗的主流选择，但仍存内皮修复延迟、晚期血栓风险及慢性炎症反应等问题，因此，开发具有选择性细胞调控功能和可降解载体的新型药物洗脱支架已成为当前研究的迫切需求。目的：制备负载白藜芦醇洗脱涂层的316L不锈钢支架，系统研究该涂层的理化性能、生物相容性以及对动脉粥样硬化病灶的治疗效果。方法：(1)配置白藜芦醇与聚乳酸-羟基乙酸共聚物质量比分别为0%,10%,20%,30%,40%的溶液，采用蒸发沉积法在316L不锈钢片材表面制备质量分数0%,10%,20%,30%,40%白藜芦醇洗脱涂层，表征5组涂层的水接触角、血液相容性、抗氧化特性以及对人脐静脉内皮细胞、人主动脉平滑肌细胞与巨噬细胞生长行为的影响，表征质量分数30%白藜芦醇洗脱涂层的药物释放动力学与机械性能；将巨噬细胞分别接种于316L不锈钢片材、负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物涂层316L不锈钢片材与负载质量分数30%白藜芦醇洗脱涂层316L不锈钢片材表面，加入脂多糖刺激因子建立动脉粥样硬化模型，免疫荧光染色检测CD206(抗炎型巨噬细胞)、CD86(促炎型巨噬细胞)表达。(2)配置白藜芦醇与聚乳酸-羟基乙酸共聚物质量比分别为0%,30%的溶液作为喷涂液，采用超声雾化喷涂法在316L不锈钢支架表面制备质量分数0%,30%白藜芦醇洗脱涂层，通过球囊扩张实验评估涂层的机械性能。结果与结论：(1)负载涂层316L不锈钢片材表面的水接触角均大于316L不锈钢片材，并且随着涂层中白藜芦醇质量分数的增加，不锈钢片材表面的水接触角呈降低趋势。316L不锈钢片材与负载涂层316L不锈钢片材均具有较低的溶血率(溶血率<5%)；体外血小板黏附与激活实验显示白藜芦醇洗脱涂层有效抑制了血小板的附着与活化，其中质量分数30%,40%白藜芦醇洗脱涂层的作用更显著。白藜芦醇洗脱涂层可抑制巨噬细胞的活性氧释放，发挥抗氧化特性。白藜芦醇洗脱涂层可促进人脐静脉内皮细胞的增殖、抑制人主动脉平滑肌细胞与巨噬细胞的增殖，其中质量分数30%,40%白藜芦醇洗脱涂层的作用更显著。因此，后续实验选择质量分数30%白藜芦醇洗脱涂层。白藜芦醇洗脱涂层能够实现至少30 d的稳定可控药物释放。免疫荧光染色显示白藜芦醇洗脱涂层能够促进巨噬细胞向抗炎表型转化。(2)经球囊扩张后，不锈钢支架表面的白藜芦醇洗脱涂层未出现剥落、裂缝扩展等问题，具有良好的机械性能。

关键词： 痰瘀同治优化方   动脉粥样硬化   网络药理学   分子对接   实验验证  

摘要： 目的 采用网络药理学和动物实验探究痰瘀同治优化方治疗动脉粥样硬化（AS）的药效物质基础和作用机制。方法 采用UPLC-Q-TRAP-MS/MS鉴定痰瘀同治优化方入血成分并进行网络药理学分析，筛选重要成分及其治疗AS的核心靶点，进行分子对接。构建AS模型小鼠并予痰瘀同治优化方干预，HE染色和油红O染色观察主动脉形态，全自动血生化仪检测血脂水平，ELISA检测血清炎症因子含量，RT-qPCR检测主动脉核心靶点mRNA表达。结果 鉴定并预测出痰瘀同治优化方30个入血成分可能通过调节IL-6、TNF、IL-1β、AKT1、NF-κB等核心靶点，调控TNF信号通路、Toll样受体信号通路、PI3K/Akt信号通路等发挥治疗AS作用。动物实验显示，痰瘀同治优化方可减少AS模型小鼠主动脉斑块和炎性细胞浸润，减轻斑块内脂质沉积和血管狭窄，改善血脂水平，显著降低血清TNF-α、IL-1β含量及主动脉TNF-α、IL-6、AKT1、NF-κB mRNA表达。结论 痰瘀同治优化方可能通过作用于IL-6、TNF、IL-1β等核心靶点调控TNF、Toll样受体等信号通路，抑制炎症反应，从而治疗AS。