关键词:
弹性蛋白
皮肤屏障
抗炎
抗敏
瘙痒
摘要:
目的构建一种具有抑制炎症反应和舒缓过敏生物活性的重组弹性蛋白。方法利用大肠杆菌系统构建表达并获得重组弹性蛋白rhELT。在细胞学实验方面,检测了皮肤屏障的完整性,对刺激的响应及炎性因子的影响:人表皮角质形成细胞(normal human epidermal keratinocytes cells,NHEK)丝聚蛋白(filaggrin,FLG)和兜甲蛋白(loricrin,LOR)的表达,人永生化角质细胞(human keratinocytes cells,HaCat)辣椒素受体(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)相关基因表达,小鼠单核巨噬细胞(mouse mononuclear macrophages cells,RAW264.7)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)促分泌检测,小鼠肥大细胞瘤细胞(murine mastocytoma cells,P815)脱颗粒模型;此外,还利用斑马鱼炎症模型、豚鼠急性瘙痒模型和C57 BL/6小鼠慢性瘙痒模型来评价重组弹性蛋白rhELT的抗敏及修复特性。结果在rhELT蛋白的给药浓度为20μg·mL^(-1)时,NHEK细胞中FLG和LOR上调5.57倍和4.70倍(P<0.001 vs空白组);rhELT蛋白显著抑制辣椒素刺激的HaCat细胞中TRPV1的mRNA转录(P<0.01 vs模型组);rhELT蛋白显著抑制了脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7中TNF-α分泌(P<0.01 vs模型组);P815细胞的脱颗粒率降低了65.76%(P<0.001 vs模型组);rhELT蛋白对斑马鱼炎症同样有明显的抑制作用;300μg·g^(-1)rhELT蛋白组明显抑制了4-氨基吡啶引起的豚鼠变态反应,改善了丙酮-乙醚涂抹导致的小鼠皮肤干燥及脱屑症状。结论表达的rhELT蛋白在皮肤屏障功能、抑制炎症反应和舒缓方面具有生物活性,为基于rhELT蛋白开发新型功能性生物原料提供了科学依据。