关键词:
不同动物
E.coli O157:H7
毒力基因
耐药
PFGE
WGS
摘要:
目的:对新疆不同动物源*** O157:H7进行分离鉴定,研究其生物学特性及流行传播规律,为新疆各地区*** O157:H7的污染状况评估提供科学依据,为控制不同动物*** O157:H7的传播提供参考,以期从源头保障畜牧业的健康发展。方法:(1)从新疆不同地区采集不同动物的样本(粪便、肛拭子和胴体拭子),先用EC肉汤增菌,经免疫磁珠富集后,再用CT-SMAC与MUG选择性培养,最后用PCR法检测rfb E和fli C基因;(2)对已鉴定为*** O157:H7的菌株,用PCR法检测5种毒力基因(stx1,stx2,eae A,Tccp和Hly);用小鼠攻毒试验检测其致病性。(3)采用K-B法,对分离株进行药物敏感性检测,用PCR法检测13种耐药基因;(4)用PFGE和WGS技术研究不同动物源菌株之间的基因相关性。结果:(1)从新疆12个地区采集了7 149份不同动物的样本,分离到38株*** O157:H7,其中牛源、羊源、骆驼源、驴源和人源的检出率分别为0.3%(13/3788)、0.5%(5/966)、1.0%(17/1792)、2.4%(1/42)和0.4%(2/561);乌鲁木齐、伊犁、哈密、阿克苏、克拉玛依、吐鲁番、阿勒泰和克州的*** O157:H7检出率分别为0.3%(9/3618)、2.0%(7/358)、1.1%(4/381)、0.3%(1/295)、3.0%(1/34)、2.4%(4/167)、0.8%(11/1381)和4.4%(1/23)。(2)38株*** O157:H7中27株(71.1%)携带毒力基因,stx1,stx2,eae A,Tccp和Hly基因的携带率分别为18.4%(7/38)、23.7%(9/38)、55.3%(21/38)、50.0%(19/38)和26.3%(10/38),7株*** O157:H7(18.4%)携带所有被检测基因;攻毒试验结果显示,无小鼠死亡。(3)22株*** O157:H7对2~15种抗生素耐药,21株*** O157:H7(52.6%)对哌拉西林耐药,1株*** O157:H7(2.6%)对多黏菌素B耐药;共检测到10种耐药基因:bla 、bla 、bla 、bla 、tet G、tet E、aac、aad A1、sul1和cml A1,未检出bla 、bla 和tet A。(4)PFGE结果表明,38株*** O157:H7分为16个不同的簇,其中有人源、牛源和骆驼源*** O157:H7在同一簇。全基因组测序注释到74种耐药基因和273种毒力基因。结论:新疆牛、羊、骆驼、驴和人均携带*** O157:H7,骆驼、驴和人源检出率相对较高;分离株普遍携带1~5毒力基因,攻毒试验中无死亡现象,说明*** O157:H7对小鼠的致病性不强;不同动物源*** O157:H7存在多重耐药现象,检测到10种耐药基因,对哌拉西林耐药最严重。PFGE和WGS的结果表明不同地区不同动物源*** O157:H7同源性很高,应加强传播途径的预防和控制。