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关键词： 外伤后细菌性致死性肉芽肿   痤疮丙酸杆菌   16S rRNA   动物模型   郭霍定律  

摘要： 外伤后细菌性致死性肉芽肿(Fatal bacteria granuloma after truma,FBGT)是一种病程短、致死率高的新疾病，21世纪前还未被皮肤病学界所认识，直至1996年才由西京医院皮肤科发现并命名。 多个病人的皮损行透射电镜检查，发现炎细胞内外存在类似短杆菌，将患者皮损组织行多次严格的细菌培养，发现致病菌为一种革兰阳性厌氧短杆菌，细菌生化鉴定支持本致病菌为痤疮丙酸杆菌(propionibacteria aches, ***)或放线菌，而API系统鉴定为***，并且根据该致病菌药敏试验结果挽救了一例患者。 1．外伤后细菌性致死性肉芽肿致病菌分子生物学鉴定 通常认为***是一种皮肤的常驻菌群，其致病力很低，但在FBGT中可以引起患者死亡，这一点和已知***特性不符合，随之出现一个问题，从FBGT皮损中分离出来的致病菌是否确实是***?虽然API系统鉴定为***，但该致病菌生化鉴定难以确定其种属，有必要进行深入研究，明确其分类。 现代微生物学提出的多相分类(polyphasic taxonomy)， 第四军医大学硕士学位论文 包含表型、基因、系统发育等信息，是研究细菌分类的最有效手 段，其中，165 rRNA序列测定可以判定系统发育信息，适用于细 菌的各级分类[5]，而DNA一DNA杂交可以确定DNA同源性，是确定 正确分类地位的重要方法〔6]。同样，这些方法也可以用来对未知细 菌进行鉴定，确定其种属。 我们对于FBGT皮损中分离出的致病菌进行165 rRNA序列测 定，并将测序结果在Genebank中进行 Blast分析，与国外报道的P. aeneS16S rRNA序列同源性达到99.9%，确认其为***。 为了保证结果准确无误，我们又进一步委托中国科学院微生 物所将该致病菌和***标准株进行DNA一DNA杂交，结果显 示两者DNA同源性)70%，可以确定两者为同一种细菌。 上述实验证实FBGT患者皮损中分离出的致病菌为***。 2.外伤后细菌性致死性肉芽肿动物模型初步构建 FBGT作为一种感染性疾病，深入研究其发病机理，探索其治 疗措施离不开动物模型的支持，因此构建本病动物模型成为深入 研究本病的关键。 构建细菌感染动物模型的成功标准，国际上公认的是郭霍定律Iv] (K0ch’ 5 Postulates)，其基本内容是:1.微生物只存在于患病的动 物体内，在健康动物体内不存在;2.微生物必须从动物体内分离培养 出来;3.接种纯培养微生物到健康动物体内可以致病;4.注射微生 物后动物出现病变，再一次分离培养出原来致病菌。 根据预实验结果，我们选择家兔进行研究。 采取的实验方法主要是:首先利用皮质激素制造家兔的免疫 抑制状态，然后将纯培养的对数生长期致病菌及***标准 株配制成细菌悬液，注射入家兔皮内，观察注射部位的反应及实 验动物的全身情况。将注射部位出现的皮损分别行组织病理、电 第四军医大学硕士学位论文 镜检查及细菌培养:并对培养出的细菌行API鉴定及165 rRNA 序列分析，并根据临床资料选择不同类药物进行药敏试验;部分 出现神经系统症状的动物及时行MRI检查，并取其脑组织进行组 织病理、电镜检查及细菌培养。 实验结果显示，所有家兔注射部位出现红斑，注射低浓度(1 x106/mL)细菌的红斑数日内消失，而注射高浓度(9 xlo勺mL) 细菌导致的红斑则持续时间较长，部分发展为脓肿，可以从皮内 脓肿中再一次分离培养出革兰阳性短杆菌;两组共5只家兔出现 神经系统症状(单侧眼球突出或下肢瘫痪等)，其

关键词： 动物生物学   创新性实验课   轮虫   热适应  

摘要： 介绍了动物生物学创新性实验课——轮虫的最适温度、逃避温度和致死温度的教学设计。概要论述了创新性实验课的意义和重要性 ,详细介绍了实验课名称、目的、实验设计原理、材料与仪器、实验方法和步骤、数据分析以及实验报告的撰写方法等。

关键词： 稀释方法   微生物学   食品检验   饲料   生物测定   悬浮液   肉制品   饮食   比率的   生物试验   肉   农产品   微生物分析   试样制备   定义   规范(验收)   试验室   稀释   食品  

标准号: DIN EN ISO 6887-2-2004

摘要： The standard specifies specific rules for the preparation of the test samples and initial suspension of meat and meat products

关键词： 食品   微生物分析   验证   微生物学   实验室间试验   定义   污染   精密度   微生物   细菌计数方法   食品料   梭菌属   计数   饲料   计数方法(微生物学)   生化分析法   实验室试验   菌落计数技术  

标准号: EN ISO 7937-2004

ISBN: (纸本)7040145855

关键词： 生产   术语   说明书   规格试验   微生物学   质量   质量控制   一般条件   培养基   饲料   实验室   食品   制备   质量保证   微生物分析   特性   特性   实验室规程  

标准号: DIN ISO/TS 11133-2-2004

摘要： This European prestandard provides practical guidelines on performance testing of culture media.

关键词： BNx小鼠   生物学特性   肿瘤动物模型   转基因  

摘要： 本文对引进的T、B和NK细胞联合免疫缺陷小鼠(BNX小鼠)的生物学特性及其在人胃癌(MKN-45)和SV40T转基因前列腺癌肿瘤动物模型建立中的应用进行了研究。 应用定期测定BNX小鼠的体重、统计繁殖指标，绘制生长曲线和检测BNX小鼠血液生理与生化指标等方法对BNX小鼠的生物学特性进行了探索，研究发现引进的BNX小鼠产仔性能强，平均产仔数为8.2±0.6只(纯合子4.0只)，较易饲养，仔鼠成活率高可达99.3％，繁殖性能高于其背景品系CBL／6小鼠;BNX小鼠的体重随周龄增加而增长，前18周增重快，后期增重较慢基本保持在平台期;公鼠的生长速度比母鼠快，尤其是在断奶的第一周公鼠与母鼠的体重差异高达5.1克;30周公鼠与母鼠的体重分别可达29.2±2.2克和25.4±1.8克。6周BNX小鼠淋巴细胞含量、总蛋白和白蛋白含量等与动物免疫机能相关的血液生理生化指标，BNX小鼠均显著地低于对照组裸小鼠，BNX小鼠的白细胞总数及淋巴细胞含量分别为(3.37±0.69)×10／L、26.4％，其中淋巴细胞含量比裸小鼠低40％，只及正常小鼠的三分之一，从生理生化指标这个侧面反映BNX小鼠的免疫缺陷程度要比正常小鼠和裸小鼠深。 本研究采用皮下移植与原位移植的方式，应用BNX小鼠，成功地建立了人胃癌(MKN-45)高转移肿瘤动物模型。BNX小鼠皮下移植瘤模型肿瘤的生长速度虽不及其对照组的裸小鼠和SCID小鼠，但其从肿瘤的成瘤率、转移率以及成瘤的一致性等综合指标考虑显著地优于后两者，尤其是在肿瘤转移率方面，BNX小鼠肺转移高达100％，合并89％的肝转移，肿瘤转移具有较好的靶向性;原位移植瘤模型BNX小鼠成瘤率也高达95.5％，其肺、肝、淋巴结、膈肿瘤转移率和腹水形成率分别为100.0％、76.2％、90.5％、28.6％、57.1％，均显著高于对照组裸小鼠。BNX小鼠人胃癌原位移植瘤模型比裸小鼠出现转移的时间早，转移率高，转移程度深，荷瘤鼠晚期出现全身衰竭及恶性病质，基本上重现了人胃癌的临床过程。本研究表明应用深度免疫缺陷小鼠可以提高人胃癌(MKN-45)肿瘤动物模型的转移率。 SV40T转基因前列腺癌FVB小鼠动物模型虽然可以为前列腺癌的病因学研究与治疗提供理想的动物模型，但该模型发病率早，繁殖力低下，保种困难，进而限制 其推广与应用。我们尝试用肿瘤皮下移植的方法将其移植到其背景品系FVB小鼠及 裸小鼠的皮下，但均未获得成功。本文应用BNx小鼠成功地建立了SV40T转基因前 列腺癌BNx小鼠皮下移植瘤模型，并成功地回输到裸小鼠及转基因小鼠背景品系一 FVB小鼠，进而解决了SV40T转基因前列腺癌的保种问题。经实验观察其平均成瘤 时间为n.5士2.6天，平均荷瘤寿命为66士5.7天，成率瘤可达100.0%。经PCR 检测，在该模型的皮下肿瘤、肝脏和肺脏检测到了SV40T基因，表明该肿瘤来源于 Sv40T转基因小鼠(FVB小鼠)且发生了肝和肺的转移，经病理学检查证实肿瘤发生了 肝脏转移。由于PCR方法灵敏度高，该模型是研究肿瘤微转移理论较理想的肿瘤动 物模型。

关键词： 饲料   食品   数据分析   食品检验   介质   方法   农产品   微生物   检测   水平的   分析   微生物分析   细菌纲   抽样方法   分析方法   微生物学   试验媒体   验证   定义   溶血性   单核细胞增生性利斯特氏菌   精密度   试验   调查方法  

标准号: ISO 11290-1 AMD 1-2004

摘要： This is Amendment 1 to ISO 11290-1-1996 (Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes — Part1: Detection method)

关键词： 农产品   分析   饲料   细菌纲   组分   培养基   定义   测定   食品检验   食品   食品测试   调查方法   微生物分析   微生物学   沙门氏菌属   抽样方法   测试   试验   验证  

标准号: ISO 6579 Technical Corrigendum 1-2004

摘要： The standard is about Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontalmethod for the detection of Salmonella *** CORRIGENDUM 1

关键词： 朊病毒   表位   传染性海绵状脑病   基因  

摘要： 朊病毒(Prion)可引起的人和动物的传染性海绵状脑病(Transmissible SpongiformEncephalopathies,TSE)。该致病因子具有与普通病原微生物不同的理化和生物学特性，至今其致病机理尚不完全明确。本研究利用基因克隆表达和生物信息学技术，结合病理组织学及实时荧光定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)等方法，在对PrP功能表位分析的基础上，对其主要结构蛋白合成肽的免疫学特性进行了分析，并对PrP重组蛋白脑内接种金黄地鼠的生物学特性进行了探索，为今后进一步研究Prion的致病机理和检测技术奠定了基础，研究内容如下： 1．分别成功克隆了奶牛、牦牛、大熊猫、恒河猴、孔雀及珍珠鸡的PrP基因，运用分子生物学软件对其和相关种属PrP基因及氨基酸序列进行了序列比较、遗传进化和同源性分析，对PrP结构蛋白的功能表位及二级结构进行了预测，获得了有关种属间PrP基因结构多态性及功能表位生物学信息，为PRNP基因多态性与朊病毒病的连锁关系研究提供了基础数据。 2．利用Goldenkey分子生物学软件分析确定了奶牛PrP的抗原功能表位，化学合成特定序列结构蛋白多肽，经鉴定后按照一定的分子比与载体蛋白匙孔嘁血蓝蛋白偶联，经检测后制备牛PrP多肽兔多抗，并进行了免疫学特性检测。结果表明，所制备的特定表位结构蛋白多肽抗体经ELISA方法测定抗体效价达到1：10，经Western blotting试验检测，能够与PrP重组结构蛋白和纯化的牛PrP结合。提示该结构蛋白多肽抗体具有良好的免疫学特性，有望用于TSE检测试剂的研制。 3．采用原核表达系统对牛PrP结构蛋白进行了成功表达，并利用结构蛋白多肽抗体进行了鉴定。结果表明：在37℃、OD为0.8时经IPTG(1.0mmol／L)诱导表达3h条件下，重组PrP蛋白的表达量最高。经Western blotting方法检测，表达蛋白与多肽抗体反应性良好。结果提示：本研究成功制备了牛PrP重组结构蛋白，该蛋白有望进一步用作Prion结构生物学的研究材料。 4．为了弄清PrP重组结构蛋白的生物致病性及其对prp基因表达的影响等生物学特性，进而为研究PrP转化为PrP的选择压力条件提供生物学检测方法奠定基础。对试验组6只金黄地鼠脑内注射纯化后的PrP重组结构蛋白(10μg/μl，3μl)，对照组2只金黄地鼠用磷酸盐缓冲液(PBS)同法处理，临床观察记录;102天后将实验动物经眼球静脉放血处死，分别取小脑、脑干(Obex部位)、部分大脑经甲醛固定、制作石蜡切片、H.E.染色，光镜下进行组织病理学观察;取另一部分大脑提取总RNA利用实时荧光定量RT-PCR方法检测不同处理组金黄地鼠PrP表达差异。结果表明：金黄地鼠脑内注射102天内，未见异常临床症状，试验组与对照组无明显差异;未见异常组织病理学变化;试验组和对照组金黄地鼠脑组织PrP基因表达无显著差异。结果提示：通过PrP重组蛋白在检测时间内未能引起地鼠脑组织海绵状病理变化，未能引起PrPmRNA表达水平改变，为进一步研究PrP重组蛋白结构生物学提供了基础数据。