关键词：
芽胞杆菌
筛选鉴定
抑菌试验
酶活
动物实验
培养优化
摘要：
因抗生素滥用而导致的毒性残留、耐药性等问题已引起人们的广泛关注。寻找安全、无毒的替代品迫在眉睫。长期的生产实践及大量研究表明,多种芽胞杆菌对动物正常生理状态的维持和生长繁殖都有重要意义。芽胞杆菌不仅有抑制常见病原菌生长的能力,还能产生多种营养物质,是益生菌菌种开发的重要来源。
本研究依据益生菌筛选的常规方法和芽胞杆菌的判定标准,从健康的鸡肠道中分离的288个芽胞杆菌菌株中挑选出各不相同的18株,经生理生化实验初步鉴定,分别为枯草芽胞杆菌、地衣芽胞杆菌、蜡状芽胞杆菌、凝结芽胞杆菌和巨大芽胞杆菌。
根据动物益生菌的筛选标准,分别对这些芽胞杆菌进行筛选。用5种畜禽常见病原菌为指示菌,对这些芽胞杆菌浓缩发酵液的抑菌效果进行检测,发现其中有6个分离株有较好的抑菌效果。又分别对这些分离菌株的发酵液进行木聚糖酶、纤维素酶和植酸酶的酶活性测定,结果发现其中4个分离株可产木聚糖酶,2个分离株可产纤维素酶,5个分离株可产植酸酶。但在实验设定的营养贫瘠的条件下这些分离株产生的酶活都比较小。
小鼠腹腔注射和饮水摄入分离株的急性毒性试验验证了这些分离株的安全性。在持续2周分别喂给昆明小鼠6个有较好抑菌效果的分离株的菌悬液,并以高浓度病原菌为应激条件,发现这些分离株对小鼠有一定的促生长作用。又把这6个菌株作为3个组合给小鼠灌胃,观察到小鼠粪便中大肠杆菌数和粪便含水量不变,而乳酸杆菌的数量有显著增加。在持续6周喂给母猪和初生乳猪6个分离株混合物,发现对防止乳猪拉痢有很好的效果,发病率从74.9%降低到29.4%。
综合前面的实验结果,分离株BC261表现出较好的益生菌开发潜力。经培养条件和培养基优化试验,初步确定此菌株产最大活菌数的培养条件是:培养基初始pH值为7.0-7.3,接种量4%（v/v）,培养温度35℃,装液量33-35ml/250ml;最佳培养基为:可溶性淀粉2.0%（w/v）,蛋白胨1.5%（w/v）,玉米浆2.5%（v/v）,NaH2PO4缓冲液0.4%（w/v）。
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