关键词:
阿胶
鹿角胶
龟甲胶
地龙
羚羊角
鸡内金
穿山甲
蛋白质组学
激光解析/离子化-飞行时间质谱
摘要:
背景激光解析/离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术为以蛋白质/肽为主要成分的中药蛋白质组学研究提供了重要的技术平台。
目的:对阿胶、鹿角胶、龟甲胶、地龙、羚羊角、鸡内金、穿山甲等7种传统中药水溶性蛋白/肽成分进行蛋白质组初步分析,建立中药蛋白质/肽相对分子质量指纹图。
方法:采用饱和硫酸胺沉淀,透析脱盐冻干法获得7种中药水溶性蛋白/肽;采用Ciphergen Biosystems Inc. ProteinChip (?) Biology System(美国PBSⅡ+)及配套的NP10芯片、激光解析/离子化-飞行时间质谱技术,分析Mr1500-13000区间蛋白质、肽分布及其相对分子质量。
结果:获得阿胶水溶性蛋白/肽相对分子质量峰38个,根据对比氨基酸相对分子质量分析,有意义蛋白/肽共计9个。鹿角胶水溶性蛋白质/肽共显示27个显著相对分子质量峰,约计16个有意义蛋白质/肽。龟甲胶水溶性蛋白/肽相对分子质量峰6个,约计6个有意义的蛋白/肽。地龙生干品和炮制品水溶性蛋白质/肽相对分子质量峰共计29个,其中生干品地龙17个有意义峰,炮制品地龙12个有意义峰。多个相邻蛋白质/肽峰之间相对分子质量相差一个氨基酸残基,并且生地龙与炮地龙有多组相对分子质量分别极为相近,推测可能为相同的肽段。羚羊角煎煮法和冷浸法获得水溶性蛋白/肽相对分子质量峰共计25个,其中煎煮法显示14个峰,冷浸法显示11个峰。对比分析这些肽段相对分子质量,部分差值与某些氨基酸残基相对分子质量相近。并且在煎煮和冷浸两种方法中显示出部分蛋白/肽相对分子质量相近,说明可能为同一肽段。鸡内金水溶性蛋白质/肽相对分子质量共显示63个肽相对分子质量峰,其中生干品计32个峰,炮制品31个峰。穿山甲炮制品水溶性蛋白质/肽相对分子质量共显示20个有意义相对分子质量峰。
结论:通过蛋白质芯片结合激光解析/离子化-飞行时间质谱技术,可以形成上述7种动物类中药蛋白质/肽成分相对分子质量指纹图,可作为这7种动物类中药数字化质控标准;并为进一步分离、纯化及验证这7种动物类中药功能相关活性蛋白质/肽组分提供可靠信息。