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关键词： 原发性高血压   病证结合   肝火亢盛证   生物学基础  

摘要： 目的 构建稳定的高血压病证结合动物模型,探寻临床四诊信息和模型动物的相似性和关联性,寻找能够反映高血压肝火亢盛证动物模型相对应的替代指征,明确其较为稳定的证候时间窗。结合高血压疾病与证候特征性基因共发生网络和高血压病证候与理化指标的文献研究结果,建立高血压肝火亢盛证宏观与微观相结合的特征性证候判别模式,初步揭示高血压肝火亢盛证的生物学基础,为高血压病的客观化诊断提供依据,为高血压中医药研发及药效学评价提供可靠的载体,搭建中医基础研究与临床研究沟通的桥梁。 方法 1采用GenCLip2.0online platform实时从Pubmed全文数据库中检索与原发性高血压相关的所有文献,对高血压病异常表达基因进行功能聚类分析,构建高血压疾病和证候的特异性基因共发生网络。 2结合KEGG通路富集分析、GO-ANALYSIS等文献挖掘技术,探寻高血压密切相关基因调控通路及蛋白信号分子,进一步构建高血压与应激相关基因的共发生网络。 3运用复杂系统熵数据挖掘技术,对高血压常见证型与理化指标之间的复杂关联性进行分析,从密切关联的指标中探寻不同证型高血压病的共性病理改变以及反映不同证型特有病理特征的核心指标。 4采用目前文献报道的与人类原发性高血压最为相似的2种高血压疾病模型：自发性高血压大鼠模型及应激性高血压大鼠模型,通过全面动态宏观表征采集、行为学试验以及微观理化指标的动态检测,进行疾病的稳定性评价,并结合临床四诊信息与动物表征的等效转化,进行证候属性的辨识。5基于现代社会人们所遭受的各种慢性社会、心理应激等高血压危险因子,分别给予高血压肝火亢盛证大鼠慢性温和应激和反复强烈应激,观测其应激状态下的宏观表征、行为学及微观理化指标的变化。 6采用Elisa法检测大鼠血清中文献研究结果所提示的与高血压证候密切相关的微观理化指标,免疫组织化学法对大鼠脑区的单胺类神经递质的表达进行定位分析,高效液相色谱法(HPLC)进行定量分析。 7运用氢核磁共振(1H-NMR)技术对高血压肝火亢盛证大鼠及其应激状态下血浆中的内源性小分子代谢产物的进行全面鉴定和差异性比较分析。 结果 1基因层面—高血压疾病与证候及应激调控基因的文献研究结果 原发性高血压(EH)密切相关前100位基因功能聚类分析结果：动态血压(昼夜节律)主要受ACE,AGT,AGTR1,ALB,AVP,B2M,CAT,CRP, EEF1A2,FLNA,LEP,NOVA2,PTH,REN,SOD1,TNF等基因调控;调控肾素-血管紧张素-醛固酮系统系统及交感神经系统活性的基因：ACE, ACE2, ADIPOQ, AGT, AGTR1, ALB, APOE, AVP, CCL2, CRP, CYP11B2, DBP, EDN1, EEF1A2, ELN, EPO, FOXD3, HMGCR, ICAM1, IGF1, IL1B, IL6,REN等;与血管内皮功能障碍相关的基因有ACE,ADIPOQ, AGT, AKT1, ALB, APOE, B2M, CALCA, CAT, CCL2, CD59, CRP, MAPK1, MME, NOS1, NOS3等。 EH密切相关基因KEGGATHWAY通路富集结果：Renin-angiotensin system:ACE, REN, ACE2, MME, AGT, LNPEP, AGTR1;Aldosterone-regulated sodium reabsorption: MAPK1, HSD11B1, NR3C2, HSD11B2, IGF1, INSR;Cytokine-cytokine receptor interaction Calcium signaling pathway:EDNRA,AGTR1, ADRB2, NOS1, ADRB1, NOS3, NOS2, HTR2A;NOD-like receptor signaling pathway:MAPK1, CARD8, IL6, TNF, CCL2, IL1B。 EH前100位基因中有61位基因与机体对外界应激的反应、机体内氧化应激反应以及应激保护等机制相关,其中20位基因与机体对外界的应激反应相关。 以高血压密切关联基因为背景基因,以高血压肝火亢盛证诊断标准中症状所对应的西医名称为关键词进行基因聚类分析,发现其中与高血压肝火亢盛证密切关联的基因主要为RAAS系统关键级联基因REN, ACE, AGT以及细胞色素P450家族CYP2D6。 2微观理化指标层面—高血压证候相关理化指标文献研究结果 文献研究结果提示与高血压肝火亢盛证型关联性较强的理化指标主要有超声心动、丙二醛、血栓素A2、前列腺素、血栓素B2、ACE、内皮素等;甘油三酯、低密度脂蛋白、颈动脉斑块积分、高密度脂蛋白及颈动脉内膜—中膜厚

关键词： 饲料   污染   定义   测量规程   脱氧核糖核酸(DNA)   大肠杆菌   食品检验   食品   食品检测   在体外   调查   实验室   实验室设备   实验室测试   实验室试验   微生物食品   微生物分析   微生物学   微生物   最低要求   核酸   聚合酶链反应(PCR)   聚合酶   聚合酶链反应   规范(验收)   试验   验证  

标准号: DIN CEN ISO/TS 13136-2013

关键词： 无动物血清   培养基脐带间充质干细胞   汗腺  

摘要： 大面积深度烧、创伤会造成皮肤的正常结构和功能严重受损，其中皮肤附属器如汗腺等结构的破坏及功能丧失将严重影响烧、创伤患者的生存质量。目前已有研究证明间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)能有效参与促进皮肤与汗腺损伤的修复与再生，有望促进烧、创伤后患者的修复效果并改善其生存质量。MSCs是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，目前在研究和临床上的应用也越来越广泛。我们前期的研究发现，骨髓来源的MSC（sBone marrow derived-MSCs，BMMSCs)在特定的诱导环境下能够成功地向汗腺样细胞分化并修复受损的汗腺组织。然而，受到细胞培养周期的限制，无法在烧、创伤治疗的早期得以应用，同时BMMSCs的获取须行骨髓穿刺术，给供者造成一定痛苦，且BMMSCs的增殖及分化潜能随供者年龄的增大而下降。因此，寻找新的MSCs来源是目前国内外干细胞研究的热点。 脐带作为MSCs的一种可靠来源，较骨髓容易获得，具有操作简便，来源丰富，分化能力强，对供者无伤害，移植物抗宿主病（GVHD）发生率低，干细胞所占比例大以及避免伦理争议等诸多优点，更有望应用于临床治疗。目前其多向分化潜能已得到证实，因此脐带来源间充质干细胞(umbilical cord derived-MSCs，UCMSCs)可以作为一种崭新的细胞治疗策略应用于烧伤后汗腺损伤修复再生研究。我们在前期研究中已初步发现UCMSCs在特定的诱导环境下具有向汗腺样细胞分化的潜能。然而，因培养条件以及血清使用、添加细胞因子种类等不同，造成不同批次的细胞表型、增殖能力、长期培养后的细胞功能以及向汗腺细胞的分化能力等存在较大差异，直接影响了UCMSCs在汗腺再生研究中的应用。因此亟待建立一种符合临床使用的非动物源性培养条件下UCMSCs分离、培养和鉴定方法以及向汗腺细胞分化的标准化体系，为开展进一步的基础研究和深入的临床前实验研究奠定实验基础。 本研究分为以下两部分：1.首先，建立非动物源性培养条件下UCMSCs分离、培养与鉴定体系，采用流式细胞术检测细胞的表面抗原的表达、分析细胞的增殖活性。2.建立非动物源性培养条件下UCMSCs向汗腺细胞分化体系，采用流式细胞术、RT-PCR、western-blot以及染色体核型分析等鉴定分化后汗腺样细胞的标志物以及临床前应用的安全性。实验结果显示，UCMSCs在无动物血清的安全培养条件下依然能保持MSCs特有的生物学表型和增殖能力，且各组间无明显差异；经无动物血清汗腺分化培养基的诱导下，UCMSCs可以成功地向汗腺样细胞分化，诱导后细胞的汗腺标记物CEA，CK14，CK19以及汗腺发育基因EDA以及EDAR均为阳性表达，且分化能力与本组之前的汗腺诱导方法（添加动物血清）无显著差异，诱导后细胞经长期培养后检测染色体无畸变。以上实验结果为建立标准化的UCMSCs培养鉴定体系以及UCMSCs用于修复汗腺损伤的临床治疗和诱导后汗腺库的建立提供了可靠的理论依据和实验基础。

关键词： 进化生物学   遗传资源   种质资源   昆明动物研究所   国家重点实验室   科学院   中华人民共和国  

摘要： 中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室将于2013年8月9日-18日举办"进化生物学"暑期班。暑期班期间将邀请本领域著名专家学者进行进化生物学专题讲座并邀请本所专家介绍本领域研究前沿进展,组织学员开展经典论文的报告和辩论,促进学员间的学习交流,引导和培养学生思考生物学问题的正确方法,还将组织学生参观遗传资源与进化国家重点实验室、昆明动物博物馆等。

关键词： 特种经济动物   分子生物学   SKLMBSEA   国家重点实验室   省部共建   培育基地   吉林省  

摘要： 总体定位特种经济动物分子生物学省部共建国家重点实验室仅仅围绕国家重大需求和国际动物学科发展的方向与前沿研究领域,重点开展特种经济动物优异种质资源基因组学、特种经济动物分子育种学、特种经济动物分子调控、特种经济动物组织细胞工程、特种经济动物特有的生物学特征等研究,为建立特种经济动物分子生物学理论体系奠定坚实的基础

关键词： 梨形虫鉴定   泰勒虫   Colpodella   巴贝虫   动物感染   半巢式多重PCR  

摘要： 梨形虫(Piroplasma)属顶复门(Apicomplexa)、孢子虫纲(Sporozoa)、梨形虫目(Piroplasmida),对人畜健康影响较大的蜱传种类分别属于巴贝虫属(Babesia spp.)和泰勒虫属(Thelieria spp.),可引起梨形虫病[1],由于过去梨形虫曾译为“焦虫”,故梨形虫病又被称为“焦虫病”,也曾称“红细胞住血原虫(hematocytozoon)"。 梨形虫经由蜱传播,在宿主体内的主要形态呈圆形、梨形、杆形、椭圆形、逗点形或阿米巴形等形态,具有顶复细胞器。有性生殖和孢子增殖是在无脊椎动物宿主体内进行,在脊椎动物宿主体内进行无性生殖。梨形虫病一般呈急性过程,通常表现为贫血、血红蛋白尿和黄疸,具有明显的季节性和地区性,巴贝虫是人和动物巴贝虫病的病原,而泰勒虫是动物泰勒虫病的病原[3-6]。一般认为,泰勒虫不感染人类。梨形虫病在世界各地流行,死亡率高,给畜牧业和国民经济造成重大损失。 梨形虫的鉴定与分类主要有传统分类学和分子分类学两种方法。传统分类学依据所寄生的宿主、形态、发病动物临床症状等进行分类,但由于病原形态的多变性,生活史较难追踪,传播媒介多样性,种种因素使传统分类学存在一定的局限[8]。随着分子生物学技术的发展,核酸扩增方法在梨形虫的分类鉴定有着决定性的作用。 本研究将取自有临床症状的病人带虫血液分别对四种动物(昆明鼠,Balb/c小鼠,沙鼠,新西兰兔)进行感染,感染后定期取血观察血液内病原体的形态特征,并观察超微结构,从形态学上对该梨形虫进行鉴定。在该梨形虫在动物体内的感染量达到峰值的时候,取动物血液提取DNA,扩增梨形虫18S rRNA,对该梨形虫进行分子生物学鉴定。 在动物血液涂片的观察中发现,该梨形虫在白细胞内细胞核周围呈密集的点状,类似嗜碱性白细胞。在红细胞中可以观察到梨形、椭圆形、逗点状的外观形态。与巴贝虫和泰勒虫的形态对比有相似之处,具有泰勒虫的特征,即白细胞内裂体增殖,提示该病原体有可能是泰勒虫相关种类。 根据文献报道,合成四条针对巴贝虫、泰勒虫18S rRNA的通用引物进行半巢式多重PCR,三次PCR扩增的片段均与泰勒虫具有更高的同源性,对PCR产物经克隆测序364bp序列比对,与泰勒虫18S rRNA同源性达到99%。 但是,在多次重复的PCR中,也出现克隆序列与Colpodella序列84%同源性。而我国学者也在发热病人血液中扩增到Colpodella相似序列,Colpodella是一种与其它顶复门原虫(包括疟原虫及梨形虫)具有并列进化关系的自由生活原虫[11]。 本研究所鉴定梨形虫取自病人血液,通过传统形态学鉴定与分子生物学鉴定相结合,从动物外周血白细胞中发现裂殖体,提示该虫具有泰勒虫的形态特征。综合多次PCR及测序结果,扩增序列与泰勒虫和Colpodella的相似程度高于巴贝虫,说明该病原体是巴贝虫的可能性小于前两种虫。迄今为止,寄生虫学研究认为,巴贝虫可以感染人和动物,泰勒虫仅在动物中发现,但从NCBI的GenBank中搜索到一个泰勒虫的序列是从发热病人血液扩增得到的[12]；Colpodella相似的序列也有从人体扩增的报道。这种现象尚难以解释,不能确定是几种病原体的混合感染,还是一种尚待认知的新虫种。泰勒虫和巴贝虫属于顶体复合物门,而Colpodellids门则是与顶体复合物门相近的一个姊妹世系(sister lineage),因而,该病原体的分类地位可能在囊泡虫总门(Alveolata)。其确切的分类地位有待进一步鉴定。 本本研究对一种未知人体寄生原虫的鉴定,其结果对该新病原体的认知又进了一步,对于未知梨形虫病的防治积累基础理论,对临床中的未知原虫感染患者提供了相应的鉴别方法,也为人群中该病的流行病学调查奠定了基础,对防治该新出现的血液感染性病原体具有重要的意义。

关键词： 特种经济动物   SKLMBSEA   分子生物学   国家重点实验室   省部共建   培育基地   吉林省  

摘要： 总体定位特种经济动物分子生物学省部共建国家重点实验室紧紧围绕国家重大需求和国际动物学科发展的方向与前沿研究领域,重点开展特种经济动物优异种质资源基因组学、特种经济动物分子育种学,特种经济动物分子调控,特种经济动物组织细胞工程,特种经济动物特有的生物学特性等研究,为建立特种经济动物分子生物学理论体系奠定坚实的基础,使我国特种经济动物分子生物学在整体水平上达到国际先进水平。

关键词： DATABASES   VERTEBRATES   PALEONTOLOGY   ONLINE library catalogs   ONLINE information services   PALEONTOLOGISTS  

摘要： Data, whether images, measurements, counts, occurrences, or character codings, are a cornerstone of vertebrate paleontology. Every published paper, master's thesis, and doctoral dissertation relies on these data to document patterns and processes in evolution, ecology, taphonomy, geography, geologic time, and functional morphology, to name just a few. In turn, the vertebrate paleontology community relies on published data in order to reproduce and verify others' work, as well as to expand upon published analyses in new ways without having to reconstitute data sets that have been used by earlier authors and to accurately preserve data for future generations of researchers. Here, we review several databases that are of interest to vertebrate paleontologists and strongly advocate for more deposition of basic research data in publicly accessible databases by vertebrate paleontologists.

关键词： 饲料   细菌病毒   污染物   定义   食品检验   食品   食品检测  

标准号: ISO/TS 15216-2-2013

摘要： ISO/TS 15216-2:2013 describes a method for qualitative detection of HAV and NoV genogroups I (GI) and II (GII), from test samples of foodstuffs or food surfaces. Following liberation of viruses from the test sample, viral RNA is then extracted by lysis with guanidine thiocyanate and adsorption on silica. Target sequences within the viral RNA are amplified and detected by real-time RT-PCR. This approach is also relevant for detection of the target viruses on fomites, or of other human viruses in foodstuffs, on food surfaces or on fomites following appropriate validation and using target-specific primer and probe sets.

关键词： 采样   多样性估计   稀疏化   曲线拟合   华夏正形贝  

摘要： 传统的古生物学采样方法通常很少对同一化石层面展开进行,由此得到的多样性信息往往难以反映化石组合的真实情况。通过观察稀疏化曲线平缓程度来判断化石采样是否充分的经验方法并不严谨。本文在介绍古生物化石采样方法的基础上,提出采样是否充分的本质是采样获得的多样性与所属化石群落潜在多样性之间的接近程度。借鉴现代生物学中的多样性估计方法,以华夏正形贝腕足动物群为例,本研究采用EstimateS软件,定量估计4个化石点的潜在多样性;探讨客观判断采样充分的方法,同时通过曲线拟合法预测达到特定多样性可能需要的样本数量,为二次研究提供重要信息。该多样性估计方法是古生物研究中一个较新的领域,在多样性对比及特定化石群的多样性评估中均有较好应用前景。为得到更全面的多样性信息,文章建议相关研究在使用稀疏化的同时辅以多样性估计方法。