关键词:
间充质干细胞
脐带
骨髓
移植物抗宿主病
免疫
分化
造血
小鼠
摘要:
间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是具有自我复制和多向分化潜能的一类多能干细胞。目前成人骨髓是MSC的主要来源。骨髓间充质干细胞的获取须行骨髓穿刺术,给供者造成一定痛苦,且骨髓间充质干细胞的增殖及分化潜能随供者年龄的增大而下降,因此,寻找新的MSC来源成为国内外干细胞研究领域的热点。本研究从足月胎儿脐带中分离出MSC,对其生物学特征、免疫学特征及抗急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease, aGVHD)的作用进行系统研究,旨在寻找MSC的新来源。
本实验第一部分建立从脐带中分离MSC的方法,并与成人骨髓源MSC对比,研究脐带源MSC的生物学特征。结果显示,脐带源MSC的分离成功率达100%;与骨髓源MSC相比,脐带源MSC成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)比例、增殖能力和神经细胞诱导分化能力均高于骨髓源MSC,HLA-I和CD106分子表达低于骨髓源MSC(P<0.05)。脐带源MSC形态、大多数分子表型(CD13、CD29、CD44、CD105、CD73、CD166阳性,CD14、CD34、CD38和CD45阴性,CD31阴性)、细胞周期状态(超过80%的细胞处于G0/G1期)、脂肪和骨诱导分化能力、细胞因子分泌(表达SCF、TPO、FL、IL-6、M-CSF、LIF、SDF-1和VEGF,不表达IL-3)和长期支持造血的能力与骨髓源MSC相似。
本实验第二部分研究脐带源MSC的免疫学特征。免疫表型分析显示,脐带源MSC表达HLA-I,不表达HLA-DR,不表达协同刺激分子CD80、CD86和CD40。3H-胸腺嘧啶核苷(3H-Tdr)掺入法检测淋巴细胞增殖结果显示,脐带源MSC不刺激小鼠淋巴细胞增殖,且可显著抑制小鼠混合淋巴细胞反应。
本实验第三部分通过GVHD小鼠模型初步研究了脐带源MSC对aGVHD的影响。对GVHD鼠生存时间、GVHD靶器官(肝脏、小肠和皮肤)病理改变、淋巴细胞亚群和细胞因子水平的研究结果证明,脐带源MSC静脉输入可显著减轻小鼠半相合移植模型aGVHD的严重程度。其机制可能与增高Th2细胞因子