关键词：
三百棒
MH7A细胞
NF-κB
IL-6
IKK
IRAK-1
摘要：
目的:基于TLR/NF-κB信号通路研究探讨土家族药三百棒抑制RA滑膜增殖的作用机制。方法:观察三百棒醇提物对MH7A细胞的生长抑制作用:CCK-8法检测不同浓度(0、50、37.5、18.75μg/ml)三百棒醇提物分别作用3h,6h,12h时对MH7A细胞的生长抑制作用。采用实时无标记细胞功能分析仪检测不同浓度(0、50、37.5、18.75μg/ml)三百棒醇提物作用不同时间段时对MH7A细胞生长抑制作用。流式细胞术检测不同浓度(0、50、37.5、18.75μg/ml)三百棒醇提物作用3h、6h、12h时对MH7A细胞的诱导凋亡作用。检测三百棒醇提物对MH7A细胞NF-κB、IL-6、IKK、IRAK-1m RNA基因转录水平的影响:采用RT-PCR检测不同浓度(0、50、37.5、18.75μg/ml)三百棒醇提物作用3h、6h、12h时MH7A细胞NF-κB、IL-6、IKK、IRAK-1转录水平的变化。结果:1三百棒醇提物对MH7A细胞的生长抑制作用:浓度为50、37.5、18.75μg/ml的三百棒醇提物分别作用MH7A细胞3h、6h、12h,在相同时间内,随着三百棒浓度的增加,其增殖抑制作用增加;当三百棒醇提物浓度相同时,作用时间越长,其增殖抑制作用增加。差异具有统计学意义(P<0.01)。2无标记细胞功能分析仪检测不同浓度三百棒醇提物作用不同时间段时对MH7A细胞生长抑制作用:加入不同浓度三百棒醇提物实时检测MH7A细胞80小时,得到结果600μg/ml、300μg/ml、150μg/ml与75μg/ml药物浓度毒性作用大,50、37.5、18.75μg/ml药物浓度时,MH7A细胞增殖抑制作用显著。3流式细胞术检测三百棒醇提物作用后MH7A细胞的凋亡情况:MH7A细胞经0-50μg/ml药物浓度分别刺激3h、6h、12h。其中,3h时0-50μg/ml药物浓度凋亡率分别为6.50%、11.7%、18.2%、23.2%;6h时0-50μg/ml药物浓度凋亡率分别为4.73%、10.2%、17.4%、29.7%;12h时0-50μg/ml药物浓度凋亡率分别为5.45%、13.5%、15.0%、29.4%;各实验组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。4 RT-PCR检测三百棒醇提物对MH7A细胞NF-κB、IL-6、IKK、IRAK-1m RNA基因转录水平的影响:经LPS刺激的MH7A细胞经0-50μg/ml三百棒醇提物分别作用3h、6h、12h后,在三个时间点中空白对照组IRAK-1、IKK、NF-κB、IL-6m RNA表达未见明显变化;MH7A+LPS组IRAK-1、IKK、NF-κB、IL-6m RNA的表达明显高于空白对照组与MH7A+LPS+三百棒醇提物干预组,(P<0.05);而MH7A+LPS+三百棒醇提物干预组IRAK-1、IKK、NF-κB、IL-6m RNA的表达在50μg/ml浓度时,降低最多(P<0.05),37.5μg/ml浓度时,也呈降低趋势,但未及50μg/ml浓度时下降明显。而18.75μg/ml药物浓度时,IRAK-1、IKK、NF-κB、IL-6m RNA降低不明显,与空白对照组比较无明显差异。各实验组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:1三百棒能够抑制MH7A细胞的增殖。在0-50μg/ml范围内,其抑制率随三百棒浓度的增高、作用时间的延长而增高。2三百棒能够诱导MH7A细胞凋亡。流式细胞术结果可知,三百棒醇提物可诱导MH7A细胞凋亡,药物浓度越高,凋亡率越高。3三百棒对于MH7A细胞的增殖抑制与诱导凋亡可能与抑制NF-κB、IL-6、IKK、IRAK-1m RNA基因转录的表达有关,三百棒可能通过抑制TLR/NF-κB信号通路中相关细胞因子的表达,从而抑制了NF-κB的入核,从而达到抑制炎性因子的释放,抑制了滑膜的增殖。
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