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关键词： 宫颈肿瘤   多倍体肿瘤细胞   辐射   STAT3  

摘要： 目的研究辐射诱导的多倍体宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的生物学特性,以探讨多倍体HeLa细胞利于宫颈癌放疗后复发的潜在作用。方法使用6 MV-X射线分别以7 Gy、14 Gy的剂量照射HeLa细胞,继续孵育3 d后收集细胞并标记为7 Gy组和14 Gy组,将未经辐射的细胞作为对照组。光镜下观察细胞形态,流式细胞术检测细胞DNA倍性,MTT法检测细胞增殖,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭的能力,蛋白质印迹法检测细胞STAT3信号通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,7 Gy组和14 Gy组HeLa细胞体积明显增大。对照组、7 Gy组、14 Gy组多倍体HeLa细胞亚群比例分别为(6.33±1.26)%、(21.13±0.50)%、(46.07±1.68)%,3组间差异具有统计学意义(F=780.47,P<0.001)。对照组、7 Gy组和14 Gy组多倍体HeLa细胞培养24 h后吸光度值分别为0.21±0.01、0.23±0.02、0.16±0.01;48 h后分别为0.37±0.03、0.38±0.06、0.21±0.00;72 h后分别为0.66±0.02、0.55±0.01、0.28±0.01,3组间增殖情况差异有统计学意义(F=31.62,P=0.001;F=20.10,P=0.002;F=708.52,P<0.001)。进一步两两比较,培养24、48、72 h后14 Gy组多倍体HeLa细胞增殖活力均较对照组细胞和7 Gy组多倍体HeLa细胞显著下降(均P<0.05)。对照组、7 Gy组和14 Gy组多倍体HeLa细胞的凋亡亚群比例分别为(3.67±1.16)%、(3.07±0.81)%、(3.83±0.91)%,其中早期凋亡细胞亚群比例分别为(2.33±0.35)%、(2.13±0.61)%、(2.23±0.32)%,晚期凋亡细胞亚群比例分别为(1.33±0.81)%、(0.93±0.31)%、(1.60±0.60)%,差异均无统计学意义(F=0.52,P=0.620;F=0.15,P=0.864;F=0.92,P=0.450)。对照组、7 Gy组和14 Gy组的多倍体HeLa细胞迁移数目分别为297.40±26.53、121.33±15.16、18.40±4.79,侵袭细胞数目分别为195.67±20.26、63.60±6.91、9.47±3.23,差异具有统计学意义(F=647.28,P<0.001;F=213.94,P<0.001)。7 Gy和14 Gy组多倍体HeLa细胞的迁移与侵袭能力与对照组相比显著下降,14 Gy组多倍体HeLa细胞的迁移与侵袭能力显著低于7 Gy组(均P<0.001)。辐射诱导的多倍体HeLa细胞P-STAT3(Tyr 705)、Bcl-2的表达水平均高于对照组,且随着辐射剂量的增加表达水平进一步增高;与对照组相比,14 Gy组多倍体HeLa细胞Survivin、Mcl-1表达水平均上调(均P<0.05)。3组间Bcl-xL表达差异无统计学意义(F=0.52,P=0.618)。结论辐射诱导的多倍体HeLa细胞增殖、迁移及侵袭能力降低,凋亡率无显著变化,但STAT3信号通路激活伴随下游抗凋亡相关蛋白表达上调,有利于多倍体肿瘤细胞成为宫颈癌放疗后复发的潜在危险因素。

关键词： 自主命题   探究情境   生物育种   现代育种技术   细胞生物学   基因工程育种   多倍体育种   单倍体育种  

摘要： 生物育种是遗传学、细胞生物学、现代生物工程技术等方法原理培育生物新品种的过程.高中阶段的生物学中,主要涉及常规育种(包括杂交育种、诱变育种、单倍体育种、多倍体育种等)和现代育种技术育种(包括基因工程育种、细胞工程育种等).生物育种涉及遗传学、细胞生物学、分子生物学、生理学等诸多知识,并且与实际生产紧密结合,相对容易创设实践和探究情境,是高考的热点之一.一、考情分析通过比较近五年的全国卷和部分自主命题试卷发现,生物育种知识的考查题型变化较大,灵活度较高.

关键词： “互联网+”   干细胞生物学   教学改革   混合教学  

摘要： “互联网+”正给高校本科教学带来一场深刻变革。干细胞生物学作为生命科学和再生医学领域的研究热点,已成为各高校生物基础课程教学改革的重要组成。本文对比了课堂教学和线上教学这两种模式在《干细胞生物学》教学中特点和优劣,探讨了如何在后疫情时代推动《干细胞生物学》课程的“互联网+”教学改革。

关键词： 脾酪氨酸蛋白激酶抑制剂   R406   类风湿关节炎   滑膜成纤维细胞   白细胞介素6   白细胞介素8   趋化因子配体2   细胞生物学功能   小鼠  

摘要： 目的探讨R406(free base)对人类风湿关节炎关节滑膜成纤维细胞(RASFs)炎性因子分泌的抑制及生物学功能(侵袭、迁移和凋亡)的调节作用,观察R406对关节炎小鼠关节炎症的缓解作用。方法取3~7代生长的RASFs,分为实验组、阴性对照组和阳性对照组。实验组分别用1、10、50、100 ng/mL R406和10 ng/mL IL-1β干预,阴性对照组加入DMSO,阳性对照组加入DMSO和10 ng/mL IL-1β干预。干预24 h,采用qRT-PCR法检测各组炎性因子IL-6、IL-8、CCL2 mRNA。选择最适浓度(50 ng/mL)的R406作用于RASFs(实验组)不同时间(6、12、24、48 h),阴性对照组及阳性对照组处理方法同上,采用qRT-PCR检测各组IL-6、IL-8、CCL2 mRNA,ELISA法检测各组IL-6、IL-8、CCL2蛋白,Trans Well检测各组RASFs的侵袭能力;划痕法检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率。建立Ⅱ型胶原诱导型关节炎(CIA)模型鼠,将18只8周龄的DBA 1/J小鼠平均分为实验组、阴性对照组和阳性对照组。实验组诱发CIA后腹腔注射R406,200 mg/kg,每两天注射1次;阴性对照组不诱发CIA;阳性对照组诱发CIA后腹腔注射等量DMSO,每两天注射1次。R406治疗30 d后,ELISA法检测各组小鼠血清中炎性因子IL-6、IL-8、IL-1α、COMP。结果与阳性对照组比较,实验组中不同剂量R406作用后RASFs中炎性因子IL-6、IL-8、CCL2 mRNA表达被抑制,且在50 ng/mL时抑制效果最为显著(P均<0.01)。与阳性对照组比较,实验组中50 ng/mL R406作用于RASFs不同时间,细胞中炎性因子IL-6、IL-8、CCL2蛋白的表达均被抑制,且在24 h抑制效果最显著(P均<0.01);与阳性对照组比较,实验组RASFs上清液中炎性因子IL-6、IL-8、CCL2水平降低(P均<0.01)。与阳性对照组比较,实验组RASFs侵袭和迁移数均降低,凋亡率增加(P均<0.05)。与阳性对照组比较,实验组小鼠血清中炎性因子IL-6、IL-8、IL-1α、COMP水平降低(P均<0.01)。结论R406可以抑制RASFs中炎性因子的分泌,调节RASFs侵袭、迁移、凋亡能力,对CIA模型鼠关节炎症具有抑制作用。

关键词： 肺肿瘤   腺癌   细胞增殖   细胞凋亡   细胞运动   分泌磷酸蛋白1  

摘要： 目的探讨分泌磷酸蛋白1(SPP1)在肺腺癌(LUAD)中的表达情况及对LUAD细胞生物学功能的影响。方法通过UALCAN、GEPIA数据库分析SPP1 mRNA在LUAD中的表达情况,GEPIA、K-M数据库分析SPP1 mRNA表达与预后的关系;通过实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测SPP1在LUAD组织及细胞系中表达情况。构建SPP1干扰序列并将其转染入A549细胞中,设为Blank组(不转染)、NC组(转染NC序列)、si SPP1组(转染si SPP1序列)。Western blot检测细胞中SPP1沉默效果;CCK-8、EdU、细胞克隆形成实验检测si SPP1对LUAD细胞增殖能力的影响;TUNEL实验检测si SPP1对LUAD细胞凋亡的影响;Transwell和划痕实验检测si SPP1对LUAD细胞侵袭和迁移能力的影响。结果生物信息数据库分析显示,SPP1 mRNA在LUAD中高表达(P<0.05),且SPP1 mRNA高表达者累积生存率较低(P<0.05);LUAD组织及A549细胞中SPP1均高表达(P<0.05);沉默SPP1表达能够抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡(P<0.05)。结论SPP1可作为肺腺癌诊治的潜在靶点,其可能通过调控细胞增殖、迁移及侵袭等特性影响肺腺癌的发生、发展。

关键词： 上海交通大学   基础医学院   分子细胞生物学   脑科学   雪梅  

摘要： 2022年5月23日,上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系童雪梅教授课题组、上海市免疫学研究所李斌研究员课题组和复旦大学附属华山医院/脑科学与转化研究院杨辉研究员等合作在Nature Metabolism杂志在线发表题为Non-oxidative pentose phosphate pathway controls regulatory T cell function by integrating metabolism and epigenetics的研究论文,揭示了非氧化磷酸戊糖途径(非氧化PPP)调控调节性T细胞(Treg)功能的新作用及其机制。

关键词： 生命的化学   生物化学   细胞生物学   课程整合   教学改革  

摘要： 医学课程体系的整合是培养21世纪复合型医学人才的必由之路。2013年以来,安徽医科大学开始了五年制临床医学专业整合课程的教学改革试点,其中生物化学与分子生物学和细胞生物学被整合为生命的化学。整合课程在实施过程中组织了跨学科教学团队,在原有生物化学和细胞生物学整合的基础上添加了原生理学中细胞的生物电专业知识,创新了教学内容,贯彻了以学生为中心和自主学习的教学理念;逐渐摸索建立了形成性评价体系进行课程考核和成绩评定,取得了较好的教学效果。

关键词： 多发性骨髓瘤   微RNA-19a   Hedgehog信号通路   SMO蛋白  

摘要： 目的探索miRNA-19a对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和转移的影响,及对SMO蛋白和Hedgehog信号通路的影响。方法人骨髓瘤细胞系U266B1、LP-1、RPMI 8226和NCI-H929为研究模型,首先检测4种细胞中SMO蛋白的背景表达,然后使用U266B1细胞作为模型,设计了miRNA-19a inhibitor,以此建立miRNA-19a敲低组、对照质粒组和空载组。探究miRNA-19a敲减后细胞中SMO蛋白含量以及细胞增殖、凋亡和转移的变化。采用MTT法检测细胞毒性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell试验检测细胞侵袭能力。结果SMO蛋白在U266B1、LP-1、RPMI 8226和NCI-H929细胞系中表达量分别为0.925±0.057、0.889±0.067、0.904±0.075、0.507±0.048,其中以NCI-H929细胞系中表达量较低(P<0.05)。MiRNA-19a敲低组、对照质粒组和空载组miRNA-19a含量分别为0.325±0.058、1.158±0.128、1.172±0.131,miRNA-19a敲低组miRNA-19a含量显著降低(P<0.05)。对照质粒组、miRNA-19a敲低组和空载组SMO蛋白表达量分别为0.787±0.104、0.354±0.068、0.807±0.106,miRNA-19a敲低组SMO蛋白含量明显降低(P<0.05)。MTT实验显示,miRNA-19a敲低组细胞增殖OD值在24~72 h内明显低于空载组和对照质粒组(均P<0.05)。凋亡实验显示,miRNA-19a敲低组细胞凋亡率明显高于空载组和对照质粒组(均P<0.05)。Transwell实验显示,miRNA-19a敲低组侵袭细胞数明显低于其他2组(均P<0.05)。结论miRNA-19a/SMO蛋白可能是骨髓瘤细胞系U266B1中控制细胞恶性增长的关键信号,可以作为多发性骨髓瘤治疗的潜在靶点。

关键词： 间质干细胞   脂肪组织   细胞衍生微粒   外泌体   血管再生诱导因子  

摘要： 目的探讨不同浓度人脂肪间充质干细胞(hADMSCs)来源类外泌体纳米囊泡(NVs)和外泌体(EXOs)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)生物学功能的影响。方法 (1)通过水动力抽脂方式, 从2019年6月至2020年8月就诊于福建医科大学附属协和医院的10例女性大腿获取脂肪组织(年龄18~65岁), 通过酶解分离提取第4代hADMSCs, 对其进行成脂、成骨诱导分化, 流式细胞仪鉴定其表面蛋白标志物。(2)制备hADMSCs-NVs和hADMSCs-EXOs并电镜观察其形态, 以粒径分析仪分析其表面蛋白标志物, 通过纳米颗粒跟踪仪分析颗粒大小, 通过蛋白定量和纳米颗粒跟踪仪分别检测1×10;个hADMSCs产生的NVs和EXOs总蛋白含量和颗粒数。(3)设置对照组(加入等量基础培养基)、40、60、80 μg/ml NVs组和20、40、60 μg/ml EXOs组, 分别通过CCK-8增殖实验、细胞划痕试验、血管形成实验检测各组HUVECs增殖、迁移、血管再生能力。采用Graphpad Prism 7.0进行统计分析, 计量资料以±s表示, 多组间比较应用重复测量方差分析, 组间两两比较应用Tukey检验, P<0.05表示差异有统计学意义。结果 (1)光学显微镜下观察到第4代hADMSCs形态呈细长纺锤状;成脂诱导21 d后, 油红O染色可见细胞内透明的脂滴被染成红色;成骨诱导14 d后, 碱性磷酸酶钙钴法染色可见大量棕黑色着色区;hADMSCs表面蛋白标志物CD90、CD29为阳性。(2)透射电镜下可见hADMSCs-NVs和EXOs结构相似, 都呈盘状囊泡;NVs和EXOs表面蛋白标志物CD9、CD81、IgG表达量相似;NVs和EXOs两者的粒径大小大致相同, 分别为(72.00±21.51)nm和(81.27±22.37)nm;1×106个hADMSCs产生的NVs总蛋白含量为(140.7±5.1) μg, 是EXOs的[(1.3±0.3) μg] 100倍左右;NVs颗粒数[(644.5±17.1)×108个/ml]是EXOs[(7.1±0.1)×108个/ml]的90倍左右。(3)CCK-8增殖实验中, 培养12、24、48 h各组HUVECs生长趋势较为一致, 吸光度值比较差异有统计学意义(P<0.01);培养48 h, 60 μg/ml NVs、40 μg/ml EXOs组吸光度值均大于对照组(均P<0.01), 而两实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。细胞划痕后8、24 h, 各组划痕宽度改变不完全相同, 差异有统计学意义(P<0.01);划痕后24 h, 60 μg/ml NVs、40 μg/ml EXOs组划痕宽度改变均大于对照组(均P<0.01), 而两实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。血管形成实验中, 各组血管分支点数量与血管长度不完全相同, 差异有统计学意义(P<0.01);60 μg/ml NVs、40 μg/ml EXOs组HUVECs形成的毛细血管分支点数量均多于对照组(均P<0.01), 而两实验组之间差异无统计学意义(P>0.05);60 μg/ml NVs、40μg/ml EXOs组毛细血管长度均长于对照组(均P<0.01), 而两实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 hADMSCs-NVs的形态、大小与EXOs相似, 而总蛋白量却是EXOs的100倍左右;hADMSCs-NVs和EXOs对HUVECs生物学功能的作用相近, 两者最适宜的浓度分别为60 μg/ml和40 μg/ml。

关键词： 丹参酮Ⅱ_(A)   丹酚酸B   脂质体   人皮肤成纤维细胞   增生性瘢痕  

摘要： 目的制备丹参酮Ⅱ_(A)(tanshinoneⅡ_(A),TSA)和丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)共载脂质体(TSA-SAB脂质体),并考察其对人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblasts,HSF)增殖的抑制作用。方法薄膜分散-pH梯度法制备出TSASAB脂质体,对其形态、粒径分布、ζ电位、包封率、初步稳定性、体外释药行为和透皮性能等进行表征;CCK-8法、细胞划痕法和Transwell小室法分别考察TSA-SAB脂质体对HSF细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;Western blotting法考察其对基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和I型胶原(type I collagen,COL-I)蛋白表达水平的影响。结果TSA-SAB脂质体粒径为(189.50±1.57)nm,ζ电位为(-18.73±1.41)m V,粒子分散系数为0.246±0.030,TSA和SAB包封率分别为(87.93±0.97)%和(91.20±0.47)%,稳定性良好,表现出持续缓慢的释药行为和良好的透皮性能,且能抑制HSF细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.01),同时显著增加MMP2的合成,降低COL-I的表达(P<0.01)。结论所制备的TSA-SAB脂质体粒径分布均匀,稳定性良好,包封率高,可延缓释放速率,提高药物的透皮性,对HSF细胞的增殖、迁移和侵袭均有较好的抑制作用,同时能提高MMP2的表达,抑制COL-I的过度生成,表明TSA-SAB脂质体可能对增生性瘢痕有防治作用。