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关键词： 乳腺癌   小核仁RNA宿主基因3(SNHG3)   上皮间充质转化   细胞周期  

摘要： 目的:探讨c-Myc靶向LncRNA SNHG3对乳腺癌细胞的生物学作用。方法:通过实时定量PCR(RT-qPCR)法分析c-Myc和LncRNA SNHG3在乳腺癌细胞中的表达情况;生物信息学分析c-Myc与LncRNA SNHG3的调控关系;采用染色质免疫沉淀实验(ChIP)和双荧光素酶报告基因实验验证它们的相互作用,并通过对c-Myc进行RNAi和过表达后,RT-qPCR和Western blot法检测SNHG3的表达变化;CCK8、划痕愈合和Transwell^(TM)实验分别检测细胞的增殖能力、横向迁移能力和纵向迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测细胞的周期分布;RT-qPCR和Western blot法检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子(Snail)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的mRNA和蛋白表达水平。结果:c-Myc和LncRNA SNHG3在乳腺癌细胞中异常高表达(P<0.001);生物信息学发现LncRNA SNHG3是c-Myc转录调控的主要靶标,且c-Myc在LncRNA SNHG3启动子区存在多个结合位点;LncRNA SNHG3与Myc信号通路成正相关(P<0.001)。实验结果证实c-Myc结合LncRNA SNHG3启动子,促进LncRNA SNHG3转录和表达(P<0.001);此外,功能挽救实验结果显示c-Myc靶向LncRNA SNHG3增加MDA-MB-231细胞的增殖数目,迁移与侵袭的穿膜数量(P<0.001)。RT-qPCR和Western blot结果显示过表达LncRNA SNHG3部分可抵消敲低c-Myc表达对细胞的EMT进程;并下调E-cadherin的表达(P<0.01),上调MMP2(P<0.01)、Vimentin(P<0.05)和Snail(P<0.05)的表达。干扰LncRNA SNHG3表达能将细胞周期阻滞在G_(0)/G_(1)期(P<0.001),cyclinD1表达减少(P<0.001)。结论:由c-Myc激活转录的LncRNA SNHG3一方面通过激活上皮间充质转化(EMT)促进乳腺癌细胞迁移、侵袭;另一方面通过加速G_(1)/S细胞周期进程促进乳腺癌细胞增殖。

关键词： 黄酒   氨基甲酸乙酯   尿素   精氨酸   代谢调控机制  

摘要： 氨基甲酸乙酯(EC)是发酵食品(面包、酸奶、大豆奶酪等)和酒精饮料(葡萄酒、清酒、黄酒等)在发酵过程中,含氮化合物不完全代谢产生的副产物,与乙醇自发反应产生的,对人体具有潜在遗传毒性和致癌性。黄酒是我国传统而独特的发酵酒,因独特的风味和较高的营养价值,而深受消费者的喜爱。然而,在传统黄酒中,氨基甲酸乙酯含量显著高于其它酒精饮料,对消费者健康构成潜在的安全隐患。降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量对黄酒产业的可持续发展具有重要意义。本文综述尿素、瓜氨酸及精氨酸分别在酿酒酵母及乳酸菌细胞中代谢调控机制,以及黄酒酿造过程中EC消减的方法。

关键词： 长链非编码RNA MT1JP   微小RNA-18a-5p   非小细胞肺癌   增殖   迁移   侵袭  

摘要： 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MT1JP靶向微小RNA(miR)-18a-5p对非小细胞肺癌恶性细胞生物学的影响。方法选择2018年6月到2021年6月河南省人民医院收治的71例非小细胞肺癌和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织lncRNA MT1JP和miR-18a-5p表达水平。采用对照慢病毒和lncRNA MT1JP慢病毒感染A549细胞,建立lncRNA组和MT1JP组细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和EdU染色分析两组细胞增殖;采用Transwell分析两组细胞侵袭;采用划痕实验分析两组细胞迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNA MT1JP的靶基因。组间比较采用t检验。结果癌旁组织lncRNA MT1JP表达水平(1.00±0.17)明显高于肺癌组织lncRNA MT1JP表达水平(0.37±0.18),差异有统计学意义(t=21.330,P<0.05)。癌旁组织miR-18a-5p表达水平(1.08±0.18)明显低于肺癌组织lncRNA MT1JP表达水平(2.23±0.20),差异有统计学意义(t=36.040,P<0.05)。lncRNA组细胞活力(1.67±0.09)和细胞EdU染色阳性率[(61.83±4.88)%]明显高于MT1JP组细胞活力(1.10±0.05)和细胞EdU染色阳性率[(33.17±3.31)%],差异有统计学意义(t=12.940、10.760,P<0.05)。miR-NC组细胞活力(1.63±0.06)和EdU染色阳性率[(61.33±4.46)%]明显高于miR-18a-5p沉默组细胞活力(1.14±0.09)和和EdU染色阳性率[(33.00±4.73)%],差异有统计学意义(t=10.760、10.680,P<0.05)。lncRNA组细胞划痕愈合率[(70.22±3.41)%]和侵袭数量[(111.83±10.09)个]明显高于MT1JP组[(35.42±3.82)%]和侵袭数量[(64.17±7.81)个],差异有统计学意义(t=16.620、9.153,P<0.05)。miR-NC组划痕愈合率[(73.72±3.82)%]和侵袭数量[(117.33±7.79)个]明显高于miR-18a-5p沉默组[(43.40±4.70)%]和侵袭数量[(56.67±10.29)个],差异有统计学意义(t=10.540、11.520,P<0.05)。结论lncRNA MT1JP在非小细胞肺癌中低表达,通过靶向miR-18a-5p,进而参与非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭等过程。

关键词： 细胞生物学实验   教学改革   精细化教学  

摘要： 细胞生物学实验是生命科学相关专业的实践类专业基础课程,教学工作者已经从教材内容、教学方法及实验设计等方面进行了大量的教改探索,然而,我们在教学实践中发现,尽管采用了近年来广受欢迎的混合式教学法、综合性实验设计等教改方法,但学生从实验中获得的技能水平和对课程的认知水平并未显著提高。本文认为,教改不仅要体现在宏观上,更要体现在每堂课的教学细节上,因为这些细节会给学生带来更多的思考,更容易使学生获得成就感。本文从文献阅读、实验准备、实验结果分析及实验报告撰写等方面对细胞生物学实验的教学细节进行探讨,以期改善细胞生物学实验教学的质量。

关键词： 细胞生物学   实验教学   创新能力  

摘要： 为了促进对学生科研创新能力的培养,以临床医学问题为出发点,设计了综合性、探究性、半自主性肿瘤细胞生物学实验。采用线上线下混合式教学的形式,引导鼓励学生自主设计实验方案并实施实验。对学生实验结果和期末成绩的评估以及问卷调查的结果显示,学生能按照实验设计获得相应的实验结果,达成实验目标。学生认可该实验内容及设计,描述该实验时所用词频最高的3个词为“有趣”“实用”和“挑战性”。对照组和实验组学生的课程期末考试成绩没有显著差异,但对于平均绩点大于或等于4.5的实验组学生在细胞学与生物化学课程期末考试中的得分显著高于对照组学生。综上,该实验设计具有可行性、吸引力和创新性,可提高学生科研创新能力。

关键词： 含Sushi重复蛋白X连锁2   基因敲除   肺腺癌   A549细胞   生物学特性  

摘要： 目的探讨含Sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)基因敲除对肺腺癌人类肺泡基底上皮细胞A549细胞生物学特性的影响。方法根据是否敲除SRPX2基因将对数生长期的A549细胞分为对照组和敲除组,敲除组细胞采用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)-CRISPR相关蛋白9基因编辑技术敲除SRPX2基因,对照组细胞常规传代培养。采用聚合酶链式反应法、琼脂糖凝胶电泳以及DNA测序验证是否成功敲除SRPX2基因。采用流式细胞术检测2组细胞周期,细胞计数试剂盒法检测2组细胞增殖情况,Transwell小室实验检测2组细胞迁移能力。结果琼脂糖凝胶电泳及DNA测序结果均显示敲除组细胞成功敲除68 bp SRPX2基因部分序列。培养24 h时,敲除组G_(0)/G_(1)及S期细胞所占比例显著低于对照组,G_(2)/M期细胞所占比例显著高于对照组(P<0.05);培养48 h时,敲除组S期细胞所占比例显著低于对照组,G_(2)/M期细胞所占比例显著高于对照组(P<0.05);培养48 h时,2组G_(0)/G_(1)期细胞所占比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养0、24、48、72、96 h时,对照组和敲除组细胞的增殖能力随时间的延长均呈升高趋势(F=244.463、87.198,P<0.05);培养0、24、48、72、96 h时,2组细胞的增殖能力比较差异均无统计学意义(P>0.05)。培养24 h时,对照组和敲除组迁移细胞数分别为(24.200±3.899)、(6.800±1.304)个;培养48 h时,对照组和敲除组迁移细胞数分别为(92.200±6.419)、(48.800±2.280)个;培养24、48 h时,敲除组迁移细胞数显著少于对照组(t=9.464、14.247,P<0.05)。结论敲除肺腺癌A549细胞中SRPX2基因能显著抑制细胞的迁移、阻滞细胞周期,SRPX2基因可能成为肺腺癌治疗的新靶点。

关键词： 超声辐照   miR-520c-3p   miR-132   卵巢癌   A2780/DDP细胞   GPC3   Hippo-YAP/TAZ通路  

摘要： 目的探讨超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对卵巢癌A2780/DDP细胞生物学活性影响,并进行机制研究。方法将对数生长期的A2780/DDP细胞随机分为A组(空白对照)、B组(微泡造影剂+超声辐照)、C组(miR-520c-3p mimics+miR-132 negative control+微泡造影剂+超声辐照)、D组(miR-132 mimics+miR-520c-3p negative control+微泡造影剂+超声辐照)、E组(miR-520c-3p mimics+miR-132 mimics+微泡造影剂+超声辐照),48h后收集细胞。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)测定miR-520c-3p、miR-132表达水平以及磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)信使核糖核酸(mRNA)相对表达量,蛋白免疫印迹法测定GPC3和Hippo信号通路蛋白相对表达量。MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果与A组和B组比较,C组和E组miR-520c-3p表达水平显著上调,D组和E组miR-132表达水平显著上调(P<0.05);与A组和B组比较,C组、D组和E组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率显著增加,穿膜细胞数和Yes相关蛋白(YAP)和TAZ蛋白相对表达量显著减少,其中E组变化最明显(P<0.05);与A组和B组比较,C组和E组GPC3蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。结论超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡可显著抑制卵巢癌A2780/DDP细胞增殖和迁移,并诱导其凋亡,作用机制可能与调节GPC3蛋白表达和Hippo-YAP/TAZ通路传导有关。

关键词： 岩藻糖基转移酶Ⅱ   前列腺癌   Wnt/β-catenin信号通路   细胞增殖  

摘要： 目的:探讨岩藻糖基转移酶Ⅱ(FUT2)对前列腺癌细胞生物学功能的影响及其潜在机制。方法:通过免疫组化技术检测FUT2在前列腺癌组织中的表达情况。利用脂质体转染技术构建低表达FUT2的前列腺癌细胞株及其对照细胞株,并通过MTT实验、平板克隆实验、Transwell实验检测干扰FUT2表达对前列腺癌细胞生物学功能的影响。采用Western blot检测β-catenin、Cyclin D1和ICAM-1等蛋白表达水平。结果:FUT2在前列腺癌组织中的表达水平明显升高(P<0.05)。干扰FUT2的表达后,前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,Cyclin D1表达下调,ICAM-1表达上调(P<0.05)。结论:FUT2促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

关键词： 泌尿系统发育   细胞生物学   发育生物学   文献计量学   聚类分析   可视化分析  

摘要： 目的 对泌尿系统发育相关研究的现状及趋势进行文献计量研究和可视化分析。方法 使用Web of Science数据库核心合集,检索1990至2020年发表的泌尿系统发育相关的研究文献。应用文献计量学方法并结合R语言中的Bibliometrix包,对各年度发表的文献数量、期刊、第一作者及通信作者、国家、研究机构、研究领域、被引频次、关键词予以统计分析。应用VOSviewer软件对文章的关键词进行可视化聚类,并进行研究主题的演进过程桑基图和关键词战略坐标图分析。结果 共检索到4 064篇文献,最终纳入1 594篇。1990至2010年,平均每年发表(47.0±8.0)篇;2011至2020年发表数量上升,平均每年发表(60.6±5.9)篇。共有619本期刊发表过泌尿系统发育相关的文献,排名第1位的是Journal of Urology (81篇)。以第一作者身份发表相关文献的学者中,发表文献数量最多的是Gattone V H和Okada T(各5篇)。以通信作者身份发表相关文献的学者中,发表文献数量最多的是Nishinakamura R、Okada T、Potter S S(各7篇)。纳入文献来自55个国家,排名前3位的分别是美国(509篇)、日本(163篇)、中国(117篇)。纳入文献来自1 758家研究机构,排名第1位的是美国匹兹堡大学(101篇);中国医科大学(21篇)排名第31位。纳入文献共涉及93个研究领域,绝大多数涉及泌尿学/肾病学,其次是细胞生物学和发育生物学。纳入文献的总被引频次达51 353次,排名第1位的文献(938次)于1996年发表。纳入文献共有6 968个关键词,出现频次排名前5位的关键词分别是表达(326篇)、肾脏(163篇)、小鼠(161篇)、大鼠(147篇)以及细胞(143篇)。利用VOSviewer软件可视化分析显示,研究主要集中在两大类:肾脏发育异常相关疾病、泌尿系统发育基因表达和形态形成。研究主题的演进过程桑基图显示,1990至2020年,泌尿系统发育基因表达依然是研究的热点和焦点。关键词战略坐标图分析显示,泌尿系统发育相关研究的热点和未来发展的趋势依然集中在基因表达上。结论 目前国际上对泌尿系统发育相关研究呈上升趋势。未来将以细胞生物学和发育生物学领域为主导,继续深入探索基因表达调控机制,以期将成果应用于泌尿系统发育异常相关疾病研究和组织工程学。

关键词： 癌   胆囊   细胞迁移诱导蛋白   生物学功能   内质网应激  

摘要： 目的:探讨细胞迁移诱导蛋白(CEMIP)对胆囊癌细胞系GBC-SD生物学功能的影响及其可能机制。方法:检测CEMIP在胆管上皮细胞HIBEC及胆囊癌细胞系NOZ、GBC-SD中的表达。取对数生长期的人胆囊癌细胞系GBC-SD作为空白对照组;转染无意义的小干扰RNA作为阴性对照组;将siCEMIP-1或siCEMIP-2转染至GBC-SD细胞中,分别作为siCEMIP-1组和siCEMIP-2组。蛋白质印迹法检测GBC-SD细胞中CEMIP、免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)、钙网蛋白(CRT)的表达量,CCK-8法检测GBC-SD细胞相对存活率。分别采用划痕实验、流式细胞术检测细胞划痕修复率及细胞凋亡率。Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力。选取12只5周龄BALB/c-nude小鼠分为对照组和实验组,每组6只,两组小鼠分别于右侧腋下(前肢)皮下注射GBC-SD细胞和沉默CEMIP的GBC-SD细胞,33 d后比较移植瘤体积和重量。结果:与HIBEC细胞相比,GBC-SD[(0.750±0.034)比(0.120±0.002)]和NOZ[(0.690±0.013)比(0.120±0.002)]细胞中CEMIP蛋白相对表达量均增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组及阴性对照组比较,siCEMIP-1组及siCEMIP-2组CEMIP、Bip及CRT的表达量、细胞相对存活率、细胞划痕修复率、细胞迁移及侵袭能力均下降,而细胞凋亡率增加,差异有统计意义(P<0.05)。与对照组相比,实验组小鼠的瘤体体积[(543.6±114.7)比(801.5±256.3)mm^(3)]和瘤体重量[(0.453±0.093)比(0.728±0.278)g]均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CEMIP在胆囊癌细胞系GBC-SD及NOZ中高表达,沉默CEMIP基因表达可抑制胆囊癌细胞系GBC-SD增殖、划痕修复能力、迁移及侵袭能力,促进细胞凋亡,这可能与CEMIP抑制内质网分子伴侣Bip及CRT表达相关。