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关键词： 细胞生物学   半开放半设计性实验   实验教学   教学模式  

摘要： 细胞生物学实验是实践性教学环节之一,是教学实验课程,在培养生物科学专业人才中具有重要的地位和作用。为激发学生对实验课的学习热情,培养学生善于动脑的思维能力和勇于创新的创造力,我们开展了“半开放性实验”探索。本文对“半开放性实验”在广东海洋大学水产学院生物科学专业细胞生物学实验教学中的实施过程及效果进行了阐述,为细胞生物学实验教学改革提供重要参考。

关键词： 血清/糖皮质激素调节激酶1   SU-DHL-4细胞株   基因敲除   凋亡   增殖   细胞周期   迁移  

摘要： 目的构建血清/糖皮质激素调节激酶1(SGK1)基因敲除的人弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)SU-DHL-4/SGK1-Ko细胞株,分析SGK1基因敲除对SU-DHL-4细胞增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。方法采用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)SU-DHL-4细胞株,作为SGK1-Ko组,另外设置阴性对照组(sgRNA-NC组),经嘌呤霉素筛选出稳定敲除株,经测序证实,通过RT-PCR及蛋白质印迹法检测基因敲除株的SGK1表达;细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力。2组独立数据在不同时间点的比较采用2因素方差分析,2组间差异比较采用t检验。结果在荧光显微镜下可观察到SGK1-Ko组GFP稳定表达。SGK1-Ko组RT-PCR产物电泳显示无条带。蛋白质印迹法结果显示,SGK1-Ko组细胞无SGK1蛋白表达。CCK8法结果显示,在细胞培养24、48、72和96h后,sgRNA-NC组细胞光密度D值分别为0.256±0.002、0.566±0.005、1.246±0.016和1.348±0.021,SGK1-Ko组分别为0.180±0.003、0.321±0.004、0.847±0.056和1.043±0.010,SGK1-Ko组细胞增殖能力低于sgRNA-NC组,F时间=4404.099,P时间<0.001;F组别=439.184,P组别<0.001;F组别×时间=316.874,P组别×时间=0.003。流式细胞术检测结果显示,SGK1-Ko组凋亡率为(10.057±0.350)%,高于sgRNA-NC组的(4.310±0.235)%,t=19.272,P<0.001。SGK1-Ko组处于G0/G1期的细胞比例为(87.020±4.405)%,高于sgRNA-NC组的(70.810±2.707)%,t=4.434,P=0.011;SGK1-Ko组处于S期的细胞比例为(9.343±2.083)%,低于sgRNA-NC组的(27.127±1.343)%,t=10.146,P=0.001。Transwell迁移实验结果显示,SGK1-Ko组细胞24、48h迁移水平分别为0.117±0.037和0.138±0.046,sgRNA-NC组为0.121±0.033和0.127±0.045,t值分别为0.107、0.238,P值分别为0.920、0.823。结论成功构建稳定敲除SGK1基因的SU-DHL-4/SGK1-Ko细胞株,SGK1敲除可抑制SU-DHL-4细胞增殖、诱导凋亡和阻滞细胞周期,对细胞迁移无影响。

关键词： Peli1   早发性卵巢功能不全   自身免疫性   Treg细胞   增殖   凋亡  

摘要： 目的Peli1对免疫性早发性卵巢功能不全(POI)小鼠调节性T细胞(Treg)的生物学特性尚未阐明。文章旨在探讨Peli1对免疫性POI小鼠Treg增殖、凋亡及功能的影响。方法从小鼠脾中分离Treg细胞,采用分子生物学方法构建过表达Peli1慢病毒载体,转染Treg细胞。实验分为6组:正常空白组(正常小鼠Treg细胞)、正常上调组(正常小鼠Treg细胞+过表达Peli1慢病毒)、正常空载组(正常小鼠Treg细胞+空载病毒)、模型空白组(POI小鼠细胞Treg细胞)、模型上调组(POI小鼠Treg细胞+过表达Peli1慢病毒)、模型空载组(POI小鼠Treg细胞+空载病毒)。采用qRT-PCR及Western blot检测各组Peli1的mRNA及蛋白水平,CCK8法检测Treg细胞增殖,Annexin V-APC/PI法检测Treg细胞凋亡率,流式细胞仪检测Teff细胞增殖水平评估Treg细胞免疫抑制功能,ELISA检测细胞培养上清液中IL-10、TGF-β表达水平。结果模型上调组Peli1 mRNA及蛋白相对表达水平显著高于模型空载组、模型空白组(P<0.05);正常上调组Peli1 mRNA及蛋白相对表达水平显著高于正常空载组、正常空白组(P<0.05)。48 h、72 h和96 h时,模型上调组Treg细胞增殖水平高于模型空白组及模型空载组(P<0.05),正常上调组Treg细胞增殖水平显著高于正常空白组及正常空载组(P<0.05)。模型上调组Treg细胞凋亡率[(37.13±0.95)%]显著低于模型空载组[(45.27±0.95)%]与模型空白组[(41.95±2.08)%],差异有统计学意义(P<0.05);正常上调组Treg细胞凋亡率[(26.49±1.37)%]显著低于正常空载组[(33.60±2.09)%]与正常空白组[(35.20±3.18)%],差异有统计学意义(P<0.05)。流式结果显示,模型上调组Treg细胞对Teff细胞的抑制率显著高于模型空载组、模型空白组(P<0.05);正常上调组Treg细胞对Teff细胞的抑制率显著高于正常空载组、正常空白组(P<0.05)。结论过表达Peli1促进POI小鼠Treg细胞增殖,抑制凋亡,增强免疫抑制功能,为治疗免疫性POI提供了新思路。

关键词： 细胞生物学   阴阳理论   细胞代谢  

摘要： 细胞生物学(cell biology)旧称细胞学(cytology),是研究细胞的形态结构、生理机能、细胞周期、细胞分裂、细胞自噬、细胞凋亡,以及各种胞器及讯息传递路径的学科。中医的“阴阳”是一门哲学术语,是一种方法论。中医能治好病决非偶然,中医治病的科学性,就在于通过中药的“四气五味”“升降浮沉”“活血化瘀”来净化人体的血液,让人体的组织细胞浸浴在一个良好的生态环境中,与周边进行物质和能量的交换,吸收营养,排出废物,从而让组织细胞逐步地调整和修复自身的功能及时空代谢,使疾病渐渐消失。中医“阴阳”的核心理论是细胞代谢这一命题成立,那么中医就具有了一个完整的理论体系。

关键词： 前列腺癌   zeste增强子同源物2   小干扰RNA  

摘要： 目的观察Zeste增强子同源物2(EZH2)在前列腺癌中表达情况和在体外对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,并探究作用机制。方法通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析EZH2在前列腺癌组织和前列腺增生组织中表达差异和预后关系。DU145细胞来源于上海中国科学院细胞库。对DU145细胞进行小干扰RNA(siRNA)EZH2沉默,并通过蛋白质印迹法(Western blot)和RT-qPCR检测干扰效率。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell实验检测EZH2对DU145生物学行为的改变。通过Western blot检测EZH2与p21相关性。结果前列腺癌组EZH2的信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达高于正常前列腺组织,且EZH2表达水平和Glesaon分级正相关。前列腺癌细胞系DU145、PC3组中EZH2的mRNAs和蛋白水平表达高于WPMY-1细胞组,且在DU145中表达高于PC-3。CCK-8实验结果显示,si-EZH2组增殖能力显著低于于Control组(t=4.17,P<0.05);Transwell实验结果表明,si-EZH2组与Control组相比可以显著抑制DU145细胞迁移(t=29.81,P<0.01)和侵袭(t=20.23,P<0.01)能力。EZH2表达与p21负相关。结论EZH2在前列腺癌组织中表达高于正常前列腺组织,通过下调p21来促进前列腺发生发展。

关键词： miR-940   非小细胞肺癌   增殖   迁移   侵袭   Cbl-b  

摘要： 目的:探讨miR-940在非小细胞肺癌中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:选取标本库中2015年10月至2016年12月在我院胸外二科行手术治疗的非小细胞肺癌患者85例,检测癌组织和癌旁组织中miR-940的表达水平。将miR-940 mimics和miR-940 inhibitors转染至A549细胞中,检测转染后各组A549细胞中miR-940的表达水平。根据细胞增殖实验、划痕实验和Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力变化。双荧光素酶实验证实miR-940的靶基因。结果:miR-940在癌组织中的表达量显著低于癌旁组织中的表达量,差异有统计学意义(P=0.004)。细胞增殖实验结果显示,miR-940 mimics组的细胞增殖率显著低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);细胞划痕实验结果显示,miR-940 mimics组的划痕愈合率明显低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验结果显示,miR-940 mimics组的侵袭细胞数显著低于miR-940 inhibitors组的侵袭细胞数,差异有统计学意义(P<0.01)。Cbl-b是miR-940的直接靶基因。结论:miR-940在非小细胞肺癌中呈低表达,miR-940可能通过靶向抑制Cbl-b基因,进而抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

关键词： 分子免疫学   DNA双螺旋结构   生化遗传学   细胞生物学   生命科学   分子生物学   分子遗传学   卡文迪许实验室  

摘要： 作为20世纪的伟大发现之一,DNA双螺旋结构的确立成为了分子生物学诞生的标志。从此之后,分子免疫学、分子遗传学、细胞生物学等分支学科如雨后春笋般诞生,从而加速了生命科学的发展步伐。在当时,研究分子生物学主要分为三个学派:结构学派、信息学派和生化遗传学派。

关键词： 肿瘤流行病学   肿瘤病理学   顾绥岳   细胞生物学   杂志简介   胆胰   免疫学   《肿瘤》  

摘要： 《肿瘤》创刊于1981年,由我国肿瘤病理学泰斗顾绥岳教授发起创办,并担任第一任主编。此后,我国著名的免疫学与细胞生物学专家余新生教授、国际著名的肿瘤流行病学专家高玉堂教授,先后担任杂志主编。2021年12月起,由我国著名的胆胰外科专家刘颖斌教授担任杂志主编。

关键词： 肺癌   非小细胞肺癌细胞   沉默信息调节因子5   增殖   Stat3/Nanog通路  

摘要： 目的探讨沉默信息调节因子5对肺癌细胞生物学特征的影响及相关机制。方法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹分别检测人肺癌细胞NCI-H838、人正常肺上皮细胞BEAS-2B及空白对照组、空载体转染组、沉默信息调节因子5过表达组中沉默信息调节因子5 mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法检测肺癌细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell侵袭实验检测肺癌细胞的迁移和侵袭能力。Western印迹检测空白对照组、空载体转染组、沉默信息调节因子5过表达组、大脑通透性的神经保护肽(Colivelin)组中Stat3、p-Stat3、Nanog蛋白表达水平。结果肺癌细胞NCI-H838中沉默信息调节因子5 mRNA和蛋白表达水平明显低于人正常肺上皮细胞BEAS-2B(P<0.01)。沉默信息调节因子5过表达组细胞增殖、迁移和侵袭能力明显低于空白对照组和空载体转染组(P<0.01);Colivelin组细胞增殖、迁移和侵袭能力明显高于沉默信息调节因子5过表达组(P<0.05)。沉默信息调节因子5过表达组肺癌细胞中p-Stat3、Nanog蛋白表达水平明显低于空白对照组和空载体转染组(P<0.05);Colivelin组肺癌细胞中p-Stat3、Nanog蛋白表达水平明显高于沉默信息调节因子5过表达组(P<0.05)。结论沉默信息调节因子5在肺癌细胞中低表达;上调沉默信息调节因子5可通过抑制Stat3/Nanog信号通路降低肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

关键词： 智慧教学   细胞生物学   课程思政  

摘要： 细胞生物学是现代生命科学的前沿与枢纽学科,对其它生命科学分支学科的学习及研究极其重要。该论文以智慧教学环境为框架,以学生为中心,挖掘课程的思政元素并将其有机融入课堂,对智慧教学工具在课程中的应用以及课程思政元素的融合进行探索。以求进一步提高细胞生物学的本科教学质量,达到满意的教学效果,以期实现知识传授和价值引领的人才培养目标。