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关键词： 教学设计   细胞生物学   融合模式   实践  

摘要： 混合式教学为学生创造了一种既能有效激发自主学习的能力,又能提升课堂参与度的学习体验。该教学模式的核心在于对课程内容进行重新设计,以更好地满足学生的学习需求。然而,目前关于混合式教学的实证研究仍然相对不足。基于对细胞生物学课程特征和学生学习状况的深入分析,该文以“第四章物质的跨膜运输”为例,对细胞生物学课程的混合式教学进行了创新设计与实践研究。该课程设计以OBE教育理念为指导,依托BOPPPS教学模式,构建知识明线与思政暗线双线并进的混合式教学体系,以有效提升教学质量,助力学生综合素质发展。

关键词： 组织胚胎学   人类学   神经生物学   细胞生物学  

摘要： 《四川解剖学杂志》(双月刊)创刊于1980年,由四川省科学技术协会主管,四川省解剖学会主办,全国公开发行。本刊登载人体解剖学、组织胚胎学、人类学、神经生物学、细胞生物学、分子生物学、医学影像以及与基础医学相关的临床医学各学科的研究论著,并辟有“教学研究”“技术与方法”“综述”“解剖变异”“个案报告”等栏目。欢迎全国各地基础医学和临床医学工作者踊跃投稿。

关键词： 硫酸软骨素蛋白多糖4假基因12   免疫浸润   遗传变异   细胞生物学功能   小细胞肺癌  

摘要： 目的:探讨硫酸软骨素蛋白聚糖4假基因12(CSPG4P12)在小细胞肺癌(SCLC)组织中的表达、与免疫浸润的关系及其对细胞生物学功能的影响,阐明其在SCLC发生发展中的作用。方法:通过ArrayExpress数据库检索获得的SCLC的E-GEOD-60052队列数据,利用R语言Bioconductor包完成数据过滤标准化,并获得63例SCLC肿瘤组织和7例正常组织样本,使用Mann-Whitney U检验分析2组样本中CSPG4P12表达水平差异情况,使用Pearson相关性分析评估CSPG4P12表达水平与47种免疫检查点基因之间的关联。使用ESTIMATE算法和CIBERSORT算法评估CSPG4P12表达与肿瘤免疫细胞浸润之间的关联。采用病例对照研究分析临床资料,选取230例SCLC患者为病例组,230名健康体检者为对照组。采用TaqMan-MGB荧光探针标记法进行CSPG4P12 rs2880765、rs6496932和rs8040855位点基因分型实验,通过非条件Logistic回归模型计算比值比(OR)和95%置信区间(CI),分析CSPG4P12基因多态遗传变异与SCLC发病风险的关联。SCLC DMS114细胞分别转染pUC-57质粒(对照组)和CSPG4P12过表达质粒(OV-CPG4P12组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法验证2组细胞中CSPG4P12过表达效率。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测2组细胞增殖活性,Transwell小室实验检测2组迁移细胞数和侵袭细胞数,Hoechst 33342荧光染色法观察2组细胞凋亡情况。结果:ArrayExpress数据库E-GEOD-60052队列分析,与正常组织比较,SCLC肿瘤组织中CSPG4P12 mRNA表达水平明显降低(P<0.001)。CSPG4P12表达与免疫检查点基因白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR1)(r=0.47,P<0.001)、肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族成员9(TNFRSF9)(r=0.38,P<0.01)和TNF超家族成员9(TNFSF9)(r=0.44,P<0.001)均呈正相关关系。ESTIMATE算法,CSPG4P12低表达组患者基质评分、免疫评分和ESTIMATE综合评分均低于CSPG4P12高表达组(P<0.01)。CIBERSORT算法,与CSPG4P12高表达组比较,CSPG4P12低表达组中M0型巨噬细胞浸润增加(P<0.05),静息肥大细胞浸润降低(P<0.05)。CSPG4P12表达水平与静息肥大细胞浸润(r=0.35,P=0.030)和单核细胞浸润(r=0.34,P=0.034)呈正相关关系。病例对照研究,与AA基因型比较,CSPG4P12 rs2880765位点AT和TT基因型携带者患SCLC风险增加(OR=1.68,95%CI=1.15~2.45,P<0.01)。分层分析,在男性、低年龄(≤60岁)及吸烟亚组人群中,rs2880765 A>T遗传变异可增加SCLC发病风险(男性:OR=1.86,95%CI=1.18~2.93,P<0.01;≤60岁:OR=1.73,95%CI=1.11~2.68,P<0.01;吸烟:OR=2.76,95%CI=1.49~5.13,P=0.001)。细胞生物学实验,与对照组比较,在48和72 h时,OV-CSPG4P12组细胞增殖活性明显降低(P<0.01);24 h时迁移细胞数明显减少(P<0.01),凋亡细胞数明显增加(P<0.05),48 h时侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。结论:CSPG4P12在SCLC肿瘤组织中低表达,与免疫浸润有关联。CSPG4P12 rs2880765 A>T遗传变异可以增加SCLC发病风险,其过表达能抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

关键词： 脐带间充质干细胞   多分化潜能   移植治疗   肺损伤   修复效应  

摘要： 目的探究鸡脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UMSC)的多向分化潜能等生物学特征以及对博来霉素(bleomycin,BLM)介导的肺损伤小鼠的修复效应。方法向小鼠肺支气管注射BLM,构建小鼠急性肺损伤模型,通过尾静脉移植UMSC,病理学切片的观察、移植细胞在小鼠体内存活及分化、羟脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)含量等检测指标,评估分析UMSC对小鼠肺损伤的修复效应。结果本研究成功分离的UMSCs,阳性表达特异性表面标记物CD29、CD44、CD90和CD166,而CD34与CD45的表达呈阴性,且诱导培养的UMSC可以向脂肪、成骨、软骨和肺泡上皮细胞分化;动物实验发现,经BLM处理的小鼠肺泡结构受损,肺泡内炎症细胞浸润、异常的胶原蛋白沉积,移植UMSC治疗后,小鼠肺部受损的面积和程度降低,肺组织HYP含量下降但高于对照组。结论UMSC在体外培养条件下可以持续扩增、保持其生物学特性,并具有定向迁移至受损部位、定向分化的能力,对BLM诱导的急性肺损伤小鼠有一定的修复效应。

关键词： 细胞生物学   “互联网+教育”   混合式教学   教学改革  

摘要： 在“互联网+教育”的时代背景下,如何运用信息技术构建智慧课堂,将学生的兴趣偏好与教学内容相结合,推动教学重心从“教”向“学”转变,已然成为细胞生物学教学实践中必须面对和解决的问题。细胞生物学课程团队采用混合式智慧课堂教学模式,围绕学生的个性化、差异化学习需求,不断激发学生的学习兴趣,培养学生的主动性和创造性。

关键词： 白芨   白芨多糖   坏死性小肠结肠炎   网络药理学   细胞生物学  

摘要： 目的运用网络药理学和细胞生物学验证探讨白芨治疗坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)的分子作用机制。方法通过中药系统药理学数据库(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database,TCMSP)筛选出白芨有效成分;利用GeneCards、OMIM、PharmGKB和DisGeNet数据库筛选NEC的相关靶点,并与白芨活性成分作用靶点取交集;应用String数据库绘制PPI网络;通过Cytoscape软件绘制白芨-成分-靶点-疾病网络;借助DAVID数据库和R软件对靶点进行GO富集分析和KEGG通路富集分析;细胞生物学验证分析白芨多糖(Bletilla striata polysaccharide,BSP)对NEC的保护作用。结果共筛选得到白芨14个有效成分,涉及61个作用靶点,主要涉及炎症反应、氧化应激反应、细胞凋亡等,主要调节TNF、HIF-1、MAPK、NF-κB等信号通路,其作用机制包含抗氧化、抗炎、抑制细胞凋亡等。细胞生物学验证分析表明,BSP能够降低LPS引起的细胞凋亡,提高超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性(P<0.01)并降低肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平(P<0.05)。结论白芨可能是通过多成分、多靶点、多通路等途径发挥其治疗NEC的作用,白芨中的活性成分BSP可能是其治疗NEC的物质基础。体外水平验证了BSP能够降低LPS引起的细胞损伤,降低氧化应激反应,提高抗氧化性,为白芨治疗NEC提供新思路。

关键词： 微RNA   溶质载体家族2成员3   肾透明细胞癌   上皮间充质转化  

摘要： 目的探讨微RNA(microRNA,miR)-429对肾透明细胞癌细胞生物学特征的影响。方法采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人肾小管上皮细胞HK-2及肾透明细胞癌细胞ACHN、Caki-1、786-O、769-P中miR-429及SLC2A3 mRNA表达水平,其中Caki-1细胞中的miR-429、SLC2A3表达变化最为明显,因此选用Caki-1细胞进行后续实验。将对数生长期Caki-1细胞分为mimic NC组(转染mimic NC)、miR-429 mimic组(转染miR-429 mimic)、inhibitor NC组(转染inhibitor NC)、miR-429 inhibitor组(转染miR-429 inhibitor)、oe-NC组(转染oe-NC)、oe-SLC2A3组(转染oe-SLC2A3)、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-SLC2A3组(转染sh-SLC2A3)、mimic NC+oe-NC组(同时转染mimic NC和oe-NC)、miR-429 mimic+oe-NC组(同时转染miR-429 mimic和oe-NC)和miR-429 mimic+oe-SLC2A3组(同时转染miR-429 mimic和oe-SLC2A3)。采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法检测上述11组Caki-1细胞中miR-429及SLC2A mRNA的表达水平;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测Caki-1细胞的增殖能力;Transwell实验检测Caki-1细胞的迁移、侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证mimic NC组和miR-429 mimic组Caki-1细胞中miR-429与SLC2A3的结合关系;Western blot检测Caki-1细胞中SLC2A3和上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达;免疫荧光染色检测Caki-1细胞中EMT相关蛋白的表达。结果肾透明细胞癌细胞系中miR-429的表达显著下调,SLC2A3 mRNA的表达显著上调,过表达miR-429能显著抑制癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT过程。SLC2A3能促进肾透明细胞癌细胞系EMT进程,并能恢复miR-429过表达对细胞EMT的抑制作用。双荧光素酶报告实验证实miR-429与SLC2A3相互结合,miR-429可靶向抑制SLC2A3。结论miR-429通过靶向抑制SLC2A3的表达,抑制肾透明细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT过程。

关键词： 细胞生物学   教学改革   实践   创新  

摘要： “细胞生物学”是生命科学相关学科各专业重要的一门专业基础课程,是当前生命科学发展最快的领域之一。“细胞生物学”课程内容繁多,基本概念、生命活动和信号转导过程庞杂抽象且枯燥。深入分析了“细胞生物学”课程在教学过程中存在的主要问题,并探讨了课程教学中的改革举措与具体实践。通过完善教学内容、优化教学方法与手段、全面提升思政育人实效等手段,旨在推动课堂教学改革,培养学生的综合素质和创新能力,助力打造一流本科课程。

关键词： 肝癌   外泌体   微小RNA-122   增殖   转移   解整合素金属蛋白酶10  

摘要： 目的：探究骨髓间充质干细胞（BMSC）源性外泌体（Exo）传递的微小RNA（miR-122）对人肝癌HepG-2细胞生物学活性的调控作用及其分子机制。方法：采用超速梯度离心法从BMSC中分离Exo，并利用透射电镜和蛋白质免疫印记（Western blot）实验进行鉴定；通过电转染技术将miR-122模拟物（miR-122 mimics）及其阴性对照（NC mimics）分别负载至Exo，分别记为NC exo和miR-122 exo，实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测两种Exo中miR-122相对表达量；采用外泌体绿色荧光PKH67染料标记NC exo和miR-122 exo后再与HepG-2细胞共培养，观察Exo被HepG-2细胞摄取情况；HepG-2细胞分为对照组、NC exo组（NC exo处理细胞）、miR-122 exo组（miR-122 exo处理细胞），采用CCK-8法、Transwell小室实验、Western blot实验检测不同条件处理下HepG-2细胞增殖活性、迁移、侵袭能力及上皮间质转化相关蛋白E-钙粘蛋白（E-cadherin）、N-钙粘蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达变化；通过生物信息学和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-122与解整合素金属蛋白酶10（ADAM10）的靶向调控关系。结果：从BMSC中分离的Exo呈球形状囊泡，直径范围在30 nm～150 nm，Exo特殊标记蛋白CD9、CD63、HSP70、TSG101均为阳性表达，且负载miR-122 mimics的miR-122 exo中miR-122相对表达量显著高于负载mimics NC的NC exo（P<0.05），NC exo和miR-122 exo均能够被HepG-2细胞摄取。与对照组比较，NC exo组HepG-2细胞在培养24、48、72 h时增殖活性均显著升高（P<0.05），细胞迁移与侵袭数量均显著增加（P<0.05），NC exo组HepG-2细胞中上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平明显降低（P<0.05），而间质标志物N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与对照组、NC exo组相比，miR-122 exo组HepG-2细胞在培养24、48、72 h时显著抑制HepG-2细胞增殖（P<0.05），细胞迁移与侵袭数量均明显减少（P<0.05），miR-122 exoHepG-2细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.05），而间质标志物N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。miR-122与ADAM10的3’-UTR存在结合位点，与 miR-NC组比较，在 HepG2 细胞中转染miR-122可以显著抑制ADAM10 WT的相对荧光素酶活性（P＜0.05）。结论：通过Exo传递miR-122至HepG-2细胞，能够抑制细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化等生物学行为，其机制可能与靶向抑制ADAM10表达有关。

关键词： 乳腺癌   酪氨酸3单加氧酶/色氨酸5单加氧酶激活蛋白ζ   迁移   侵袭   上皮-间质转化  

摘要： 目的探讨酪氨酸3单加氧酶/色氨酸5单加氧酶激活蛋白ζ(YWHAZ)在乳腺癌组织中的表达水平及其对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测96例乳腺癌患者癌组织中YWHAZ基因的表达水平;采用Pearson法分析癌组织中YWHAZ的表达水平与患者临床病理参数及预后的关系;通过CCK-8法、细胞划痕试验、Transwell试验验证下调YWHAZ对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,采用Western blot检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达水平的变化。结果三阴性乳腺癌(2.659±0.214,t=2.815,P=0.012)和非三阴性乳腺癌(1.822±0.165,t=5.079,P=0.001)患者癌组织中YWHAZ的表达水平较癌旁组织均显著上调;乳腺癌组织中YWHAZ的表达水平与血管浸润、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、病理分型以及复发情况有关(P<0.05);在乳腺癌TNMⅠ~Ⅳ期患者中,高水平YWHAZ患者的无复发生存率(χ^(2)=31.10,P<0.0001)和总体生存率(χ^(2)=18.99,P<0.0001)较低水平YWHAZ患者均显著缩短;YWHAZ水平是乳腺癌患者预后较差的独立危险因素;下调YWHAZ能够抑制MCF-7细胞增殖(F=10.73,P=0.0004)、迁移(t=20.88,P=0.0023)和侵袭(t=13.72,P=0.0002)能力;Western blot证实下调YWHAZ表达后,E-cadherin蛋白水平升高(4.478±0.832,t=8.45,P=0.0137),但Vimentin蛋白水平下调(0.549±0.143,t=6.86,P=0.0206)。结论YWHAZ异常高表达与乳腺癌发生、发展以及不良预后密切相关,下调YWHAZ能够抑制乳腺癌细胞系MCF-7增殖、迁移、侵袭以及EMT进展。