教学课程资源库 更多>>

关键词： 细胞生物学   实验教学   教学改革  

摘要： 实验教学是理论课程教学的重要组成部分,其目的是培养学生掌握先进的实验技能,具备良好的科学研究素养、先进的思维方式和解决科学问题的创新能力。为了达到新世纪高素质创新型人才培养的目标,针对目前实验教学的现状和存在的问题,从优化实验教学体系、丰富实验教学方法、完善综合考核方式和建立多种形式的信息反馈等4个方面探索了综合性教学改革的具体措施。这些改革措施有效地激发了学生求知的欲望,充分调动了学生学习的潜能,培养了学生自主创新的能力,提高了实验教学的质量。

关键词： 穹窿下器   室管膜细胞   免疫阳性   细胞生物学  

摘要： 目的：观察穹窿下器中神经干细胞的分布及形态。<br>　　方法：⑴制备BrdU标记实验动物模型：按照体重50mg/Kg对实验动物腹腔注射BrdU生理盐水注射液。分别于14:00和16:00给药，连续给药三天，制备BrdU模型。⑵免疫组织化学染色：正常动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，浸蜡包埋，选取含穹窿下器部分，石蜡切片，厚度为5um，分别经Nestin和Sox2免疫组织化学染色，封片后Olympus BX-UCB显微照相系统观察照像。⑶Nestin、Sox2免疫荧光组织化学双标染色步骤：正常动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，蔗糖浸泡后选含穹窿下器部分，冰冻切片，厚度为10um，经Nestin、SOX2免疫荧光组织化学双标染色，甘油封固后Olympus BX-UCB显微照相系统观察照像。⑷BrdU标记实验动物免疫组织化学染色：BrdU模型动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，浸蜡包埋，选取含穹窿下器部分，石蜡切片，厚度为5um，经BrdU免疫组织化学染色，封片后Olympus BX-UCB显微照相系统观察照像。⑸BrdU模型动物经BrdU，Sox2免疫荧光组织化学双标染色：模型动物常规麻醉，经心灌注，取材，固定，蔗糖浸泡后选含穹窿下器部分，冰冻切片，厚度为10um，经BrdU、Sox2免疫荧光组织化学双标染色，甘油封固后Olympus BX-UCB显微照相系统观察照像。⑹统计学处理：阳性细胞采用专业图像分析软件Image-Pro Plus6.0测定平均光密度值。用spss13.0软件进行分析。采用SNK-q检验，以P<0.05为有显著性差异。<br>　　结果：①镜下，经甲苯胺蓝染色后，可以看到SFO内有丰富的毛细血管分布，两外侧区有一些较大的血管，血管周围的组织排列较紧密，核心区域是微血管。室管膜细胞呈单层排列，细胞形态呈梭形，细胞表面光滑，细胞核大小不等，呈椭圆形或圆形。SFO内的细胞分布并不均匀，在大血管周围，SFO的外周区以及第三脑室的室管膜层，以上部位的细胞为大细胞，胞体较丰满，染色比较均匀，但突起并不明显，细胞核呈椭圆形或圆形。其余部位的细胞一般较小，主要分布于SFO中心区的小血管四周。在SFO中心区分散了一些体积较大的细胞。血管间隙内可见胞浆内含有微小气泡的神经内分泌样细胞，此种细胞胞体较丰满，突起较少，且长度较短。②在SFO的冠状面上可以看到SOX2免疫阳性细胞排列紧密，胞核为中等大小，呈圆形或椭圆形，中间部较两侧边缘部SOX2阳性细胞多，SFO内血管周围的SOX2免疫阳性细胞较少，室管膜处可见单层排列的SOX2免疫阳性细胞，而与SFO相连的海马腹侧联合内，只有少量的阳性细胞，侧脑室室管膜的阳性细胞呈单层紧密排列。脉络丛未见阳性表达。SFO两侧部SOX2免疫阳性细胞的平均光密度值为0.3783±0.0251，中间部SOX2免疫阳性细胞的平均光密度值为0.5177±0.0352。海马腹侧联合SOX2免疫阳性细胞的平均光密度值为0.2185±0.0473。SFO两侧部与中间部比较结果显示有显著性差异(P<0.05)，SFO与海马腹侧联合比较结果显示有显著性差异(P<0.05)。③SFO内Nestin阳性细胞呈不均匀分布，主要分布于大血管周围，SFO的外周区以及第三脑室的室管膜层，血管周围可见围绕血管的阳性表达。侧脑室的室管膜内可见单层紧密排列的阳性细胞。脉络丛内也可见阳性表达。SFO相连的海马腹侧联合内，未见阳性细胞。SFO两侧部比中间部阳性细胞多。SFO两侧部Nestin免疫阳性细胞的平均光密度值为0.3745±0.0553，中间部Nestin免疫阳性细胞的平均光密度值为0.2145±0.0241。SFO两侧部与中间部比较结果显示有显著性差异(P<0.05)。④冠状切面上SFO内可见散在的BrdU免疫阳性细胞，由于数量较少，所有分布位置不恒定。⑤BrdU、SOX2免疫荧光组织化学双标结果观察：SFO内可见SOX2免疫荧光阳性细胞排列紧密，胞核中等大小，呈圆形或椭圆形，SOX2阳性细胞分布广泛，遍布整个SFO，但中间部较两侧边缘部SOX2免疫荧光阳性细胞多，而SFO内血管周围的SOX2免疫阳性细胞较少，室管膜处可见单层排列较整齐的SOX2免疫阳性细胞。BrdU免疫荧光阳性细胞的较少，有少量细胞同时存在两种阳性表达。⑥Nestin、SOX2免疫荧光组织化学双标结果观察：SFO内Nestin免疫荧光阳性细胞分布不均匀，主要分布于大血管周围，SFO的外周区以及第三脑室的室管膜层。SOX2免疫荧光阳性细胞分布广泛，遍布整个SFO，但中间部与两侧边缘部相比，SOX2免疫荧光阳性细胞多，SFO内血管周围的SOX2免疫阳性细胞较少，室

ISBN: (纸本)9787312030239

关键词： 乳腺肿瘤   细胞生物学   RNA干扰   半胱氨酰白三烯   半胱氨酰白三烯受体  

摘要： 目的:白三烯(cysteinyl leukotrienes)是花生四烯酸(arachidonic acid)经5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)途径代谢的一系列产物,包括 leukotrieneB4(LTB4)和半胱氨酰白三烯即 leukotriene C4(LTC4)、leukotriene D4(LTD4)和 leukotriene E4(LTE4)。它们在炎症的发展中发挥着重要的作用。炎性介质半胱氨酰白三烯以及相应的受体半胱氨酰白三烯Ⅰ型受体(CysLT1R)和半胱氨酰白三烯Ⅱ型受体(CysLT2R)与哮喘等变态反应性疾病、脑外伤、脑肿瘤、结肠癌及乳腺癌等密切相关。本实验主要研究在乳腺癌细胞中,CysLT2R的表达与肿瘤的增殖,生存,迁移的相关性,其有望成为防治肿瘤转移的新靶点。方法:我们首先通过Western Blotting筛选出CysLT2R表达阳性的乳腺癌细胞系作为模型。首先通过MTT实验初步评价了 LTC4对于MCF-7细胞系存活的影响,我们利用流式细胞术,划痕试验及趋化试验测定了 LTC4对细胞周期及对乳腺癌细胞运动作用的影响。观察MCF-7细胞低表达半胱氨酰白三烯II型受体(CysLT2R)对半胱氨酰白三烯(LTC4)介导的细胞生长、迁移能力、细胞周期等生物学行为的影响。结果:我们首先通过Western Blotting筛选出CysLT2R表达阳性的乳腺癌细胞系MCF-7细胞系作为模型。首先通过MTT实验初步评价了 LTC4对于MCF-7细胞系存活的影响,结果显示LTC4在浓度为0.1nM、1nM、10nM、20nM、50nM、100nM 时对 MCF-7 细胞的抑制率分别为(6.5±0.03)%,(11 ±0.02)%,(16.6±0.04)%,(35.2±0.04)%,(37.8±0.04)%,(38.5±0.02)%。为了进一步研究LTC4对MCF-7细胞增殖抑制作用的机理,我们利用流式细胞术测定了LTC4对细胞周期的影响。本实验发现处于G0/G1期的细胞随LTC4浓度的提高而明显增加,即LTC4可以显著抑制MCF-7细胞于G0/G1期,使细胞无法越过限制点,因此降低了细胞的增殖。针对LTC4对乳腺癌细胞运动的作用,我们首先通过划痕试验及趋化试验发现,LTC4可以明显延长MCF-7细胞的划痕愈合时间,减少穿膜细胞个数,呈剂量依赖关系。观察MCF-7细胞低表达半胱氨酰白三烯II型受体(CysLT2R)对半胱氨酰白三烯(LTC4)介导的细胞生长、迁移能力、细胞周期等生物学行为的影响。针对CysLT2R的已知cDNA序列,设计并体外转录合成4条特异性shRNA,用脂质体介导转染入MCF-7细胞48h,同时设阴性对照组(1条非特异性序列转染)、正常MCF-7对照组(未转染)。Western Blotting检测干扰后CysLT2R蛋白表达水平下调的变化。干扰后,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测50nM LTC4作用下细胞株生长能力;应用流式细胞仪检测50nMLTC4作用下细胞周期变化;应用趋化小室检测50nM LTC4作用下MCF-7细胞侵袭运动活性。与正常MCF-7细胞和阴性对照组比较,MCF-7细胞CysLT2R低表达组的细胞生长增殖无明显变化(P>0.05),细胞周期无明显变化。干扰后,MCF-7细胞表现出侵袭活性明显增强(P<0.01)。结论:根据预实验选定的条件,我们进一步通过MTT、Western Blotting、流式细胞术、Transwell实验、划痕实验、转染等技术,得出以下结论:LTC4可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移能力,并诱导MCF-7细胞停滞于G0/G1期,其最佳浓度为50nM。低表达CysLT2R对LTC4介导的乳腺癌MCF-7细胞的增殖的抑制作用无影响。低表达CysLT2R可以降低LTC4对乳腺癌MCF-7细胞的迁移及运动能力的抑制作用,低表达CysLT2R后乳腺癌MCF-7细胞的迁移及运动能力明显增强。

关键词： 细胞生物学   医学人文素质教育   方法和途径  

摘要： 细胞生物学是重要的医学基础课程之一,在细胞生物学教学的过程中融入医学人文教育,使医学生从进医学院校开始就接收医学专业知识与医学人文教育的双重润育,帮助医学生树立正确的人文主义世界观、价值观,是符合现代医学发展,培养合格医学人才的举措之一。本文浅谈几点在细胞生物学教学中融入医学人文素质教育的方法和途径。

关键词： Bmi-1   RNA干扰   骨髓瘤细胞   硼替佐米   药物敏感性  

摘要： 目的：构建Bmi-1shRNA慢病毒表达载体以沉默Bmi-1基因的表达，建立稳定干扰Bmi-1基因的骨髓瘤细胞株；研究Bmi-1基因沉默对骨髓瘤细胞株U266和RPMI8226生物学特性及对硼替佐米敏感性的影响及其机制。 方法：设计合成一对针对Bmi-1mRNA的shRNA序列，利用分子克隆技术构建慢病毒表达载体—pLVTHM-shBmi-1，空载体作为对照组，分别与包装载体psPAX2及PMD2.G共转染HEK293T细胞，包装出高滴度的病毒颗粒；感染骨髓瘤细胞株U266和RPMI8226，经过流式细胞仪分选获得稳定细胞株。接着应用real-time PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Bmi-1及p14的表达；CCK-8法检测稳定株细胞增殖；克隆形成实验检测稳定株细胞克隆形成能力；流式细胞术(FCM)检测稳定株细胞周期和凋亡的变化；AO/EB染色、Hoechst33258荧光染色法观察稳定株细胞凋亡形态；Western blot检测P21、Bax和Bcl-2蛋白水平改变。进一步，采用CCK-8法、克隆形成法、流式细胞术和荧光染色法分别从细胞增殖、克隆形成、细胞周期和凋亡、Western blot等方面研究Bmi-1基因沉默对骨髓瘤细胞硼替佐米敏感性的影响及其机制。 结果：(1)成功构建慢病毒表达载体pLVTHM-shBmi-1。(2)成功建立稳定细胞株：real-time PCR和Western blot结果显示干扰组细胞Bmi-1mRNA和蛋白水平表达均下调，说明稳定干扰Bmi-1的骨髓瘤细胞株成功建立。(3) Bmi-1基因沉默对稳定株细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响：○1CCK-8结果显示：48～96小时与对照组相比，U266及RPMI8226干扰组细胞增殖抑制率分别为22.83～25.1%和13.9～26.9%；○2克隆形成显示：Bmi-1基因沉默抑制骨髓瘤细胞的克隆形成能力；○3流式细胞仪检测细胞周期结果显示：U266细胞：对照组和干扰组G1期细胞比率分别为39.91%±0.26%和45.65%±0.68%；RPMI8226细胞：对照组和干扰组G1期细胞比率分别为42.7%±0.47%和50.86%±0.38%；○4流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示：U266细胞：对照组和干扰组的凋亡率分别为9.8%及12.12%，RPMI8226细胞：对照组和干扰组的凋亡率分别为9.6%及15.69%。(4) Bmi-1基因沉默增强骨髓瘤细胞对硼替佐米的敏感性：○1不同浓度的硼替佐米分别处理对照组和干扰组细胞72小时，细胞增殖明显受抑制，干扰组联合用药作用更明显，IC50分别为： U266对照组24.73nmol/L，干扰组18.59nmol/L；RPMI8226对照组32.99nmol/L，干扰组21.56nmol/L；○2联合40nmol/L硼替佐米处理细胞48小时，干扰组细胞加药周期阻滞更明显：U266细胞：对照组和干扰组G1期细胞比率分别为45.35%±0.77%和56.81%±0.50%；RPMI8226细胞：对照组和干扰组G1期细胞比率分别为49.27%±0.90%和56.94%±0.61%；○3联合40nmol/L硼替佐米处理细胞48小时，干扰组细胞凋亡率增加：U266细胞：对照组和干扰组的凋亡率分别为20.83%和28.14%，RPMI8226细胞：对照组和干扰组的凋亡率分别为22.5%和49.14%；○4Western blot检测p21、Bcl-2、Bax蛋白水平结果显示：干扰组p21、Bax表达上调，而抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调，加药处理后上述改变更明显。 结论：(1)干扰Bmi-1后可抑制骨髓瘤细胞增殖，抑制克隆形成，促进凋亡，细胞周期阻滞于G1期；(2) Bmi-1沉默能够增强骨髓瘤细胞对硼替佐米的敏感性，Bmi-1可能成为多发性骨髓瘤基因治疗的一个有效靶点。

关键词： 网络资源   改变   细胞生物学   教学模式  

摘要： 本文阐述了利用网络资源进行细胞生物学教学模式改革的必要性和重要性,并从教师的角色转变、学生的地位转变、交互式教学模式、远程教育教学模式等几个方面论述了充分利用网络资源,改变细胞生物学教学模式所取得的良好的效果,并对未来网络资源在细胞生物学中的进一步应用提出了参考性的建议。

关键词： 细胞生物学   优秀人才   学报   连续出版物   颁奖活动   中华人民共和国   湖州  

摘要： 2012年10月13日,在第四届中国医学细胞生物学学术大会暨教学改革与教研室(系)主任会议(天津)上举行了第二届"《中国细胞生物学学报》-湖州海创生物科技细胞生物学教学优秀人才奖"颁奖仪式。与会代表参加了本次颁奖仪式

关键词： 手机辐射   EB病毒早期抗原   DNA损伤   细胞转化  

摘要： 随着科学技术的迅猛发展和对无线通信的需求日益增加，手机已经被广泛使用并且极大地提高了人们的生活质量。与此同时，手机辐射作为可能危害人体健康的新的环境污染因素也引起了人们的关注。为了防护它对人类健康的负面影响，科学家们从流行病学、体内实验和体外实验等方面进行了深入的研究，然而，迄今为止还没有一个具有说服力的证据能够证明手机辐射与癌症发生之间可能存在的联系。 本课题从细胞生物学角度对手机辐射的致癌效应进行了研究。 首先是手机辐射对Raji细胞中EB病毒早期抗原的诱导作用。Raji细胞是携带有潜伏状态EB病毒的细胞系，正常情况下只表达EB病毒核抗原（EBNA）。在受到外界物理或化学因素刺激时，可以表达EB病毒早期抗原（EBV-EA）在内的多种抗原。实验中将Raji细胞分为四组，每组3瓶。其中A组和B组为非辐照组，C组和D组为辐照组，每天在细胞培养箱中使用通话状态手机辐照4小时。进行辐照实验时，将细胞培养瓶的几何中心置于手机天线的正上方，细胞培养瓶底与手机表面距离为1mm。根据SPEAG DASY5测试系统的测量结果显示，辐照手机的SAR值为0.020mw/g(1g取平均)。辐照实验共进行4周，在每次进行免疫组化检测前，使用终浓度为1ng/mL的TPA作用B组和D组细胞48小时。在每周辐照实验后，收集各组细胞，进行细胞免疫组化检测。实验结果表明，手机辐射能够诱导EBV-EA表达，在促癌剂TPA的作用下，这种诱导作用更为明显。 其次本课题还研究了手机辐射对NIH/3T3细胞的转化作用。NIH/3T3细胞体外培养恶性转化系统对环境中的致癌物或促癌物较为敏感，是一种筛选致癌物或促癌物的经典方法。辐照实验采用连续辐照和间隙辐照两种方式进行。在累计40天每天12小时的连续辐照实验中，手机辐射对NIH/3T3细胞的形态和生长速率没有产生明显的影响，但是在细胞粘附性实验中发现，手机辐射能够增加NIH/3T3细胞对DB Matrigel胶的粘附性。而在累计16天的间歇辐照实验中（辐照50分钟间断10分钟，每天重复10次），使用单细胞凝胶电泳技术未能检测出由手机辐射引起的DNA损伤，但是TPA与手机辐射共同对细胞DNA造成的损伤作用比TPA单一因素作用更为明显。 本实验结果表明，手机辐射能够诱导Raji细胞中EBV-EA表达。而在另一个实验中，虽然NIH/3T3细胞在形态和增殖方面没有明显变化，但手机辐射与TPA共同作用时与TPA组相比有明显的DNA损伤作用。本研究为揭示手机辐射与癌症发生之间可能存在的联系提供了依据。

关键词： 宫颈癌   淋巴结转移   miR-21   血清肿瘤标志物   SiHa细胞   增殖   迁移   侵袭  

摘要： 目的： 淋巴结转移被公认为是影响宫颈癌预后的主要危险因素之一,伴有淋巴结转移的宫颈癌患者的生存率远远低于无淋巴结转移者。而宫颈癌早期即可发生淋巴结转移,同一分期的病人有无淋巴结转移,预后迥异,且是否有淋巴结转移对于治疗及手术方式和术后放化疗的选择关系密切。研究发现,宫颈癌的发生与miRNA的改变密切相关。宫颈癌病理中大部分是鳞癌,本研究拟通过Real-time RT-PCR检测伴有淋巴结转移的宫颈鳞癌、无淋巴结转移的宫颈鳞癌以及正常宫颈血清中miR-21的表达,并探讨其表达情况与宫颈鳞癌淋巴结转移有无关系。 方法： 选择2011年1月—2011年9月在广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科住院接受治疗的患者为研究对象,其中,宫颈鳞癌伴淋巴结转移者25例,不伴淋巴结转移者40例,正常对照组15例。治疗前留取患者血清,实时荧光定量PCR测定血清miR-21水平,运用Pearson相关分析血清miR-21水平与患者淋巴结转移的关系,绘制受试者工作曲线（ROC）,计算血清miR-21的诊断界值。 结果： 1、宫颈癌伴淋巴结转移患者血.清miR-21水平较不伴淋巴结转移患者和正常对照组明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。 2、血清miR-21水平与宫颈癌淋巴结转移呈正相关（r=0.408,P＜0.001）,血清miR-21在宫颈癌确诊病例中诊断淋巴结转移的ROC曲线下面积为0.770,最大约登指数0.485,相应灵敏度56%,特异度92.5%,对应诊断界值6.65。 结论：血清miR-21在诊断宫颈癌淋巴结转移方面有临床价值和应用空间。 目的： 宫颈癌是女性常见的生殖道恶性肿瘤,主要病理类型有宫颈癌鳞癌和腺癌。高危型人乳头瘤病毒（human papilomavirus, HPV）在宫颈上皮细胞恶性转化中起重要作用,HPV16与宫颈鳞癌有关,HPV18与宫颈腺癌有关,但宫颈癌发生的具体分子机制尚不清楚。本研究利用RNA干扰技术改变来源于人宫颈鳞癌的SiHa细胞（HPV16阳性）中miR-21的表达水平,观察SiHa细胞增殖和迁移、侵袭的变化,探讨miR-21对SiHa细胞的增殖、迁移及侵袭能力等生物学特性的影响,为宫颈鳞癌早期诊断及基因治疗、预后提供实验基础。 方法： 选取人宫颈鳞癌SiHa细胞系,运用人工合成miR-21的模拟物miR-21-mimic和miR-21的抑制物miR-21-Inhibitor,将宫颈癌SiHa细胞分为miR-21-mimic组、miR-21-Inhibitor组及空白转染组,利用脂质体Lipofectamin2000瞬时转染技术将miR-21-mimic和miR-21-Inhibitor转染SiHa细胞后,通过流式检测转染率,转染48小时后实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR-21的相对表达量、MTT法检测转染后各组细胞增殖能力、Transwell小室检测各组细胞的迁移能力及侵袭能力。 结果： 1、实时荧光定量PCR结果显示：三组SiHa细胞均表达了miR-21,而转染了miR-21-mimic后SiHa细胞中的miR-21表达量较对照组增加,转染了miR-21-inhibitor后SiHa细胞中的miR-21表达量则降低;2、MTT增殖结果显示：在转染了miR-21-mimic48h后,SiHa细胞的增殖活性出现明显增强,相反的,转染了miR-21-inhibitor48h后,SiHa细胞增殖活性明显降低,说明了miR-21对宫颈鳞癌SiHa细胞的增殖活性有一定的促进作用。 3、Transwell小室测迁移能力试验结果显示：转染miR-21-mimic后明显促进SiHa细胞的迁移能力,转染miR-21-inhibitor后则抑制了SiHa细胞的迁移能力。 4、Transwell小室侵袭能力结果显示：转染miR-21-mimic后明显促进SiHa细胞的侵袭能力,转染miR-21-inhibitor后则抑制了SiHa细胞的侵袭能力。 结论： 1、miR-21模拟物miR-21-mimic能够有效上调miR-21在SiHa细胞中的表达水平,而miR-21抑制剂miR-21-inhibitor能够有效下调miR-21在SiHa细胞中的表达水平。 2、上调miR-21在SiHa细胞中的表达可以促进细胞的增殖活性,对细胞的迁移,侵袭能力有明显的增强作用;下调miR-21在SiHa细胞中的表达则抑制细胞的增殖,同时减弱细胞的迁移及侵袭能力。 3、miR-21与宫颈癌的发生发展密切相关。