教学课程资源库 更多>>

关键词： 杂志介绍   SCI   Cell Biology and Toxicology   细胞生物学   毒理学   毒物学   基础医学  

关键词： 脐带血   NK细胞   IL-2   IL-15   免疫表型   细胞毒性  

摘要： 目的本研究探讨脐带血表型为CD3-CD56+的NK细胞以及经IL-2、IL-15诱导扩增后免疫表型与细胞毒活性等生物学改变的特性。 方法使用Ficoll淋巴细胞分离液分离出脐带血单个核细胞，在无血清培养的条件下，分别加入IL-2、 IL-15、IL-2联合IL-15，在培养箱中培养14天，流式细胞仪检测CD3-CD56+NK细胞亚群含量以及NK细胞上CD16、CD62L、NKG2D、NKG2A、NCR44、NCR46、颗粒酶B、穿孔素的表达情况；并且使用WST-1法检测培养后的NK细胞对K562细胞毒活性。 结果经过14天的培养，扩增后的IL-2、IL-15、IL-2/IL-15三组NK细胞分别扩增了10.78±2.51、10.42±3.72、10.54±6.24倍,这三组之间无显著差异；扩增后的CD3-CD56+NK细胞表达CD16的比例有显著减低，IL-2和IL-15组之间差异显著；使用细胞因子扩增后的NK细胞中CD62L的表达未曾改变；使用IL-2扩增后，NKG2A、NCR46表达有所下调，而使用IL-15扩增后则发生相反的作用；IL-2和IL-15两种细胞因子均有上调NKG2D、穿孔素、NCR44表达的作用，且细胞因子之间也存在差异；IL-15有上调NK细胞颗粒酶B的表达作用；细胞因子扩增的NK细胞毒活性显著增高，但细胞因子之间无显著差异。 结论在无血清培养条件下，IL-2和IL-15都能使脐带血中NK细胞出现有效地扩增。虽然CD3-CD56+NK细胞经过两种细胞因子扩增后，与其功能相关的免疫表型呈现出不同的改变特征，但其细胞毒活性均显著增加，且两种细胞因子之间无显著差别，协同作用不明显；NK细胞毒活性是各种活性分子共同作用的结果。

关键词： 猪间充质干细胞   猪诱导多能干细胞   增殖能力   分化潜能  

摘要： 本研究总结了猪间充质干细胞和诱导多能干细胞以及猪诱导多能干细胞的研究进展，研究了体外长期培养对猪脂肪间充质干细胞（Adipose mesenchyme stemcell, AMSC）和骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cell, BMSC）的增殖能力和多功能性基因表达的影响。研究发现，AMSCs和BMSCs能在体外培养至第20代。随着培养代数的增加，AMSCs和BMSCs的增殖能力都有所下降，并且AMSCs的生长能力低于BMSCs。经过体外诱导分化实验证实，第20代的AMSCs和BMSCs依然具有分化为脂肪和骨细胞的能力。Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc和Nanog这五种重编程转录因子在各代数的猪间充质干细胞上均有表达。除了第20代的AMSCs，其余代数AMSCs表达Klf4的量高于相应代数的BMSCs，而任一代数BMSCs表达Oct4和Sox2的量也明显高于相应代数的AMSCs。经过蛋白定位发现，每种重编程转录因子在两种间充质干细胞的核与质中均有表达。本实验还研究了AMSCs和BMSCs重编程到诱导多能干细胞（iPSCs）是否具有优越性，以及高代数AMSCs和BMSCs进行重编程的能力。研究发现，当用第0代的AMSCs和BMSCs进行iPSCs诱导时，重编程速度和效率都明显高于猪胎儿成纤维细胞。第5代的AMSCs和BMSCs重编程速度和效率与第0代间充质干细胞相比，虽然有所下降，但差异不显著。当用第10代的AMSCs和BMSCs进行iPSCs诱导时，AMSCs没能形成克隆，BMSCs虽然形成了克隆，诱导速度和效率跟前两代的间充质干细胞相比不仅显著降低，获得的iPSCs质量也明显低于第0代和第5代细胞诱导的iPSCs克隆。外源基因检测结果显示本实验所获得的iPSCs克隆仍表达外源基因，细胞未被完全重编程，因此猪iPSCs诱导的条件和方法还需进一步改进。

关键词： 青年科学家奖   细胞内   细胞生物学   生命科学   南开大学   采访   遗传学   研究所   霍华德   获奖者   医学   眼镜   学院   人才   教授   记者   博导  

摘要： 你能不能不采访我?'一见面,胡俊杰就来了这么一句.1 979年出生的胡俊杰,自2008年6月起受聘为南开大学生命科学学院遗传学与细胞生物学系教授、博导,是我国7名首届'霍华德休斯医学研究所国际青年科学家奖'获奖者中年龄最小的.后经记者多方解释、好说歹说,这个戴黑框眼镜、脸色白晳的年轻人才勉强接受了采访.

关键词： 甜菜   丛根病   活性氧   细胞壁成分   组织化学   细胞化学  

摘要： 甜菜是我国乃至世界上重要的糖料作物和经济作物之一,由于长期以来受到甜菜各种病害的袭击,不仅给甜菜生产造成巨大的经济损失,并且制约制糖业的发展。甜菜丛根病(Rhizomania)是危害最为严重的病害之一,该病以多粘菌(Polymyxa betae)为传播介体,由甜菜坏死黄脉病毒(Beet necrotic yellow vein virus, BN YVV)引起的土传病害。近年来,国内外主要从病原基因组学、分子生物学及寄主生理生化角度来探讨病毒致病机理和甜菜抗丛根病机理。本研究以甜菜抗、感丛根病品种与BNYVV互作体系为研究对象,对不同互作体系中的形态学特征和细胞学特征进行了比较研究,利用生理生化方法明确不同互作体系间活性氧(H2O2和02-·)及保护酶系(POD和SOD)产生的时间变化特征,采用电镜细胞化学标记技术在亚细胞水平上对活性氧(H2O2和O2-·)及保护酶系(POD和SOD)的空间分布进行了定位,并检测了不同互作体系间木质素组织定位的差异及细胞壁糖蛋白在寄主细胞内积累的规律,以明确活性氧代谢及细胞壁成分在甜菜抗丛根病性中的作用,从而为进一步揭示甜菜抗丛根病信号传导机制奠定理论基础。通过研究取得的主要结果如下： 1.利用光学显微技术和透射电镜技术研究了甜菜抗、感丛根病品种与BNYVV互作过程中的形态学和超微结构特征。结果表明,不同寄主与病毒互作体系的甜菜块根形态学和超微结构上均表现出明显的差异,而甜菜叶脉受该病毒侵染后其形态学解剖结构无差异,但超微结构受到影响。形态学水平上,抗、感病品种表现为表皮破坏,皮层薄壁细胞组织产生裂隙,大多细胞都脱落,木质部附近的木薄壁细胞破损,完全丧失了对根部的保护作用。其中感病品种比抗病品种表现被伤害程度更为严重,其皮层薄壁细胞几乎全部脱落,生长速度缓慢,根部发育受阻。而叶脉的形态解剖结构与对照比较,未发现异常变化。另外抗病品种比感病品种有更发达的维管束结构。在亚细胞水平上,BNYVV对感病品种的细胞超微结构破坏严重,整个细胞变形,空虚化,细胞核结构发生紊乱,线粒体和高尔基体明显增多,细胞质中小液泡增多,在液泡膜边缘可见到一些纤细丝状物质的圆形或卵圆形小泡突入液泡中。叶脉细胞叶绿体完全瓦解,出现许多嗜锇颗粒。而抗病品种细胞超微结构破坏较轻,寄主细胞产生一系列显著的结构防卫反应：形成细胞壁沉积物及液泡膜上显示出黑色颗粒状沉积物等。说明组织形态结构变化和细胞器病理变化与甜菜抗丛根病性有关。 2.利用生理生化方法和电镜细胞化学标记技术研究了甜菜-BNYVV互作过程中H2O2和O2-·产生的时间变化特征和空间分布定位。研究结果表明,甜菜抗、感丛根病体系均在侵染早期出现大量H2O2和O2-·,其中抗病体系的H2O2和O2-·产生量明显高于感病体系。H2O2在抗病和感病体系中的分布位置基本相似,多分布在块根、叶脉细胞的液泡膜和质膜上,叶脉细胞间隙也有H2O2的分布,而O2-·在抗病品种块根与叶脉细胞的质膜上定位,感病品种的则在液泡膜上被发现。而且感病体系H202和O2-·沉积量明显弱于抗病体系。H2O2和O2-·产生量和分布与甜菜抗丛根病性有密切联系,不同部位定位的H2O2和O2-·作为信号分子,参与了甜菜对病毒侵染的防御反应。 3.采用生化检测及酶细胞化学方法研究了甜菜与BNYVV互作过程中POD和SOD的活性及其在细胞内分布特征。结果表明,病毒感染前POD主要定位在甜菜块根细胞细胞壁及叶脉细胞线粒体和细胞间隙,当病毒感染后,抗、感病甜菜品种块根皮层细胞的细胞壁、质膜和液泡膜上的POD及叶脉薄壁细胞的细胞壁、质膜、液泡膜、线粒体、细胞间隙上的POD活性均比其对照显著升高,抗、感病甜菜品种在POD分布部位上没有区别,但两者沉积量有所差异,抗病品种明显高于感病品种;SOD在未感染病毒的抗、感病甜菜块根皮层薄壁细胞质膜与液泡膜,叶脉厚角组织薄壁细胞质膜及叶脉细胞线粒体、细胞间隙上被发现,病毒侵染后甜菜抗、感病品种块根SOD在细胞内分布位置相同都分布在质膜和液泡膜,但抗病品种以质膜上分布为主,感病品种以液泡膜上分布为主。抗病品种SOD活性不仅明显高于其对照,也明显高于病毒侵染后的感病品种。甜菜抗、感病品种POD及SOD细胞内分布的沉积量与生理生化检测的酶活性结果一致,从亚细胞学水平说明高活性的POD及SOD是甜菜抗丛根病性生化标记的重要生理机制之一。 4.通过组织化学染色法及电镜细胞化学方法研究BNYVV对甜菜细胞壁中木质素和HRGP的影响。结果显示,BNYVV侵染前后在甜菜抗、感病品种的块根与叶脉横切面的所有导管上均有木质素和HRGP的沉积,块根薄壁组织的细胞壁由外向内也逐渐显示出由深至浅的木质素沉积;抗病品种木质素和HRGP的积累量较感病品种和其对照增加更为显著;说明在甜菜与BNYVV互作体系中,HRG

关键词： 肾细胞癌   miR-199a   RT-qPCR   Caik-1   TOP2A   RT-Qpcr免疫组织化学  

摘要： 研究背景和目的 肾癌是泌尿系统常见恶性肿瘤之一,是起源于肾小管上皮细胞的一种常见肾脏恶性肿瘤约占成人实体恶性肿瘤的2%～3%,占肾脏原发恶性肿瘤的85%-90%。我国近年来肾癌的发病率和死亡率均有上升趋势。目前肾癌的发病原因还不是十分清楚,放化疗治疗效果不佳,虽然根治性的肾切除手术被认为是最有效果的治疗方法,然而进展期肾癌的5年生存率低于10%。肿瘤复发、转移仍是威胁患者生命的主要因素。肾癌的早期诊断较为困难,除影像学检查结果外缺乏早期的实验室诊断指标,使得早期发现早期诊断及治疗具有一定的难度。最新的研究显示肾癌的发生发展与miRNAs之间存在密切的关联,有可能为肿瘤的早期诊断、预后判断及基因治疗提供新的途径。 miRNA是由18～25个核苷酸组成的单链小RNA,广泛存在于真核生物细胞中。它由DNA转录产生,但并不翻译成蛋白质,是一种非编码小分子RNA。miRNA广泛存在于真核生物在蛋白质合成中调节其他基因的功能。miRNA基因约站整个基因组的1%,miRNA通过与靶基因RNA的互补配对在转入后水平对基因表达进行调控,导致mRNA再降解和翻译抑制。miRNA与其靶mRNA分子组成了一个复杂的调控网络,参与包括细胞增殖、凋亡、细胞分化、发育、逆境应答等多种生物学过程。 miR-199a是高度保守的miRNA,在肝癌、宫颈癌、前列腺癌等多种肿瘤中表达异常,并可通过调控细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的改变而参与肿瘤的发生发展,其表达水平有可能作为多种肿瘤临床诊断、病理分型及其预后的标志。 在肾细胞癌与mir-199a的发生、发展的研究鲜有报道本研究目的在于探讨mir199a在肾癌组织及细胞中的表达改变及其对肾癌临床数据的影响,以期为肾癌的发病机制研究开辟新的领域,为mir-199a在肾癌的诊断、治疗及其早期防治领域的实践和应用提供实验依据。 方法：***法提取肿瘤与癌旁组织总RNA,应用分光光度计法检测RNA浓度、纯度,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,使用实时定量RT-PCR(染料法)技术检测67例肾透明细胞癌患者肿瘤及瘤旁正常组织mir-199a的表达,分析表达的差异与临床病理特征等多种指标之间的关系。 2.对肾癌细胞系Caki-1使用LipofectamineRNAiMAX瞬时转染模拟物(mimic)和1niR-199a-5p.应用MTS检测细胞增殖,生长曲线;应用流式细胞仪检测比较转染后细胞周期分布变化、细胞凋亡变化;应用Transwell试验检测细胞迁移能力变化。 统计学处理(二级标题)采用SPSS17.0对实验结果进行统计学处理,计数资料组间比较应用x2检验确切概率法,生存分析应用Kaplan-Meier法Log rank检验,多因素分析采用c0x回归,实验室数据采用的方差分析,组内两两比较采用LSD法,检验水准为a=0.05。 结果： 1.在67例肾细胞癌和癌旁组织中miR-199a均有不同程度的表达,通过qPCR分析显示在肾细胞癌中47例niR-199a的表达低于癌旁正常组织,均值13.7倍。miR-199a的表达与肿瘤浸润程度和肿瘤复发成负相关(χ2=4.215,P=0.040,χ2=6.357,P=0.012),而与年龄、组织学类型、淋巴结转移、远处转移、Fuhman分级等无统计学关联(χ2=0.557,P=0.312;χ2=0.230,P=0.632;χ2=1.755,P=0.185;χ2=0.171,P=0.680;χ2=0.273,P=0.202)。miR-199a下调组生存期显著低于对照组(Log-rank test x2=5.456,p=0.019) 2.通过转染miR-199a1肾细胞癌株Caki-1,经qPCR检测niR-199a转染细胞与NC组和Icell组有显著差异。转染miR-199a,MTS、细胞生长、增值率显著降低,生长曲线斜率下降。流式细胞术检测1miR-199a转染细胞凋亡显著升高。G1期细胞比例升高,G2期细胞比例减少,S期细胞无显著变化。 ***实验显示,转染miR-199a的Caki-1细胞细胞相对于空白组及阴性对照组,细胞穿过小室的数目显著减少。与空白组、阴性对照组相比,转染miR-199a组差别具有统计学意义(,P=0.002;P=0.001)说明Caki-1细胞转染miR-199a后细胞侵袭能力得到抑制. 结论 1通过本研究的检测发现niR-199a在肾癌组织中表达水平显著下调,并且miR-199a表达水平与肾癌患者原发肿瘤浸润、肿瘤复发及病人预后不良有关,提示了niR-199a可能为肾癌临床诊断及病理分级提供参考价值,可能是一种潜在的肾癌预后判断指标。 2本研究通过体外细胞实验发现了在肾癌细胞中的过表达miR-199a,可导致细胞增值受到抑制,影响细

关键词： 肺癌   ILK   RNA干扰   稳定转染  

摘要： 目的：构建特异性抑制ILK基因表达的siRNA真核表达载体，筛选出最佳抑制效率组，并检测其对肺癌A549细胞生物学活性的影响。 方法：根据Genbank中人ILK基因序列，利用在线设计软件设计三对siRNA寡核苷酸链。分别克隆进pGenesil-1质粒中，构建重组pGenesil-ILK1、pGenesil-ILK2、pGenesil-ILK3质粒。经酶切及测序鉴定后，重组质粒稳定转染A549细胞，用半定量PCR及Western-blot分别检测ILK mRNA及蛋白质表达情况，分析各组ILK抑制效率。最后通过流式细胞术及MTT法检测该质粒对肺癌A549细胞增殖及凋亡情况的影响。 结果：酶切及测序证实pGenesil-ILK1、pGenesil-ILK2、pGenesil-ILK3重组质粒构建成功，稳定转染A549细胞后，明显抑制了ILKmRNA及蛋白质的表达，其中pGenesil-ILK1具有最佳抑制效率。流式细胞术检测pGenesil-ILK1A549细胞，结果提示ILK沉默的A549细胞凋亡细胞显著增加（p<0.05），MTT结果提示其细胞增殖能力显著降低（p<0.05）。 结论：成功构建了高效抑制ILK表达的siRNA真核表达载体，抑制A549细胞ILK基因表达可促进其凋亡和抑制其增殖，为肺癌靶向基因治疗研究奠定基础。

关键词： 医学院校   教材   细胞生物学  

ISBN: (纸本)9787030330833

摘要： 细胞生物学是生命科学领域的前沿学科，也是医学的重要基础学科。在21世纪生命科学和医学快速发展的今天，医学生要在有限的时间内掌握细胞生物学的基础理论和基础知识；五年制医学院校教学改革和教学实践，也要求加强基础理论与医学实践的联系。本案例版医学细胞生物学教材适应和顺应了这种需求。本教材包括14章，内容上既注重细胞生物学的基础知识与基本技能，对近年来细胞生物学的热点问题及进展内容也有适量介绍。本教材注重实用性，能满足五年制医学院校各专业细胞生物学教学要求。为避免与其他学科内容的重复，本书对某些内容做了必要的删减

关键词： 马铃薯Y病毒属   细胞生物学   增殖  

摘要： 马铃薯Y病毒属(Potyvirus)是包含范围广、增殖过程复杂但基因组简单的一类重要病毒,对农业生产造成重大的经济损失。笔者介绍了马铃薯Y病毒属病毒的细胞生物学研究进展,并对potyviruses的复制模型、运动方式和途径等作了相关总结。

关键词： 金属-金属   髋关节置换   钴   纳米颗粒   细胞毒性   遗传毒性   活性氧   谷胱甘肽还原酶   超氧化物歧化酶   过氧化氢酶  

摘要： 研究背景：现代金属-金属(MOM)人工髋关节置换系统提高了假体的耐磨性和抗疲劳强度，在临床上表现出优良的早中期效果。作为植入材料，不可避免地面对机械物理、电化学腐蚀等多种因素造成的降解，形成具有化学活性的产物。大量研究表明，MOM术后患者血液、尿液中钴、铬离子浓度显著升高。值得一提的是，假体周围组织中发现超细直径的金属颗粒(6-834nm)，主要是含钴基的纳米颗粒。病例研究显示，部分翻修假体周围出现广泛滑膜溃疡伴淋巴细胞、浆细胞浸润;“炎性假瘤”形成—含有血管、坏死组织及多核巨细胞的肉芽肿样改变，且金属磨屑沉淀其中，局部淋巴结凝固性坏死。同时，假体植入时间的延长伴随外周血淋巴细胞染色体易位率和染色体非整倍体率提高，T细胞、白细胞和骨髓细胞水平下降;部分患者血清中发现钴、铬特异性Ig E。体外研究表明，金属纳米颗粒自身尺寸效应带来了有别于宏观粒子及相应离子的生物学效应。因此，探讨钴纳米颗粒(CoNPs)对机体免疫系统的生物学效应及其机制具有重要意义。 第一部分钴纳米颗粒对外周血T淋巴细胞的细胞毒性和遗传毒性作用 目的：研究钴纳米颗粒(CoNPs)对外周血T淋巴细胞的细胞毒性和遗传毒性作用，同时以钴离子(Co)作为比较研究，初步探讨MOM术后一系列复杂生物学反应的病因。 方法：以正常外周血T淋巴细胞作为试验系统，采用不同浓度的CoNPs和Co对细胞进行处理，在不同时间点利用3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)及乳酸脱氢酶(LDH)分析方法检测细胞生存率，利用彗星试验(Comet assay)及微核试验(MNT)检测细胞DNA和染色体损伤，评估CoNPs和Co的细胞毒性和遗传毒性。同时，使用ICP-MS(Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry)检测手段，评估CoNPs细胞外释放离子的情况。 结果：(1)CoNPs及Co对外周血T淋巴细胞的细胞毒性效应呈现时间、浓度依赖性(2)CoNPs、Co细胞毒性起效浓度分别约为10、50μM，4h CC50分别为10、50μM，说明CoNPs的细胞毒性效应强于Co。(3)50、100μM CoNPs在4、24、48h释放(%)分别为5.12±1.44、14.22±3.17、32.78±2.70及6.27±2.49、18.78±4.29、38.81±2.11，随着时间的延长离子释放逐步增加，呈现时间依赖关系(P<0.001)。各时间点释放的浓度均小于Co细胞毒性起效浓度(50μM)，提示CoNPs的细胞毒性作用并不依赖于细胞外Co释放。(4)LDH实验结果和MTT吻合。(5)CoNPs在3、6μM剂量，尾部DNA含量分别为8.73±4.60、9.64±4.77，Olive尾矩分别为2.16±1.19、9.66±4.73与溶剂对照组尾部DNA含量(1.46±0.76)和Olive尾矩(0.35±0.21)相比均有显著差异(P<0.01);Co各剂量组尾部DNA含量和Olive尾矩与溶剂对照组相比均无显著差异(P>0.05)。结果说明，CoNPs可以引起外周血T淋巴细胞DNA链断裂，导致初始DNA损伤;本研究设计的浓度及染毒时间内，未发现Co造成T淋巴细胞DNA损伤。(5)CoNPs在6μM剂量，微核率(BNMN(‰))为13.69±1.85，与对照组(5.46±1.28)相比有显著差异(P<0.05);Co各剂量组微核率与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。说明CoNPs可以引起外周血T淋巴细胞染色体损伤;本研究设计的浓度及染毒时间内，未发现Co造成T淋巴细胞染色体损伤。 结论：(1)CoNPs可以对人免疫细胞产生细胞毒性及潜在遗传毒性作用，可能是通过自身特殊动力学行为介导，不依赖于细胞外Co释放，且毒性作用强于Co。(2)试验结果部分解释了MOM术后假体周围炎性假瘤形成、外周血免疫细胞减少及染色体畸变的原因。(3)本研究无法排除CoNPs和Co是否存在协同效应，有待后续深入探讨。 第二部分钴纳米颗粒对外周血T淋巴细胞生物学效应机制的研究 目的：研究CoNPs的表征特性、介质中分散情况、是否能进入细胞、细胞处理后的氧化应激水平，初步探讨CoNPs生物学效应的机制。 方法：以PBS及含血清培养基作为溶剂，利用TEM观测CoNPs分散情况，同时检测CoNPs的粒径分布。细胞经过CoNPs处理后固定、脱水、浸、包埋、切片、染色，借助TEM观测CoNPs进入细胞的情况。CoNPs和Co分别对细胞进行染毒，采用荧光分光法检测细胞内活性氧(ROS)水平、谷胱甘肽还原酶法检测还原型谷胱甘肽(GSH)水平、邻苯二酚氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、H2O2还原法检测过氧化氢酶(CAT)活力、GSH氧化法检测谷胱甘肽过氧化物酶(