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关键词： c-kit   羊水   间充质干细胞   心肌   细胞分化  

摘要： 目的比较人羊水来源c-kit与c-kit-间充质干细胞(AFSCs)的生物学特征及体外心肌样细胞分化能力。方法通过常规产前诊断或自愿引产，以羊膜腔穿刺术获取13份孕中期羊水(16-31周)，通过流式细胞仪分选c-kitAFSCs，比较c-kit与c-kit-AFSCs的细胞形态及生长曲线，流式细胞仪，免疫细胞化学分析对两种细胞进行表型鉴定，比较其体外向成骨、成脂及心肌样细胞诱导分化能力。RT-PCR，real-time PCR和Weston blot检测相关基因及蛋白的表达。结果13份羊水标本中，有5份标本可以分选到c-kitAFSCs，分布在孕16-22周，分选的细胞数量占贴壁细胞的(3.30±1.24)%。AFSCs以成纤维状为主，可以稳定传代，体外培养可增殖到50代以上。经过c-kit分选后，细胞呈均匀一致的长纤维状，排列规律。C-kit及c-kit-AFSCs具有相似的生长曲线。两种细胞均具有间充质干细胞特征，表达间充质干细胞标记(CD29，CD44，CD73，CD90，CD105)不表达造血细胞系标记(CD34，CD45)，表达I类人类主要组织相容性抗原(HLA-ABC)，不表达II类人类主要组织相容性抗原(HLA-DR)。Oct-4，Sox2及Nanog等胚胎干细胞标记在c-kitAFSCs的表达比率明显高于c-kit-AFSCs。两种细胞在体外均可以向成脂细胞、成骨细胞分化。成脂细胞诱导后，可以看到细胞内脂滴聚集，油红O染色阳性。成骨细胞诱导后，可以看到钙盐沉积，Von Kossa染色阳性。两种细胞分别在体外通过5-azaC(5-氮胞苷)向心肌细胞诱导，诱导后c-kitAFSCs可以检测到GATA-4，α-actin，Cx43和cTnT基因及蛋白的表达。而c-kit-AFSCs在诱导后只表达GATA-4的基因及蛋白。结论羊水来源c-kit及c-kit-AFSCs均表达间充质干细胞表型特征，体外可以向成脂、成骨细胞分化。然而，c-kitAFSCs的心肌样细胞分化能力明显强于c-kit-AFSCs，可能与c-kitAFSCs具有某些胚胎干细胞特征有关。

关键词： CXCL12/CXCR4生物学轴   CXCL12因子   CXCR4受体   AMD3100   Tca8113细胞   CCK-8   PCR   增殖   侵袭   transwell  

摘要： 研究背景： 舌部鳞状细胞癌是口腔颌面部肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一,它具有：生长速度快,局部侵袭力强,淋巴结转移率高等特点。这些生物学特征,特别是易于向颈部淋巴结转移的特性对患者预后影响很大,因此研究口腔颌面部舌鳞癌细胞的增殖,侵袭及转移对提高患者的治愈率和生存率具有非常重要的意义。 趋化因子是一类能够刺激白细胞的趋化性,吸引中性粒细胞、单核／巨噬细胞等炎性细胞移动到炎症灶,并增强炎性细胞的吞噬杀伤功能,促进它们释放炎症蛋白和炎症介质,直接参与免疫调节和免疫病理反应的小分子分泌蛋白。趋化因子CXCL12对淋巴细胞有强烈的趋化作用并在发育及免疫系统中起重要作用,其在体内多个器官中都可以表达。CXCR4是趋化因子CXCL12的特异性受体,其在体内广泛存在,如淋巴细胞、内皮细胞等。最新研究发现,很多恶性肿瘤细胞表面都可以检测到高表达的CXCR4受体,如乳腺癌,直肠癌,胃癌等。恶性肿瘤细胞能够高表达趋化因子受体,同时体内的某些器官能够表达其相关配体,高表达CXCR4受体的肿瘤细胞能够在CXCL12的趋化作用下,出现器官特异性转移。CXCL12/CXCR4生物学轴已被证明与多种恶性肿瘤的增殖,侵袭及转移密切相关。故通过研究CXCL12/CXCR4生物学轴与恶性肿瘤生物学行为的相互关系,为肿瘤的治疗提供新的思路和方法。 目的： 为了研究探讨CXCL12/CXCR4生物学轴对舌部鳞状细胞癌生物学行为的影响,本实验旨在通过应用一定浓度的趋化因子CXCL12及CXCR4受体的抑制剂AMD3100,以体外培养的舌鳞癌细胞为研究对象,检测舌鳞癌细胞CXCR4受体的表达情况,同时观察研究CXCL12/CXCR4生物学轴对舌鳞癌细胞增殖,侵袭转移的影响,为舌鳞癌的侵袭转移研究提供部分理论基础。 材料与方方法： 1.细胞株：舌鳞癌细胞Tca8113购自中国科学院上海生命科学研究院 2.主要材料：培养基RPMI-1640,胎牛血清(杭州四季青公司),CCK-8试剂(Sigma), DMSO(二甲亚砜),CXCL12因子(博奥森),AMD3100, CXCR4抗体(博奥森),RNA提取试剂TRIzol(美国Invitrogen公司),Taq DNA聚合酶(Transgene), Matrigel(美国BD公司),Transwell小室及配套孔板(costar公司)等。 3.方法： (1)舌鳞癌Tca8113细胞于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液(含100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素),于37℃、5%CO2的饱和湿度孵箱中培养,每2-3天换液一次,0.25%的胰蛋白酶消化传代 (2)制作细胞爬片,通过SP法细胞免疫组化检测Tca8113细胞表面CXCR4受体的表达 (3)应用CCK-8方法检测CXCL12/CXCR4生物学轴对舌鳞癌细胞Tca8113增殖的影响及抑制剂AMD3100对其增殖行为的干预。 (4)应用PCR,检测一定浓度的CXCL12及其特异性受体AMD3100对舌鳞癌Tca8113细胞CXCR4受体mRNA表达量的影响。 (5)体外应用铺有Matrigel的Transwell小室,研究CXCL12/CXCR4生物学轴对舌鳞癌细胞Tca8113侵袭转移的影响及抑制剂AMD3100对其的干预。 结果： 1.体外培养的舌鳞癌细胞Tca8113,生长规律,状态良好,生长曲线近似S形。一般在细胞生长至第2-3天时进入对数生长期,在镜下,细胞排列紧密,形态不一,此期可行传代或者进行实验研究；1周左右细胞的增殖及分裂能力开始下降,形态出现变化,凋亡细胞数目增多。 2.免疫组化结果示：CXCR4受体在4组中均出现阳性表达,其中CXCL12因子刺激组表达量最高,AMD3100预先孵育组CXCR4受体表达量最少,其他两组差别不明显,CXCR4受体主要在胞膜上表达,胞浆及核仁表达量较少。 3.通过应用RT-PCR,基因水平检测CXCR4受体mRNA发现,四组均表达CXCR4受体]mRNA, CXCL12因子刺激组最高,抑制剂AMD3100预先干预组表达量最低,其他两组差别不明显,表达结果同免疫细胞化学结果基本吻合。 4.通过CCK-8试剂盒检测CXCL12/CXCR4生物学轴对舌部鳞状细胞癌增殖行为的影响,低浓度的CXCL12因子对Tca8113细胞的增殖作用不明显,100ng/ml浓度的CXCL12因子能明显促进肿瘤细胞的增殖,且对Tca8113细胞的增殖作用随着作用时间的延长,促增值效应越明显。在相同的时间点,100ng/ml浓度的CXCL12因子刺激组OD值最高,1μg/mlAMD3100预先孵育各趋化因子组,可不同程度的抑制CXCL12因

关键词： miRNA-451   人A549肺癌细胞   生物学特性  

摘要： 目的通过构建miRNA-451真核表达质粒，转染入人A549肺癌细胞中，研究miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡四个方面的影响，以及miRNA-451对人A549肺癌细胞中iNOS基因表达的影响的研究。 方法通过miRBase数据库检索，查找hsa-miR-45序列，并由此hsa-miR-45序列设计出对应的两条寡核苷酸片段，通过人工合成，将片段转入pGenesil-1.1载体中，最后通过酶切鉴定、送检测序证实目的质粒构建成功，即miRNA-451真核表达载体（pGenesil-1.1-miRNA-451质粒）;利用LipofectamineTM2000脂质体转染试剂盒将目的质粒pGenesil-1.1-miRNA-451及空白阴性对照质粒pGenesil-1.1-control分别转染入人A459肺癌细胞中，再经过抗性筛选试剂G418筛选出遗传性稳定的细胞克隆，以此获得pGenesil-1.1-miRNA-451及pGenesil-1.1-control稳定表达的细胞株;运用Transwell体外侵袭实验检测转染前后细胞侵袭能力;划痕实验检测转染前后细胞迁移能力;流式细胞术检测转染前后细胞增殖与凋亡能力;MTT法检测细胞生长增殖能力;Western blot、免疫细胞化学及免疫荧光细胞化学检测iNOS蛋白表达差异。 结果经酶切鉴定及测序证实pGenesil-1.1-miRNA-451重组质粒构建成功，稳定表达了pGenesil-1-miRNA-451的人A549肺癌细胞与稳定表达pGenesil-1.1-control的人A549肺癌细胞及未处理的人A549肺癌细胞相比，其细胞侵袭能力、迁移能力和细胞增殖能力均受到抑制影响，而细胞凋亡无明显变化;iNOS蛋白水平表达明显下调受到抑制。 结论miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭转移和增殖能力均具有显著的抑制作用，但对细胞的凋亡作用影响不明显;miRNA-451对人肺癌A549细胞中iNOS基因的蛋白质水平具有明显的抑制作用。

关键词： 转录因子Glil   乳腺癌   细胞生物学   基因调控  

摘要： 乳腺癌的发病率在所有女性肿瘤中占首位，达22.9％，并且乳腺癌的致死率也在女性癌症中排名第一。近年来乳腺癌在中国妇女中的发病率正悄然上升，在过去的十年间，北京、上海乳腺癌的发病率上升分别超过20％及30％，已接近西方乳腺癌高发国家的水平，因此加强对乳腺癌发生与发展的机制研究已刻不容缓。<br>　　 Hedghog(Hh)/Gli信号通路是一条经典的胚胎发育信号系统，在胚胎发育和胚胎形成后细胞的生长和分化过程中都起着重要作用。转录因子Gli1既是Hh通路下游的效应分子，也是该通路调节的靶蛋白，其表达也是Hh/Gli信号通路激活的标志。尽管已有研究表明，Hh/Gli通路参与了乳腺的正常发育，且与乳腺癌的发生、发展密切相关。例如，Gli1及其他Hh通路成员在乳腺癌组织中常见异常表达；Gli1的高表达可以促进乳腺癌细胞的增殖，并能抑制雌激素受体(estrogenreceptora，ERa)的表达。但是Gli1对乳腺癌其他生物学行为的影响还不很清楚，对其作用的机制也缺乏深入的研究。加之乳腺癌是一种包含多种类型的不均一性疾病。除了不同的病理类型外，还可根据癌细胞雌激素受体(ER)的表达情况，分为雌激素依赖型(ER阳性)和非依赖型(ER阴性)乳腺癌两大类型。不同类型乳腺癌之间具有明显不同的生物学特性和临床表现。Hedghog(Hh)/Gli信号通路对这两种不同乳腺癌的增殖、分化、迁移等是否有不同的影响也不清楚。<br>　　 MCF-7和T47D细胞是ER阳性的雌激素依赖性细胞系，其分化程度相对比较高，而增殖和侵袭能力都比雌激素非依赖性乳腺癌细胞，如MDA-MB-231和SK-BR-3细胞低。本校病理生理教研室在前期研究中发现Gli1在MCF-7和T47D中的表达明显低于MDA-MB-231和SK-BR-3，并显示Gli1的表达水平与ER的表达呈负相关，与乳腺癌的增殖呈正相关。本课题在前期研究的基础上，拟进一步研究Gli1在乳腺癌增殖、粘附、迁移、抗凋亡等生物学行为中的作用及可能机制。我们首先建立了持续性稳定高表达Gli1的MCF-7、T47D细胞系，观察高表达Gli1对乳腺癌细胞粘附、迁移、抗凋亡等生物学特性的影响，继而通过全基因组寡核苷酸微阵列芯片分析，寻找转染Gli1表达质粒的MCF-7细胞与转染空载质粒的MCF-7细胞之间的差异表达基因，分析受Gli1调控的基因在乳腺癌生物学行为中的作用，并预测乳腺癌细胞中Gli1的靶基因，探讨Gli1影响乳腺癌生物学特性的可能机制，进一步研究Gli1在乳腺痛发生发展中作用，寻找乳腺癌的治疗的可能靶点。<br>　　 为研究Gli1在乳腺癌发生和发展中的作用，全文由以下三个部分组成：<br>　　 第一部分，稳转高表达Gli1对乳腺癌细胞增殖、迁移、粘附和凋亡的影响<br>　　 目的：探讨Gli1在乳腺癌细胞增殖、粘附、迁移、凋亡等生物学行为中的作用。<br>　　 方法：采用细胞增殖实验、粘附实验、Transwell迁移实验等，与转染空载质粒的对照细胞相比，观察稳定转染高表达Gli1对乳腺癌MCF-7、T47D细胞株增殖、粘附、迁移的影响。给予紫杉醇(paclitaxel，PTX)100nM处理24小时、48小时，采用CCK-8法检测高表达Gli1对PTX凋亡诱导下细胞存活率的影响。<br>　　 结果：成功建立稳转高表达Gli1的MCF-7、T47D细胞株及稳转空载质粒的对照细胞。稳转高表达Gli1促进乳腺癌细胞增殖，并能明显促进细胞的粘附；其中稳转高表达Gli1的MCF-7、T47D细胞粘附能力分别是对照细胞的1.58、1.41倍(p<0.05)；Transwell小室迁移实验中发现稳转高表达Gli1的MCF-7细胞组迁移的细胞数为对照的31.6％(p<0.05)。紫杉醇处理细胞24h、48h，各个时间点高表达Gli1细胞组细胞的存活率均高于对照组(P<0.05)。<br>　　 结论：高表达Gli1能促进乳腺癌细胞MCF-7、T47D的增殖、粘附，抑制乳腺癌细胞MCF-7的迁移，促进其在凋亡诱导剂PTX作用下的存活。<br>　　 第二部分，Glil调控的靶基因的筛选与鉴定<br>　　 目的：筛选Gli1调控的基因，探讨Gli1对乳腺癌生物学行为影响的可能机制，寻找Gli1的靶基因。<br>　　 方法：采用人全基因组寡核苷酸微阵列芯片技术，筛选稳转高表达Gli1的MCF-7与对照细胞之间的差异表达基因，并用QRT-PCR方法验证。生物信息学分析预测Gli1可能的靶基因，采用QRT-PCR方法检测重组人Hedgehog通路配体SHH-N(

关键词： 教材   细胞生物学   高等学校  

ISBN: (纸本)9787030352958

摘要： 本书在作者教学组成员多年教学实践的基础上编著而成。本书内容全面、重点突出、结构合理、条理清晰，反映了该学科的最新进展，在内容编排上从细胞的共性和基本结构切入，逐步转入到以真核细胞为重点的细胞结构、功能、过程及其调控的主体内容，有助于学生对生命本质的认识、 ……

关键词： 神经生长因子-β   D-半乳糖胺   L-02细胞   药物作用   NGF   受体   TrkANGFR   p75NTR   人肝硬化组织   L-02细胞   神经生长因子-β   L-02细胞   细胞增殖   细胞凋亡   p75NTR蛋白   L-02细胞   细胞增殖   细胞凋亡  

摘要： 肝脏是人体生物转化和解毒的重要器管。病毒、内毒素、代谢与免疫等因素可引起肝细胞损伤、坏死/凋亡。肝细胞坏死/凋亡是急、慢性肝脏疾病包括爆发性肝炎、肝纤维化等肝病的基本病理过程。肝纤维化是由于损伤的肝细胞释放的凋亡小体（apoptotic bodies），被库普弗细胞（kupffer cell）和肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）吞噬，释放炎症趋化因子和细胞因子，激活HSC和门脉成纤维细胞（portalfibroblast）转分化为肌成纤维细胞（myofibroblast, MyoFB），导致细胞外基质（extra-cellular matrix, ECM）过度沉积的病理过程。因此，保护肝细胞，减少肝细胞凋亡是治疗肝纤维化的重要策略。 神经生长因子（nerve growth factor, NGF）由神经细胞和非神经细胞合成，调控细胞的分化、增殖及凋亡，是多效性的生长因子。NGF通过旁分泌或自分泌方式，调节神经营养素受体TrkANGFR（tropomyosin trkA tyrosine kinase receptor）和p75NTR（p75pan-neurotrophin receptor）的表达，调控成纤维细胞、炎症及免疫等细胞活性/凋亡，参与组织创伤-修复和组织重塑的病理生理过程。肝损伤时，增殖的肝细胞和活化的HSC合成NGF通过p75NTR信号传导途径诱导HSC分化/凋亡，调控肝损伤-修复病程。目前，NGF与p75NTR蛋白对肝细胞生物学作用的相关研究较少，本研究旨在探讨外源性重组人NGF和p75NTR蛋白对肝细胞生物学作用。 本实验主要包括以下四部分 第一部分：神经生长因子-β对D-半乳糖胺诱导L-02细胞损伤的保护作用 目的：观察外源性神经生长因子-β（NGF-β）对D-半乳糖胺（D-galactosamine, D-GalN）诱导L-02细胞损伤的保护作用。 方法：体外培养L-02细胞，用不同浓度的NGF-β预处理L-02细胞30min后，加入40mmol/L D-GalN诱导细胞损伤，水飞蓟宾（100mg/L）为阳性对照组，未予处理组为阴性对照，孵育24h，倒置显微镜下观察细胞形态学的变化，XTT法观察各组细胞活性，流式细胞仪（JC-1）法测细胞线粒体膜电位，比色法检测细胞培养上清液中的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）、丙二醛（malondialdehyde, MDA）、白蛋白（Albumin,ALB）和细胞裂解液中谷胱甘肽（glutathione, GSH）的含量。 结果：D-GalN孵育的L-02细胞膜不连续，呈球形，细胞核与细胞质的亮度对比明显降低；LDH、MDA浓度明显增加，ALB、GSH浓度明显降低；细胞活性、细胞线粒体膜电位明显下降。外源性NGF-β预处理组L-02细胞膜连续，细胞核与细胞质的亮度对比接近未受损伤细胞；NGF-β促进D-GalN损伤的L-02细胞增殖，LDH、MDA浓度明显降低，ALB、GSH浓度明显增加，细胞线粒体膜电位好转。 结论：外源性NGF-β对D-GalN诱导损伤的L-02细胞有明显的保护作用，可能与NGF-β促进L-02细胞合成GSH抑制脂质过氧化反应和恢复线粒体膜电位有关。 第二部分：NGF及TrkANGFR、p75NTR在人肝硬化组织及L-02细胞表达 目的：观察人肝硬化组织和体外培养的L-02细胞NGF及受体TrkANGFR和p75NTR的表达。 方法：免疫组织/细胞化学染色法观察人肝硬化组织石蜡切片和体外培养的L-02细胞NGF、TrkANGFR和p75NTR蛋白表达，Real-time PCR法观察L-02细胞NGF、TrkANGFR和p75NTRmRNA表达情况。 结果：肝硬化组织石蜡切片和L-02细胞NGF、p75NTR、TrkANGFR免疫组织/细胞化学染色呈阳性，NGF主要位于肝细胞的细胞质和细胞核，TrkANGFR、p75NTR主要位于细胞膜和细胞质。Real-time PCR法L-02细胞表达NGF、TrkANGFR和p75NTRmRNA。 结论：人肝硬化组织和L-02细胞检测到NGF、TrkANGFR和p75NTR的表达。 第三部分：神经生长因子-β通过TrkANGFR信号途径促进L-02细胞增殖 目的：观察外源性神经生长因子-（βNGF-β）对L-02细胞NGF及受体TrkANGFR和p75NTR表达的影响，NGF-β对L-02细胞的生物学作用。 方法：体外培养L-02细胞，免疫细胞化学和荧光定量PCR法，分别检测NGF、TrkANGFR、p75NTR在L-02细胞中

ISBN: (纸本)9787030335159

关键词： 脂质体   质粒   转染   HUVECs   Survivin   VEGF   血管形成  

摘要： 婴幼儿血管瘤是婴幼儿期最常见的良性肿瘤，是“血管形成依赖性”疾病的典型代表，发病率达102%，男女比例1:3。血管瘤由大量新生毛细血管和增殖的内皮细胞组成，而内皮细胞的增殖和凋亡是血管形成的核心。如何能通过干预血管形成中的关键基因，以控制内皮细胞的增殖和凋亡，是促进或抑制血管形成的关键。目前关于内皮细胞增殖和凋亡的分子机制尚不完全明确。Survivin是新近发现的、迄今为止最强的凋亡抑制因子，有研究表明及本课题前期研究发现survivin、VEGF血管瘤不同时期表达有差异并相关。本研究采用脂质体介导的转染方法，将survivin基因导入体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，上调survivin基因表达，探讨survivin基因过表达对血管内皮细胞生物学活性的影响，以揭示survivin基因在血管形成中的作用，为寻找促进和抑制血管形成的新靶点提供理论和实验依据。 第一部分构建人survivin基因的真核表达载体 目的：构建带EGFP的人survivin基因真核表达载体重组质粒pEGFP-N3/survivin。方法：采用RT-PCR技术，从增生期血管瘤内皮细胞中获得带有EcoRⅠ和BglⅡ酶切位点的目的基因survivin，经过T-A克隆，与质粒pEGFP-N3构建重组质粒pEGFP-N3/survivin，并对重组质粒进行酶切、测序鉴定。结果：经限制性酶切鉴定及测序分析证实pEGFP-N3/survivin目的基因序列正确。结论：成功构建人survivin基因真核表达载体pEGFP-N3/survivin，可满足本实验的相关需要。 目的：通过脂质体介导survivin基因转染HUVECs后，改变其生物学行为，促进细胞生长增殖，探讨survivin基因参与血管形成的机制。方法：采用脂质体介导重组质粒pEGFP-N3/survivin转染HUVECs，使细胞中survivin表达上调;RT-PCR法检测Survivin、VEGF的mRNA表达，免疫细胞化学及Western-blot法检测Survivin、VEGF的蛋白表达;MTT法及绘制细胞生长曲线观察HUVECs的生长增殖能力。结果：1、脂质体介导重组质粒pEGFP-N3/survivin成功转染HUVECs，倒置荧光显微镜下细胞胞浆可见绿色荧光;2、经过免疫细胞化学、RT-PCR及Western-blot法检测证实转染后细胞中的Survivin、VEGF的mRNA及蛋白表达均上调，与正常对照组比较差异有显著性(p<0.05);3、MTT检测及绘制的细胞生长曲线观察到转染后的细胞生长增殖能力增强。结论：1、脂质体介导重组质粒pEGFP-N3/survivin成功转染HUVECs，使细胞中survivin基因过表达。2、Survivin基因过表达提高了HUVECs生长增殖能力3. Survivin基因过表达可改变HUVECs的生物学行为，使VEGF的表达上调，两者具有相关性。4. Survivin基因可能是控制血管形成的关键基因之一，从而成为促进和抑制血管形成的新靶点。

关键词： 细胞生物学教学   能力培养   生物技术   实验技能  

摘要： 为使学生适应现代科学技术的飞速发展,在生物技术专业的细胞生物学理论和实验课程教学中,应重视培养学生分析问题、解决问题的能力。

关键词： CD45-Nestin+细胞   细胞因子   急性移植物抗宿主病   间充质干细胞   骨髓微环境  

摘要： 目的：观察骨髓CD45-Nestin+细胞功能在aGVHD宿主中的变化，阐明其介导造血干细胞归巢、支持造血的作用及在骨髓型GVHD中可能的作用和机制。方法：1、构建急性移植物抗宿主病（aGVHD）小鼠模型。2、检测移植当天、+3天、+7天、+14天、+21天及+28天，各组小鼠骨髓上清中及骨髓CD45-Nestin+/CD45-Nestin-细胞内CXCL-12、SCF、IL-7及VCAM-1相关趋化因子的水平。3、检测各组小鼠骨髓中供体细胞植入比例，并检测移植后+7天、+14天各组小鼠骨髓HSC细胞表面CXCR-4及凋亡相关因子Fas、Casepase3的表达。结果：1、成功构建小鼠aGVHD模型。2、移植后aGVHD组小鼠骨髓上清中及其骨髓CD45-Nestin+细胞内，趋化因子CXCL-12及造血相关因子SCF、IL-7、VCAM-1的表达水平明显降低。3、移植当天、移植后+3天及+7天，aGVHD组小鼠骨髓中供体细胞比例明显低于BMT组，各组小鼠骨髓HSC细胞在移植后不同时间点，其CXCR4表达及凋亡相关因子Fas、Casepase3的表达均无差别。结论：aGVHD环境下骨髓CD45-Nestin+细胞内趋化因子CXCL-12以及造血相关因子SCF、IL-7、VCAM-1基因表达水平上均受到抑制，介导HSCs归巢的CXCL-12/CXCR4轴功能受损。而供体源的HSC内CXCR-4及凋亡相关因子表达未出现明显变化。因此，aGVHD发病可通过作用于骨髓Niche中CD45-Nestin+细胞的正常生理功能，影响正常HSC的植入及造血分化作用。