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关键词： 医学  

ISBN: (纸本)9787030346339

摘要： 本教材共为15章，包括细胞生物学绪论，细胞生物学一般研究方法，细胞的起源与分子基础，细胞膜的化学组成与特性，细胞表面及其特化结构、细胞膜的功能、细胞内膜系统，线粒体，核糖体、细胞骨架，细胞核与遗传信息储存，细胞中遗传信息的传递与控制，细胞增殖与细胞周期，细?

关键词： 光形态建成同源亚基3   肺癌细胞   生物学活性   细胞增殖   细胞周期阻滞   细胞凋亡  

摘要： 研究背景与目的： 肺癌是世界上许多国家和地区发病率和死亡率很高的恶性肿瘤，发病率逐年上升，是全球头号癌症杀手，已成为严重的公共健康问题。肺癌的治疗方法主要以化疗、放疗和手术切除为主，但由于化学药物的严重毒副作用和耐药性明显降低患者长期生存率。因此，寻找更理想的治疗方法，延长患者无病生存期，提高长期生存率，改善生存质量，已成为目前医学研究的重要任务之一。进一步明确恶性肿瘤发生与发展的分子生物学机制和基因遗传机制，具有重要意义。小干扰RNA（siRNA）技术是通过双链RNA技术降解靶基因，抑制癌基因的表达，从而抑制恶性肿瘤的发生发展。在受到某些生物、理化等因素作用下，原癌基因可通过突变、重组等发生结构或表达水平的异常，则可成为癌基因，导致肿瘤的发生。明确原癌基因在肺癌发生发展中的作用，并沉默原癌基因，从而达到抑制肺癌细胞生长与增殖，将是未来肺癌治疗的主要研究方向。目前应用慢病毒介导的双链RNA（shRNA）技术已成功诱导基因靶向抑制作用，并广泛应用在恶性肿瘤的治疗中。 构成型光形态建成同源亚基3（COPS3）是COP9信号转导体第3个亚单位，具有高度保守性，通过泛素蛋白酶体通路，降解p53原癌基因，因此COPS3与肿瘤发生发展的关系密切。p53基因突变会导致p53蛋白失活，而COPS3基因过表达也同样导致p53蛋白降解失活，可见COPS3与p53蛋白失活之间有密切联系。骨肉瘤中COPS3蛋白表达增高，来源于高度转移性骨肉瘤的细胞系也表达高水平COPS3蛋白。通过siRNA技术抑制COPS3基因表达，可以抑制高度转移性骨肉瘤细胞系的细胞增殖与转移。这些结果提示，COPS3基因与骨肉瘤的发生发展有关，可能是骨肉瘤的原癌基因，可通过基因靶向作用抑制其表达，从而抑制骨肉瘤细胞生长及增殖，阻止骨肉瘤细胞转移。目前，COPS3基因的这些生物学功能已在骨肉瘤细胞中被发现，然而，这些功能在其他恶性肿瘤组织和恶性肿瘤细胞系中是否存在，目前仍缺乏深入研究。COPS3基因在肺癌细胞中的生物学作用，尚未见研究报道。 本研究的主要研究内容和目的有四个：第一，明确COPS3基因在肺癌细胞系中的表达与功能。本研究选取两株肺癌细胞系，通过siRNA技术干扰COPS3基因表达，进一步观察细胞生长、增殖情况;第二，通过检测细胞周期及凋亡，初步探讨COPS3基因沉默能否影响肺癌细胞的生长及增殖;第三，通过siRNA技术敲低肺癌细胞系COPS3基因后，观察这些肺癌细胞系移植裸小鼠体内后的成瘤情况，进一步明确COPS3与肿瘤发生、发展的关系;第四，通过siRNA技术成功干扰COPS3基因表达后，应用Western blot技术检测下游靶基因p21、细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、CDK4、细胞周期蛋白B1（cyclinB1）、cyclin D1等的表达情况，进一步明确COPS3蛋白与下游靶基因表达的关系，明确肺癌发生发展中新的原癌基因和新的发病机制，为肺癌治疗提供理想靶点和方法。 研究方法： 1.应用siRNA技术干扰COPS3基因表达，采用倒置显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况，Realtime PCR和Western blot法检测肺癌细胞系A549和95D细胞COPS3的敲减效率。 2.采用MTT法、BrdU法和细胞克隆形成试验，检测沉默COPS3基因后，肺癌A549及95D细胞的增殖情况。 3.应用流式细胞术检测COPS3基因敲低后细胞周期的改变情况。 4.应用Annexin V/PI双染流式细胞术，检测COPS3基因敲低后肺癌细胞的凋亡。 5.应用裸小鼠进行体内研究，检测COPS3基因敲低后的肺癌细胞移植裸小鼠体内的成瘤体积、重量及成瘤速率。 6. Western blot技术检测COPS3基因敲低后下游靶基因p21、CDK2、CDK4、cyclinB1和cyclinD1等的表达水平。 研究结果： 1.应用慢病毒介导RNAi技术干扰A549和95D细胞COPS3表达，3天后90%细胞内可见绿色荧光蛋白存在，Realtime PCR和Western blot检测显示，感染si-COPS3后5天的A549和95D细胞中COPS3mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）。 2. MTT检测结果显示，COPS3基因沉默后A549和95D细胞在第5天增殖活力显著降低，细胞增长缓慢（P<0.01）;BrdU检测结果显示，COPS3基因沉默后A549和95D细胞DNA合成活力均显著降低，细胞增殖率显著下降（P<0.01）;克隆形成试验计数结果表明，COPS3基因敲低的A549和95D细胞克隆形成数显著低于对照组（P<0.01），95D细胞敲低COPS3基因后无克隆形成。 3. si-COPS3慢病毒感染后，处于G0/G1期的细胞显著增加，处于S期和G2/M期的细胞显

关键词： 细胞生物学   学报   连续出版物   中华人民共和国   颁奖活动  

摘要： 2012年8月11日,在第四届细胞结构与功能的信号基础研讨会(长春)上举行了第二届《"中国细胞生物学学报》—Cell Signaling Technology细胞生物学科学研究优秀人才奖"暨第一届《"中国细胞生物学学报》—Cell Signaling Technology细胞生物学科研新秀奖"颁奖仪式。与会代表参加了本次

关键词： 医学细胞生物学   选修课   质量  

摘要： 医学细胞生物学选修课在医学类院校教学中的地位和作用日显重要,但目前该选修课教学管理还存在着一些问题。通过对川北医学院(以下简称"我院")该选修课的现状分析,从学生、教师及学校管理方面提出一系列探索性对策。

关键词： 肝细胞癌   肿瘤干细胞   CD133蛋白   表面标志物   PI3K-AKT  

摘要： 肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,我国肝癌死亡率高居世界之首。近数十年来,虽然在手术和放化疗等治疗方面取的了很大的进步,但其远期疗效仍不满意,主要原因是术后肿瘤的复发和转移。肝癌手术后5年复发率高达62％。因此,肝癌转移复发的研究现已成为目前肝癌防治工作中的重点。肝癌的转移是一个多环节,多阶段的过程。通过对肝癌患者原发灶和转移灶的对比研究发现,两者之间具有高度同源性,这提示我们,这部分引起转移的肿瘤细胞具有复制出和原发灶异质性相同的能力。<br>　　 许多研究证实了肿瘤组织中并不是每个肿瘤细胞都具有致瘤性,而是由一部分比例极低的细胞增殖形成的,这部分细胞被称为肿瘤干细胞,并且认为肿瘤干细胞是导致肿瘤发生以及治疗后复发的“根源”。肿瘤干细胞具有:自我更新、分化潜能、高致瘤性、耐药性等生物学特性。<br>　　 目前在对乳腺癌和胰腺癌的研究中发现,肿瘤干细胞(Cancer Stem Cells)是引起肿瘤转移的重要原因。肝癌中肿瘤干细胞的研究才刚刚起步,目前认为,肝癌干细胞的来源可能为肝干细胞或肝祖细胞,即卵圆细胞。最近,一些研究人员利用肿瘤干细胞表面标志物CD133,从肝癌组织及肝癌细胞系中分离出具有干细胞特性的亚群,为肝癌干细胞的存在找到了新的证据。这些肝癌组织中CD133+细胞,不仅在体外具有很强的增殖和克隆形成能力,还在免疫缺陷鼠的体内具有明显的成瘤优势;同时,CD133+细胞具有较高的干细胞相关基因如catenin、Oct-3/4、Bmi、SMO、Notch-1的表达;在体外适当条件下培养,CD133+细胞能分化为血管内皮样,骨骼肌样或心肌样细胞。<br>　　 人CD133蛋白为细胞膜蛋白超家族成员,为一个含有865个氨基酸、分子量约为120 ku的糖蛋白。其分子结构包括:细胞外NH2-端,2个大的胞外环状结构,5次跨膜结构域,2个小的富含半胱氨酸胞内环状结构和胞内的-COOH结构<br>　　 本研究主要通过对CD133基因的提取及过表达的方法,研究CD133+肿瘤细胞增殖、致瘤性、耐药性及凋亡。研究发现在体外,CD133+肿瘤细胞具有更强的增殖能力,致瘤性及耐药性。进一步研究发现,过表达CD133的肿瘤细胞,其细胞内部PI3K-AKT被过度激活,从而导致了其增殖能力增强,凋亡减弱。综上,我们认为,肝癌中CD133+细胞具有肿瘤干细胞的特性,是肝癌转移复发的重要原因。靶向CD133+肝癌细胞将成为肝癌分子靶向治疗的一个新途径。<br>　　 本文主要分为以下四个部分:<br>　　 第一部分,通过收集肝癌细胞系进行筛选发现,并不是所有肝癌细胞系都表达CD133表面分子,其表达率高低不一。我们通过流式细胞仪检测后,选定Huh7和HepG2两株细胞。Huh7细胞株中CD133的表达率稳定在70％左右,HepG2细胞株中CD133的表达稳定在1％以内。通过提取Huh7细胞中CD133基因序列,构建真核细胞表达载体,转染入HepG2细胞系中,建立稳定表达CD133的HepG2细胞系(HepG2-CD133),另一组HepG2转染空质粒载体,并建立稳定转染细胞系(HepG2-EV)。<br>　　 第二部分,通过对HepG2-CD133和HepG2-EV两株细胞的体外对比发现,CD133组的增殖,耐药能力增强。凋亡减弱。由此推断,CD133分子具有改变细胞增殖等生物学性状的能力,具有肿瘤干细胞的部分特性。<br>　　 第三部分,对HepG2-CD133及HepG2-EV两株细胞的体外成瘤比较。通过对免疫缺陷鼠随机分为两组,分别皮下接种同一数量的HepG2-CD133及HepG2-EV两株细胞,观察记录瘤体大小,3周后将瘤体取出,分别测量大小,重量,进行比较。实验发现,HepG2-CD133组致瘤性明显强于HepG-EV组,主要表现在瘤体的生长速度方面。<br>　　 第四部分,进行HepG2-CD133及HepG2-EV两株细胞分子信号通路的研究。分别提取两株细胞的蛋白,进行分子电泳及蛋白质印迹,观察分子信号通路的变化。HepG2-CD133与HepG2-EV对比发现,CD133组中的PI3K-AKT信号通路被过度激活。这可能是导致HepG-CD133细胞株增殖、致瘤增强,凋亡减弱的直接原因。<br>　　 综上所述,越来越多的肿瘤干细胞研究中将CD133作为一个标志分子,而CD133的功能现在却不清楚。本研究通过过表达的方法,将CD133作为单一的影响因素进行分析,揭示CD133的生物学功能,发现CD133表面分子能使肿瘤细胞具有部分肿瘤干细胞特性,靶向CD133分子可能会成为肿瘤的分子靶向治疗的新途径。

关键词： 血液   生物化学   细胞生物学   新发现   解剖学   基础医学   内皮   血管发育   胚胎干细胞   国际学术期刊   凝血酶受体   调节控制   调控  

摘要： 2012年4月17日,国际学术期刊《Developmental Cell》发表了中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所裴钢研究组和北京大学、上海生命科学院健康所和神经所等合作完成的研究论文"Thrombin

关键词： 神经母细胞瘤   Sox2   BE(2)-C细胞系   生物学特性   基因芯片  

摘要： 研究背景与目的 神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是小儿最常见的颅外恶性实体肿瘤,占小儿所有恶性肿瘤的10%,恶性程度高,多数患儿预后不良。尽管近年来手术结合化疗的综合疗法在治疗NB方面取得了很大的进步,但是其发病率和死亡率仍然较高。因此,深入研究NB的发生、发展机理至关重要。神经母细胞瘤是一种胚胎性肿瘤,胚胎期神经嵴细胞发育分化受阻是神经母细胞瘤发生的主要原因,亦是衡量神经母细胞瘤恶性程度及影响预后的主要危险因素。Sox2是一种胚胎干细胞转录调控基因,是调控胚胎发育的关键因子,在早期胚胎发育过程中对维持胚胎干细胞多潜能性和自我更新的能力具有关键性的调控作用。故我们试图探索Sox2基因在神经母细胞瘤中的表达及其对神经母细胞瘤干细胞生物学特性的影响,探讨其在神经母细胞瘤发生发展过程中所起的作用。材料与方法 ***2在神经母细胞瘤中的表达：采用RT-PCR、Real-time PCR、Western blot及免疫组织化学等方法检测Sox2在神经母细胞瘤组织和瘤旁组织中的表达情况,并结合临床资料,分析其表达与临床病理参数的关系。 ***2对神经母细胞瘤干细胞生物学特性的影响：采用RT-PCR检测Sox2在神经母细胞瘤BE(2)-C细胞中的表达情况。利用慢病毒载体感染BE(2)-C细胞构建Sox2高表达[BE(2)-C-Sox2]和低表达[BE(2)-C-shRNA]细胞,然后采用CCK-8活细胞数检测和流式细胞仪细胞周期分析,探讨Sox2对BE(2)-C细胞增殖能力的影响。维甲酸(RA)和5-溴2’-去氧尿甙(BrdU)干预细胞诱导分化后采用Western blot检测细胞标志蛋白的表达差异,分析Sox2对BE(2)-C细胞分化能力的影响。平板克隆和软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成数目和克隆形成率,分析Sox2对BE(2)-C细胞克隆形成能力的影响。裸鼠成瘤实验分析Sox2对BE(2)-C细胞体内成瘤能力的影响。 3.基因芯片检测Sox2下调时神经母细胞瘤干细胞基因表达谱变化：应用基因表达谱芯片检测BE(2)-C细胞和BE(2)-C-shRNA细胞基因表达谱情况,筛选差异基因,并采用Real-time PCR检测验证相关差异表达的基因。 结果 ***2在神经母细胞瘤中的表达：RT-PCR结果显示在神经母细胞瘤组织中可检测到Sox2基因mRNA水平表达。免疫组织化学染色结果显示Sox2主要在肿瘤细胞核中表达,而瘤旁组织中表达呈阴性。Real-time PCR及Western blot结果均显示神经母细胞瘤组织中Sox2的表达水平明显高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。经统计分析发现Sox2在高分期肿瘤中的表达水平高于低分期肿瘤(P<0.05),且未经化疗的肿瘤其Sox2的表达水平高于经化疗的肿瘤(P<0.05)。Sox2在神经母细胞瘤中的表达水平与性别、年龄、肿瘤部位、大小、病理分型等参数无相关性(均P>0.05)。 ***2对神经母细胞瘤干细胞生物学特性的影响：RT-PCR结果显示在神经母细胞瘤BE(2)-C细胞系中可检测到Sox2基因mRNA水平表达。利用慢病毒载体感染BE(2)-C细胞成功构建Sox2高表达[BE(2)-C-Sox2]和低表达[BE(2)-C-shRNA]稳定细胞。CCK-8活细胞数检测显示72h时BE(2)-C-Sox2细胞的AV值(1.465±0.046)高于BE(2)-C细胞(1.01±0.018),差异有统计学意义(P<0.05)；而BE(2)-C-shRNA细胞的AV值(0.912±0.020)低于BE(2)-C细胞(1.201±0.018),差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪细胞周期分析显示BE(2)-C-Sox2组S期细胞百分比(55.2±4.3%)高于BE(2)-C组细胞(38.6±3.5%),BE(2)-C-shRNA组S期细胞百分比(21.8±5.7%)低于BE(2)-C组细胞,三组组间比较差异有统计学意义(P<0.05),而三组细胞G0/G1期细胞百分比的比较情况呈现出相反的结果；BE(2)-C-Sox2、BE(2)-C及BE(2)-C-shRNA组的细胞增殖指数分别为65.2±5.6%、36.3±2.8%、51.7±4.6%,三组组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。RA或BrdU干预后Western blot检测细胞标志蛋白(Peripherin、NF-68、Vimentin、S-100)显示,经RA或BrdU干预的BE(2)-C-Sox2细胞其标志蛋白表达量低于经同种药物干预的BE(2)-C细胞和空载体细胞(P<0.05)；而经RA或BrdU干预的BE(2)-C-shRN

ISBN: (纸本)9787564505523

关键词： 创新型人才   细胞生物学   课程体系   教学模式  

摘要： 细胞生物学是生物技术重要的专业基础课程,面对建设创新性国家重大需求,细胞生物学课程内容及其教学模式的改革势在必行。形成以"细胞结构和功能-细胞生命活动原理-细胞的分子、遗传改造原理"理论课程体系,构建"细胞结构基础-细胞综合技术-创新研究"递进式、层次化的实验内容体系,是集基本(础)知识、基本技能、实践能力、科学创新思维培植为一体、适合以培养生物技术专业学生综合素质、实践能力和创新能力人才的细胞生物学课程建设所需。

关键词： 软骨细胞   肝细胞生长因子   转染   生物学特性  

摘要： 耳廓在人体上仅仅占据很少数的总体表面积,但耳廓却是人体外部最复杂的三维立体结构之一。目前国内文献对先天性外中耳畸形发病率报道为1/7000,男女之比约2：1,双侧者占10%,且右侧畸形较多。目前小耳、耳畸形的重建及创伤后耳的重建仍然是耳鼻喉科医生面临的最大挑战。多年来耳廓软骨的最佳取代物为左冠状动脉前区域的肋软骨,1971年Tanzer提出运用肋软骨作为耳廓支架并分四个阶段进行耳廓重建手术,随着术式越来越标准化,现被大多数国家用于耳廓重建手术[2-7]。然而自体软骨移植后易吸收,同时手术也有着许多不可避免的问题,如手术瘢痕、创伤疼痛及气胸等情况。金属和有机材料支架经历从最初的铁铜合金到乳胶和塑料等,以及后来使用的硅胶,均因为无法满足对身体无不良反应、可塑性及生物相容性原则而未得到广泛的应用。随着组织工程技术的不断发展,通过生物组织工程软骨再塑耳廓成为耳廓重建的目标。这其中由于自身软骨组织取材少难以达到所需细胞数量,且体外培养的软骨细胞由于软骨细胞自身的性质易发生“去分化”不能达到组织工程软骨的需要,从而限制了软骨组织工程耳廓重建的发展。本研究将肝细胞生长因子(HGF)利用腺病毒表达载体转染于体外培养的新西兰大白兔耳廓软骨细胞,观察携带HGF基因的耳廓软骨细胞的生物学特性,为后期利用此类细胞应用于构建耳廓软骨组织工程的研究打下基础。 第一章兔耳廓软骨细胞的分离及培养 本部分的研究目的主要是探讨兔耳廓软骨细胞分离培养的方法和生物学特性。主要通过机械法及酶消化法从2周龄新西兰大白兔的耳廓软骨中分离获得软骨细胞并进行原代和传代培养。在倒置显微镜下观察细胞形态及其生长情况,并绘制生长曲线,使用甲苯胺蓝异染染色、免疫组化染色等了解其生物学特性。结果显示：兔耳廓软骨细胞体外原代培养形成单层细胞的时间为1周左右,传代培养时间约3至5天。原代细胞以类圆形或多角形形态为主,随着传代的进行,细胞形态向纤维样细胞改变并失去其表型特征。甲苯胺蓝染色证实细胞可合成蛋白多糖,异染反应主要集中在细胞集落样生长区,异染程度以前三代培养明显,随后逐渐减弱。机械法和酶消化法相结合分离获得的细胞活性率达85%以上,Ⅱ型胶原免疫组化染色可见细胞中Ⅱ型胶原含量随着体外培养传代而减少,到5代以后Ⅱ型胶原含量几乎完全丧失。研究结论：采用机械法与酶消化法结合体外培养兔耳廓软骨细胞可获得活性较高的软骨细胞,随着体外传代培养,耳廓软骨的Ⅱ型胶原含量逐渐减少,细胞形态改变,软骨组织的生物学特性丧失。 第二章Ad-HGF对兔耳廓软骨细胞的转染表达及增殖效应 本部分的研究目的主要是通过观察腺病毒携带的肝细胞生长因子(Ad-HGF)对兔耳廓软骨细胞的转染表达及增殖效应。实验以不同感染强度(50,100,200)的腺病毒携带的荧光蛋白(Ad-GFP)转染体外培养的新西兰大白兔耳廓软骨细胞,感染后72h用流式细胞仪检测转染效率。并以最佳感染强度的Ad-HGF转染兔耳廓软骨细胞,ELISA方法检测转染48h,72h后细胞上清中HGF的表达水平。MTT法绘制生长曲线,使用Ⅱ型胶原的免疫组化染色了解转染肝细胞生长因子基因的耳廓软骨细胞的生物学特性。实验结果示：Ad-GFP感染强度(MOI)为100时,转染效率达50%。以MOI=100的Ad-HGF转染细胞48h,72h上清中HGF的表达分别为(513±20.77)pg/ml和(312.7±23.37) pg/ml。Ad-HGF转染的三代细胞生长曲线较耳廓软骨三代细胞的曲线前移、抬高。Ⅱ型胶原的免疫组化阳性细胞比值在三代细胞,Ad-HGF转染的三代细胞中分别为(0.652±0.0278),(0.682±0.039),p>0.05,无差异性;在兔耳廓软骨五代细胞,Ad-HGF转染的五代细胞中分别为(0.23±0.0469),(0.35±0.0367),p<0.05。实验结果示：Ad-HGF可有效转染兔耳廓软骨细胞且持续表达HGF, HGF对体外培养的兔耳廓软骨细胞有促增殖、维持其生物学特性的作用。