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关键词： 网络课程   医学细胞生物学   双语教学   天空教室  

摘要： 为达到构建特色医学细胞生物学双语网络课程的目的,作者将"天空教室软件平台"和"Deepthroat网站生成系统"两种工具相结合构建网络课程,制作了集丰富文字、插图、视频音频等为一体的医学细胞生物学双语网络课程,并由此认为:在天空教室网络教学平台上实施双语教学活动,是保证医学细胞生物学双语教学质量的有效手段,对于提高学生专业外语水平和信息获取能力具有重要意义。

关键词： 微RNAs   卵巢上皮性癌   原癌基因蛋白质类   细胞凋亡   抗药性   肿瘤  

摘要： 目的探讨微小RNA-16(microRNA-16, miR-16)调控人上皮性卵巢癌细胞skov-3增殖、侵袭及凋亡的作用及机制,以及在人卵巢癌顺铂耐药细胞skov-3/DDP中的表达及其与铂类药物敏感性的关系。 方法脂质体lipofectamine2000介导miR-16成熟体模拟物(mimics)及相应的阴性对照片段(negative control RNA, NC)分别转染人卵巢癌细胞株及顺铂耐药细胞株。实时荧光定量PCR检测细胞中miR-16的表达；蛋白印迹法检测细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、凋亡抑制基因(B-cell lymphoma2,Bcl-2)蛋白、原癌基因c-myc蛋白的表达；多种方法测定细胞的增殖侵袭能力；四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的顺铂半数抑制浓度；caspase-3活性检测试剂盒检测细胞内caspase-3酶的活性；流式细胞术检测血清饥饿及低氧条件下细胞的凋亡情况。 结果 (1)转染1niR-16mimics后skov-3细胞中miR-16水平明显高于转染NC后的细胞(P<0.01)； (2)转染niR-16mimics后skov-3细胞中VEGF、MMP-2及Bcl-2蛋白的相对表达量均明显低于转染NC后skov-3细胞(P<0.01)； (3)miR-16显著抑制skov-3细胞的增殖及侵袭能力(P<0.05)；(4)血清饥饿及低氧条件培养24h后,转染miR-16mimics后skov-3细胞的凋亡率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)；培养48h后,转染miR-16mimics后skov-3细胞的总凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P=0.001)。 (5)skov-3/DDP细胞中miR-16表达水平明显低于skov-3细胞,约为后者的1/10(P=0.000),转染miR-16mimics后skov-3/DDP细胞中miR-16水平升高约660倍(P=0.001)； (6)skov-3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量较skov-3细胞明显升高,转染miR-16mimics后skov-3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量明显降低(P<0.01)； (7)skov-3/DDP细胞转染miR-16mimics后,顺铂半数抑制浓度(14.19±0.06)较转染NC细胞(22.52+0.60)明显降低(P=0.002),且顺铂作用后caspase-3的酶活力单位也明显升高(P=0.000)； (8)顺铂(20ug/ml)作用24h或48h后,skov-3组凋亡率明显高于skov-3/DDP组,转染miR-16mimics的skov-3/DDP细胞凋亡率约为转染NC细胞的1.5倍(P<0.01)。 结论 (1)miR-16能够下调上皮性卵巢癌细胞VEGF、MMP-2及Bcl-2蛋白的表达,抑制细胞增殖侵袭能力,增强其对凋亡刺激的敏感性； (2)miR-16能够靶向下调上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞Bcl-2蛋白的表达,并协同调节c-myc蛋白的表达,增强卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,发挥逆转耐药的作用。

关键词： 骨髓增殖性肿瘤   骨髓间充质干细胞   造血干细胞移植   JAK2V617F突变   JAK2基因12号外显子突变   嵌合状态  

摘要： 间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）是造血微环境的重要组成部分，具有自我增殖能力以及多向分化潜能。目前有研究发现MSC与肿瘤微环境间存在着复杂的联系，证实MSC参与了多种血液系统疾病的发生、发展过程，但目前对骨髓增殖性肿瘤（MPN）的研究不多。此外，临床上已利用MSC支持造血和免疫调节的特性，促进造血干细胞移植（HSCT）后的造血重建以及防治移植物抗宿主病（GVHD），可是目前对于异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后骨髓MSC的来源尚无定论。 第一部分 目的：研究MPN患者骨髓MSC的生物学特性，检测其MSC是否存在JAK2基因突变。方法：1.体外分离培养健康志愿者和初诊MPN患者的MSC。2.细胞形态学观察，流式细胞术鉴定MSC表面标记。3.检测MSC成脂、成骨、成软骨分化能力。4.对患者MSC进行核型分析。***-PCR检测MSC造血以及免疫相关分子的表达。6.检测MPN患者MSC以及外周血或骨髓单个核细胞是否存在JAK2V617F突变、JAK2基因12号外显子（JAK2exon12）突变。结果：1. MPN患者的MSC细胞形态、表面标志、分化能力、染色体核型、造血及免疫相关分子表达与正常对照相比无明显差异。2.检测到21例真性红细胞增多症（PV）、17例原发性血小板增多症（ET）及1例原发性骨髓纤维化（PMF）的外周血/骨髓标本存在JAK2V617F突变，但未发现其MSC存在该突变。3.检测到2例PV和1例ET的外周血/骨髓标本存在JAK2exon12突变，但未发现其MSC存在该突变。结论：MPN患者MSC与健康供者MSC的生物学特性无明显差异；在外周血或骨髓单个核细胞JAK2基因突变阳性及阴性的MPN患者中，均未检测到MSC存在该突变。 第二部分 目的：研究allo-HSCT术后患者MSC嵌合状态。方法：1.体外分离21例allo-HSCT术后患者骨髓MSC。2.细胞形态学观察，流式细胞术检测细胞表面标志。3.诱导MSC成脂、成骨、成软骨方向分化。4。荧光标记的多重PCR扩增短串联重复序列（STR-PCR）结合毛细管电泳检测MSC供者嵌合状态。结果：移植术后患者MSC与健康志愿者相比，具有相似的细胞形态、免疫表型以及分化潜能。STR-PCR示allo-HSCT后患者骨髓/外周血供体细胞嵌合率为（96.85±1.5）%，但MSC供体细胞嵌合率为（5.24±2.5）%。一例双份脐血移植（DCBT）患者骨髓的优势脐血嵌合度为96.4%，外周血标本优势脐血嵌合度95.7%，患者骨髓MSC的优势脐血嵌合度为5.4%。结论：异基因造血干细胞移植术后，MSC大部分来源于患者本身。双份脐血移植术后患者造血重建仅来自于其中一份脐血，MSC大部分来源患者本身，部分嵌合的供者MSC来源于植入的单份脐血。

ISBN: (纸本)9787122132215

关键词： HMBOX1   肝癌   分化   CD133   抗肿瘤  

摘要： 目的 肝癌是指发病于肝脏的恶性肿瘤,包括原发性和继发性两种。中国是原发性肝癌的高发区,每年死于肝癌的患者人数占全世界总数的一半以上。肝癌的常规治疗手段主要包括手术、射频消融和放化疗等,生物治疗是近些年来新兴的治疗方法,为那些无法或不愿接受常规治疗的患者提供了一个新选择。 肝癌患者的愈后复发和转移是导致其难以被彻底治愈的根本原因,研究发现,患者体内残存的肿瘤干细胞可能在此过程中起到了关键作用。在肝癌组织中,CD133阳性的细胞拥有比其它细胞更强的肿瘤恶性表型,被认为是肝癌干细胞的表面标志,因此若能在治疗肿瘤干细胞方面取得突破性的进展,必将具有重要的理论价值和社会意义。 HMBOX1是2006年从人胰腺cDNA文库中分离出来的新基因,属于Homeobox家族,最近又发现了它的一个剪接变体HMBOX1b。研究发现,HMBOX1是一种潜在的核转录因子,发挥转录抑制活性。关于HMBOX1功能的研究很少,集中在其对NK细胞功能及骨髓基质细胞向血管内皮细胞分化的调控作用,但具体的分子机制仍不清楚。以往的研究证实,HMBOX1同基因簇基因HNF-1α具有抗肿瘤活性,但有关HMBOX1与肿瘤关系的研究仍未有报道。 本研究中,我们试图通过构建HMBOX1/HMBOX1b过表达载体,来研究HMBOX1与肝癌细胞系HepG2肿瘤生物学特征之间的关系,期望寻找到一种新的肝癌生物治疗方法。 方法 1.免疫组化检测临床标本HMBOX1表达水平； ***和Western Blot检测多种肿瘤细胞系HMBOX1的]nRNA水平和蛋白水平； 3.利用分子生物学方法构建HMBOX1/HMBOX1b与EGFP融合表达的真核表达载体； 4.免疫荧光技术研究HMBOX1/HMBOX1b的亚细胞定位特征； ***-8和流式细胞技术检测过表达HMBOX1的HepG2细胞的增殖能力以及细胞周期； ***检测过表达HMBOX1的HepG2细胞肿瘤干细胞相关基因以及促炎基因的表达； ***方法和流式细胞技术检测过表达HMBOX1的HepG2细胞对NK细胞杀伤敏感性及杀伤相关分子表达； 8.基因芯片技术分析HMBOX1可能参与调控的信号通路和细胞分子生物学功能。 结果 1. HMBOXl的表达水平与肝癌组织的分化程度存在正相关关系； 2. HMBOX1在多种肝癌细胞系中存在低表达现象； 3.成功构建了pEGFP-N1-HMBOX1、pEGFP-N1-HMBOX1b真核过表达载体； 4. HMBOX1的亚细胞定位存在不均一性,HMBOX1b与HMBOX1的亚细胞定位有所不同； 5.过表达HMBOX1对HepG2细胞的增殖能力和细胞周期无明显影响； 6.过表达HMBOX1能下调HepG2细胞的肿瘤干细胞相关基因和促炎基因表达； 7.过表达HMBOX1的HepG2细胞对NK细胞杀伤敏感性增强； 8. HMBOX1可能参与了多条肿瘤和免疫相关信号通路的调控,可能与组织器官和细胞的发育分化有关。 结论 HMBOX1作为一种发挥转录抑制活性的转录因子,具有调节NK细胞功能和促进骨髓基质细胞分化的作用,目前尚不清楚该基因与肿瘤之间是否存在一定的调控关系。本研究根据本课题组早期研究中观察到的肝癌组织中HMBOX1的低表达现象,进一步通过临床标本的检测发现,HMBOX1与肿瘤组织的分化程度呈正相关关系,并且HMBOX1在多种肝癌细胞系中的表达水平明显低于正常肝细胞。据此我们推测,HMBOX1可能与肝癌的发生发展存在一定的关 通过构建EGFP融合的HMBOX1/HMBOX1b表达载体,研究了HMBOX1和HMBOX1b的亚细胞定位,发现HMBOX1在细胞内的定位具有特殊性,其剪接变体HMBOX1b的细胞定位与HMBOX1有所不同。通过对HMBOX1过表达的肝癌细胞系HepG2研究发现,HMBOX1能下调HepG2细胞肿瘤干细胞相关基因和促炎基因的表达,而其剪接变体HMBOX1b则未表现出类似的活性。HMBOX1可能参与了肿瘤和免疫相关信号通路调控,并可能对组织器官和细胞的发育分化有一定的调控作用；同时HMBOX1能增强HepG2对NK的杀伤敏感性,发挥抗肿瘤效应。 本研究首次发现转录因子HMBOX1与肝癌之间的调控关系,初步探讨了其抗肝癌作用,但具体的调控机制有待进一步研究。为肝癌的治疗、诊断预后提供新的靶点。

关键词： 生物合成纳米技术   Au纳米颗粒   青霉   出芽短梗霉   镰刀菌   尖刀镰刀菌   尖叶拟船藓   生物合成生化机制   生物调控合成   生物学效应   细胞毒性  

摘要： 纳米材料具有独特的物理和化学性质,如大的比表面积、高的催化活性和生物相容性,已被广泛地用于催化、能源、生物和分析等领域。随着传统的物理和化学制备纳米材料方法的发展,近年来采用生物方法制备和组装纳米结构材料的研究引起了广泛的关注。生物合成的纳米材料因富集大量生物活性分子被赋予独特的物理化学特性、生物活性以及良好的分散性和稳定性,使其在生物化学等领域具有广泛的应用前景。目前,已有多种生物包括细菌、放线菌、真菌以及一些高等植物用于合成金、银、硫化镉、硫化锌以及磁性氧化铁等纳米材料。与此同时,实现纳米材料尺寸、形貌生物可控合成也成为纳米生物合成新技术前沿研究领域之一。在本研究小组已有的纳米生物技术研究工作基础上,本论文瞄准这一前沿研究方向,开展了纳米材料生物可控合成技术的研究。以4株真菌包括青霉(Penicillium sp.)、出芽短梗霉(Aureobasidium pullulan)、镰刀菌(Fusarium sp.)及尖孢镰刀霉(Fusarium oxysporum)和尖叶拟船藓植物(Dolichomitriopsis diversiformis)为生物材料,研究了不同真菌合成Au纳米颗粒的生化合成机制;发展了细胞内调控合成不同尺寸Au纳米颗粒新方法;探索了D. diversiformis植物细胞外调控合成不同形貌Au纳米材料的规律;并进一步考察了富集不同生物活性分子Au纳米颗粒的细胞生物学效应,以及对肿瘤细胞毒性作用机制。以期为生物调控合成纳米材料基础性研究和进一步应用提供有益的探索。本论文研究工作具体包括以下几方面： 1.不同真菌合成Au纳米颗粒生化合成机制研究 利用环境分离的***、Fusarium sp.及F. oxysporum3株真菌发展了真菌细胞内合成Au纳米材料的生物方法,并对其合成的生化合成机制进行了比较分析。将A. pullulans、Fusarium sp和F. oxysporum细胞与氯金酸共孵育,3株真菌均可细胞内合成Au纳米颗粒;生化成分分析及FTIR光谱表征发现,***细胞以还原糖为生物活性分子介导细胞内Au纳米颗粒合成,而Fusariumsp.及F. oxysporum以蛋白质为生物活性分子介导细胞内Au纳米颗粒组装;进一步SDS-PAGE蛋白质电泳分析表明,Fusarium sp细胞内分子量为100kDa,25kDa和19kDa的蛋白质参与Au纳米颗粒合成,而F. oxysporum细胞内分子量为25kDa和19kDa蛋白质参与Au纳米颗粒合成,A. pullulans合成的Au纳米颗粒不存在蛋白质。研究结果将揭示3株真菌细胞不同的生物活性分子介导了Au纳米材料的合成。通过采用LC-MS/MS法对蛋白质分子进行鉴定,结果表明Fusariumsp.参与合成的Au纳米颗粒的3个蛋白质分别为脂膜ATP酶(plasma membraneATPase)、3-葡聚糖结合蛋白(3-glucan binding protein)及3-磷酸甘油脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase),这些蛋白均为细胞能量代谢相关蛋白。细胞超薄切片表征发现,细胞内合成的Au纳米颗粒均存在真菌细胞液泡中。时间动力学TEM结果表明,还原糖易于合成球形、单分散性Au纳米颗粒,蛋白质易于介导Au纳米颗粒聚合体的组装。 2.基于温度调控真菌细胞内合成不同尺寸Au纳米颗粒研究 以温度为调控因子,利用环境分离的真菌Penicillium sp发展了一种细胞内调控合成尺寸可控的Au纳米颗粒新方法。将真菌Penicillium sp细胞与氯金酸共培育后,可在细胞内合成球形的、单分散性的Au纳米颗粒,粒径分布18-35nm。合成动力学TEM表征发现,细胞吸收反应溶液AuCl4-,在细胞内首先被还原形成Au核,再组装成Au纳米颗粒。生物组分分析结果表明,Penicillium sp细胞内还原糖为活性组分介导细胞内Au纳米颗粒的合成。通过控制合成反应温度,在4℃条件下,Penicillium sp细胞可细胞内合成4-10nm粒径的Au纳米颗粒。在28℃则合成20-37nm粒径颗粒,在不恒定的温度条件下,Penicillium sp细胞则合成多分散性的Au纳米颗粒。TEM结果表明,纯化的Au纳米颗粒也表现为球形、单分散性等相似的特征。FTIR光谱表征表明,纯化的Au纳米颗粒存在1405cm-1多糖羰基伸缩振动。研究结果揭示通过控制反应温度条件,可实现真菌细胞内对纳米颗粒的尺寸控制。 3.基于pH调控植物细胞外合成不同形貌Au纳米颗粒研究 利用尖叶拟船藓(D. diversiformis)植物体为生物材料,以pH为调控因子,发展了一种细胞外生物调控合成Au纳米颗粒的新方法。将氯

关键词： 国家自然科学基金   上海   医院临床   生物化学   基础医学   科学院   博士后   肿瘤病理学   临床检验诊断学   分子诊断   编辑委员会   编委会   乔治亚   分子细胞生物学  

摘要： 邹琳,《分子诊断与治疗杂志》第二届编辑委员会编委。2004年获得重庆医科大学临床检验诊断学博士学位,赴中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞研究所分子细胞生物学国家重点实验室进行博士后研究,后到美国乔治亚医学院进行肿瘤病理学博士后研究。研究员,硕士生导师。现任重庆医科大学儿童医院临床分子医学中心副主

关键词： 膀胱癌   microRNA   miR-490-5p   实时定量PCR   c-Fos   TET1   UVRAG   细胞增殖   细胞凋亡   细胞侵袭  

摘要： 膀胱癌是我国泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤,发病率和死亡率均位居泌尿系统肿瘤的首位,严重危害我国人民的生命和健康。临床上对于膀胱癌的治疗策略主要是采用手术切除为主,辅以灌注化疗和免疫治疗的综合治疗,但效果不理想。寻找膀胱癌的发病基因,了解膀胱癌的分子遗传学机制,为膀胱癌的诊疗提供理论基础是目前的研究热点。 MicroRNA (miRNA)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码单链小分子RNA,大小约22个核苷酸,通常在转录后水平调控基因表达。大量研究表明,miRNA参与肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭、转移及凋亡等各个环节。MiRNA具有高度的保守性、时序性和组织特异性等特点,预示它们可能是在一个新发现层次上的基因表达调控方式。miRNA的表达谱可作为肿瘤诊断和预后的指标,对其机制的深入探讨有望为膀胱癌诊疗提供新的思路和靶点。 miR-490-5p是新近发现的一种在肿瘤中异常表达的重要的microRNA。初步研究发现,其在包括膀胱癌在内的多种恶性肿瘤中表达显著下调,我们推测其在膀胱癌中发挥类似抑癌基因的功能。为了探索miR-490-5p与膀胱癌的关系,我们利用实时定量PCR技术检测其在膀胱癌、癌旁非肿瘤组织、膀胱癌细胞及正常膀胱细胞之间的表达,探讨其与患者临床分期及病理分级之间的关系。通过生物信息学预测、筛选miR-490-5p的靶基因,应用Western blot进行靶基因蛋白的验证。上调miR-490-5p的表达水平,研究其对膀胱癌细胞生物学行为的影响。进而探讨miR-490-5p在膀胱癌中可能的分子机制,以期为膀胱癌的早期诊断和治疗提供新的策略。 第一章miR-490-5p在膀胱癌组织和细胞中的表达及与临床分期、病理分级的关系研究 目的：研究miR-490-5p在膀胱癌组织和细胞中的表达及临床意义。 方法：采用实时定量PCR检测20例膀胱癌及其癌旁非肿瘤组织、3株膀胱癌细胞(T24、BIU-87和5637)和膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中miR-490-5p的表达水平,研究其与临床分期、病理分级之间的关系。 结果：与配对的癌旁非肿瘤组织相比,癌组织中miR-490-5p的表达在所有样本中均下调。癌组织中miR-490-5p的相对表达量为1.175士0.643,癌旁非肿瘤组织中为8.539±1.920,两者表达有统计学差异(P<0.05)。20例膀胱癌组织标本中,根据临床分期分组,Ⅱ期miR-490-5p的相对表达量为1.149±0.677,Ⅲ-Ⅳ期为1-214±0.632,两者表达无显著差异(P>0.05)。根据病理分级分组,高分化组中miR-490-5p的相对表达量为1.770±0.452,中-低分化组中为0.688±0.206,两者表达有统计学差异(P<0.05)。正常膀胱细胞系SV-HUC-1中miR-490-5p的表达显著高于三种膀胱癌细胞(T24.5637、 BIU87)(P<0.05),且随着膀胱癌细胞恶性程度的增加,miR-490-5p的表达渐次降低(5637>BIU87>T24)。 结论： 1、膀胱癌组织中miR-490-5p的表达水平显著低于癌旁非肿瘤组织,提示miR-490-5p的表达下调可能与膀胱癌的发病机制有关。 2、膀胱癌组织中miR-490-5p的表达水平与患者临床分期无关。 3、膀胱癌组织中miR-490-5p的表达水平与病理分级相关,随病理分级的增加而降低。 4、miR-490-5p在三种膀胱癌细胞系中表达都显著低于膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1,其表达水平与膀胱癌细胞恶性程度有关,随细胞恶性程度的增高而降低。miR-490-5p在T24细胞中表达最低,据此选择该细胞系进行后续细胞功能实验及机制研究。 第二章膀胱癌组织和细胞中miR-490-5p靶基因筛选以及验证 目的：通过生物信息学检索,预测miR-490-5p的靶基因,并对这些靶基因进行验证 方法：通过***和miRanda三个数据库进行检索,筛选miR-490-5p潜在的靶基因：c-Fos、TET1和UVRAG。从实验一结果中选择miR-490-5p表达最低的6例膀胱癌组织、癌旁非肿瘤组织及4株膀胱细胞,进行Western Blot检测,对这三个靶基因的蛋白表达水平进行验证。 结果：同膀胱癌旁非肿瘤组织相比,c-Fos蛋白的含量在膀胱癌组织中显著上调(P<0.05),UVRAG的含量显著下调(P<0.05),而TET1在两组间无显著差异(P>0.05);同正常膀胱细胞相比,c-Fos蛋白的含量在膀胱癌细胞中显著上调(P<0.05),UVRAG的含量显著下调(P<0.05),而TET1无显著差异(P>0.05)。 结论： 1、miR-490-5p在膀胱癌中发挥着类似“抑癌基因”的作用,

关键词： 细胞生物学   实验教学   教学改革  

摘要： 对《细胞生物学》实验教学存在的问题进行剖析,探讨教学改革的措施,提出精选实验内容,优化教学方法和教学手段,建立网络教学平台和完善考核体系,为深化教学改革,培养合格医药人才提供参考。

关键词： 舌鳞状细胞癌   醛脱氢酶   肿瘤干细胞   细胞鉴定  

摘要： 研究背景 肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）理论认为在肿瘤细胞中存在一类数量极少的（＜5%）、具有干细胞特性的细胞，具有高度的自我更新、无限增殖和多向分化的潜能。在肿瘤的发生、发展、侵袭、转移和放、化疗的敏感性中起决定性的作用。这一理论的提出改变了人们对肿瘤发生、侵袭和治疗认识，为研究肿瘤的发病机理、发展、复发和治疗提供了新的思路。寻找高效干细胞标志物，分选和鉴别肿瘤干细胞成为肿瘤的研究热点。醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenas，ALDH）家族是一类具有氧化细胞内各种醛类成为相应的弱羧酸的解毒酶。最近几年有研究指出醛脱氢酶（ALDH）可以用来富集干细胞样细胞。乙醛脱氢酶1（aldehyde dehydrogenas1,ALDH1,ALDH1A1）已经被用于乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、眼癌、造血系统恶性肿瘤、结直肠癌干细胞研究，并被认为是一种有效的肿瘤干细胞标志物。因此，通过ALDH分选舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中具有干细胞特性的细胞亚群是可能实现的。本实验拟通过检测舌鳞癌细胞株中ALDH的表达，以期分选出ALDHhig细胞亚群，并通过体外增殖、诱导分化、无血清培养和动物致瘤等实验对ALDHhig细胞进行鉴定，以期为寻找舌癌干细胞标志物提供实验依据。 第一部分舌鳞状细胞癌醛脱氢酶（ALDH）高表达亚群细胞的分选 目的： 通过检测醛脱氢酶（ALDH）在人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系中的表达，分选出ALDH高表达(ALDHhig)亚群细胞。 方法： 检测人舌鳞癌细胞Tca8113的ALDH的表达，运用流式细胞技术分选出ALDH高表达(ALDHhig)和ALDH低表达（ALDHlow）亚群肿瘤细胞。 结果： 人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系中含有高表达醛脱氢酶（ALDH）活性的细胞亚群，并且含量很低，只有1.3%。 第二部分舌鳞癌ALDHhig亚群细胞的体外增殖、分化和无血清培养 目的: 通过进行体外培养增殖、诱导分化和无血清培养成球实验，了解ALDHhig、ALDHlow和未分选的肿瘤细胞的增殖速度差异，ALDHhig细胞分化情况，和ALDHhig、ALDHlow在无血清培养基里细胞生长情况。 方法: 将相同数量的ALDHhig、ALDHlow和未分选的肿瘤细胞在传统的普通培养基（serum supplemented medium,SSM）里进行培养，定期用CCK-8法检测各组细胞增殖情况，绘制细胞生长曲线。将分选收集的ALDHhig肿瘤细胞制备成单细胞悬液，接种至含有RPMI1640完全培养基的培养瓶，置于5%CO2、37℃培养箱中培养，检测培养后第3、5、7、9天细胞中ALDH的表达水平。将分选的ALDHhig、ALDHlow细胞制成单细胞悬液，以2x104个/毫升的密度接种至培养瓶，加入无血清培养基（serum-free medium,SFM）,每天观察细胞球形成情况，每3天换液。 结果: 在体外增殖实验中，分选出的ALDHhig肿瘤细胞增殖能力要高于ALDHlow肿瘤细胞和未分选的肿瘤细胞，而且在体外培养的ALDHhig肿瘤细胞中ALDH+比例逐渐下降至分选前的比例，ALDHhig分化形成了ALDHhig和ALDHlow。ALDHhig肿瘤细胞能在SFM中悬浮生长形成肿瘤细胞球， ALDHlow肿瘤细胞大部分死亡，未形成肿瘤细胞球。 第三部分舌鳞癌ALDHhig亚群细胞动物致瘤试验 目的: 通过动物致瘤实验了解ALDHhig、未分选的肿瘤细胞致瘤能力的差别。 方法: 将ALDHhig和未分选的肿瘤细胞按不同数量级接种在裸鼠的背部皮肤下，观察各组成瘤情况。 结果: ALDHhig亚群肿瘤细胞比未分选肿瘤细胞致瘤性强。 结论 舌鳞癌Tca8113细胞系中存在一小群高表达醛脱氢酶的细胞，这群细胞具有增殖力强、多向分化、强致瘤力等肿瘤干细胞的生物学特性。ALDH可能是舌鳞癌干细胞的标志物之一。