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关键词： 卵巢肿瘤   肿瘤坏死因子受体相关肽类及蛋白类   锌指   基因表达   TIZ基因  

摘要： 目的:探讨TIZ基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响。方法:采用反转录(reverse transcription,RT)-PCR法从人卵巢癌组织总RNA中扩增TIZ基因的cDNA全长序列,与pcDNA3.1/myc-his(-)C质粒载体连接构建重组质粒;采用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1/myc-his(-)C-TIZ(+)转染入卵巢上皮癌细胞HO8910中;分别采用MTT法和集落形成实验测定细胞的增殖能力;FCM法检测细胞周期;细胞体外侵袭重建基膜实验、Transwell小室实验和体外黏附实验分别测定细胞的体外侵袭、转移及黏附能力。结果:从卵巢癌组织中扩增获得了TIZ基因全长序列,并成功构建pcDNA3.1/myc-his(-)C-TIZ(+)重组质粒,测序证实插入片段序列正确。细胞生长曲线、细胞周期和细胞集落测定实验显示,pcDNA3.1/myc-his(-)C-TIZ(+)-HO8910细胞与对照组细胞相比较,其细胞增殖受到明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞体外侵袭、转移及黏附能力测定实验结果显示,HO8910细胞在TIZ基因过表达前后其侵袭、迁移和黏附能力无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TIZ基因过表达对卵巢上皮癌细胞生长、增殖有一定的抑制作用,可能发挥抑癌基因的生物学作用。

关键词： 干细胞技术   细胞生物学   春季会议   杭州   学分   学会   中国   论坛  

摘要： 为进一步推动我国的干细胞技术与临床应用的发展,加强我国干细胞研究同行间的了解、交流与合作,第四届杭州干细胞论坛暨中国细胞生物学学会干细胞生物学分会2012年春季会议将于2012年4月11日～13日在美丽的西湖之畔——杭州隆重召开。将有来自全国的干细胞基础和临床研究的专家报告交流最新的干细胞领域的进展。

关键词： 细胞生物学   实验教学   建议  

摘要： 细胞生物学是现代生命科学的基础学科之一,也是现代医学的重要基础.在细胞生物学教学中,实验课是必不可少的,目的除了验证理论课的部分内容外,主要是让学生学习细胞生物学实验的一些基本技术和实验研究方法,掌握这些基本技术和方法对于今后从事基础医学或临床医学工作都是十分必要的.通过细胞生物学实验课的学习,不仅能培养学生对细胞生物学理论知识的联想和理解,使学生获得更强的感性认识.更能训练学生的基础操作技能,培养学生的实验能力,从而提高学科综合素质,为今后的科研和工作做好铺垫.

关键词： 成骨细胞   牙周膜成纤维细胞   增殖   碱性磷酸酶活性  

摘要： 目的观察成骨细胞（osteoblast cells,OBs）对人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs）生物学特性的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法建立人OBs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察成骨细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果 3 d和5 d时,共培养组HPLFs细胞计数分别为3.5×10~4个/ml及7.5×10~4个/ml,均明显低于对照组HPLFs细胞计数,且差异有统计学意义（P〈0.05）。HPLFs碱性磷酸酶（ALP）活性比较中,transwell共培养组HPLFs ALP活性高于对照组。在3 d时,差异有统计学意义（P〈0.05）,5 d及7 d时差异也有统计学意义（P〈0.01）。结论人OBs可能抑制HPLFs的增殖,促进HPLFs ALP活性。

关键词： 短学期制   细胞生物学实验   教学改革  

摘要： "短学期制"是上海大学教学管理模式的三大特色之一。为了更好地发挥"短学期制"优势,培养高素质人才,我们在细胞生物学实验的教学中进行了一系列改革与探索。通过重新调整实验的教学内容、重新编写实验教材、改进实验教学方法以及注重实验报告的撰写与加强实验结果分析等几个方面的改革与探索,充分利用了中心实验室的优势资源,培养了学生的创新意识,激发了学生的科研热情,从而为高素质人才的培养奠定了坚实的基础,也受到了同学们的好评。

关键词： 肝癌   RKIP基因   细胞周期   转染  

摘要： 目的:Raf激酶抑制蛋白(RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族的重要成员,近来的一些研究表明RKIP基因的蛋白产物在人类肝癌组织中表达显著下调。本研究旨在探讨RKIP基因对于肝癌细胞增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等恶性表型的影响,以初步阐明其功能意义。方法:将RKIP基因插入载体pcDNA3.1构建PC-RKIP真核表达载体。脂质体转染肝癌细胞系HepG2建立稳定转染细胞系(Hep-RKIP),而后使用生长曲线法、平板克隆形成实验法、流式细胞仪,细胞迁徙实验法等方法分析稳定表达株相关生物学特性变化。同时设立空载体转染组和空白细胞组为对照。结果:与转染pcDNA3.1空载体及空白HepG2肝癌细胞相比,转染PC-RKIP载体的稳定表达细胞株生长有显著减慢,后两组之间亦无显著差异,平板克隆形成实验结果显示PC-RKIP转染组平均克隆形成率显著低于其它两组(P<0.05),细胞周期检测显示PC-RKIP转染组处于G0/G1期的细胞比例显著高于未处理的HepG2细胞和转染pcDNA3.1空载体的HepG2细胞(P<0.05),而处于G2-M期的细胞比例显著均低于其它两组(P<0.05),其它各期细胞比例均无显著差异。流式细胞仪法检测细胞凋亡结果显示PC-RKIP转染组调亡比例为6.4%左右,显著高于对照组(P<0.05)。细胞迁徙实验结果提示PC-RKIP转染组穿膜率与其它两组相比显著降低(P<0.05)。结论:RKIP基因可能具有抑制细胞生长增殖及分裂作用,同时可影响细胞周期及细胞凋亡,对肝癌细胞侵袭转移能力可能有一定抑制作用,对抑制细胞恶性表型有一定意义。

关键词： 乳腺癌   微环境   成纤维细胞   细胞周期  

摘要： 目的比较乳腺导管不典型增生成纤维细胞(atypical intraductal hyperplasia fibroblasts,AFs)与正常乳腺成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)在生物学特征上的差异。方法采用Ⅰ型胶原酶法分离并培养AFs、NFs和CAFs,免疫细胞荧光化学检测其粘连蛋白(fibronectin,FN)表达以鉴定细胞纯度。比较3种细胞的细胞生长曲线、细胞周期和周期蛋白cyclin D1、p21waf1及p53的变化。结果获得并鉴定了NFs、AFs、CAFs;其生长速度依次增加(P<0.05),细胞周期S期百分比(8.24±2.47)、(16.94±4.77)、(33.31±7.90)依次增大(P<0.05);与NFs相比,AFs周期蛋白cyclin D1表达增加(P<0.05),p21waf1和p53蛋白表达降低(P<0.05);与CAFs相比,AFs的周期蛋白cyclin D1没有升高(P<0.05),p21waf1蛋白和p53蛋白表达更强(P<0.05)。结论 AFs相对于NFs和CAFs,细胞生长增殖具有特异性,这种变化提示乳腺肿瘤的癌前病变阶段AFs可能是NFs逐步向CAFs转变的过渡阶段。

关键词： 分子细胞生物学   IFCC   生化  

摘要： 详情请登录中国生物化学与分子生物学会网站http://***/或者是登录培训班网站:http://***/ifcc2012/查询。

关键词： 生物材料   纳米薄膜   胶质瘤细胞   细胞生物学  

摘要： 大量的研究证实，许多种族的细胞对周围微环境或植入材料在纳米尺度上形貌的变化具有很强的“感知力”，这种识别能力对细胞的迁移、增殖和生长具有极其重要的作用。我们可以利用细胞的这种“感知力”对至今仍令医学界束手无策的脑胶质瘤细胞进行体外培养和体外研究，来进一步认识脑胶质瘤细胞的生物学行径，进而发现不同细胞种群间对纳米效应感知力的差异性，为将来在临床上治疗胶质母细胞瘤提供一定的理论依据。纳米材料的出现为细胞体外培养支架的研究提供了新的选择。新型TiO2纳米管阵列薄膜具有均匀的孔径，良好的生物相容性和光致双亲效应，被认为是理想的生物医用材料。采用电化学阳极氧化法制备TiO2纳米管阵列薄膜，操作简便、成本低，且能通过调节工艺参数获得不同尺度的薄膜。同时通过阳极氧化法制得的薄膜，其纳米管状结构的孔密度较高（＞1010个/cm2）。本研究中采用两步阳极氧化技术在纯钛表面获得具有管状结构的TiO2纳米管阵列薄膜，再利用一系列生物学技术处理该薄膜，我们以大鼠胶质瘤细胞系C6细胞为研究对象，探究了细胞在薄膜表面培养时对纳米微环境变化的感知力。\n 本研究分为三个部分。首先，采用两步电化学阳极氧化法制备TiO2纳米管阵列薄膜，在氧化过程中通过改变氧化电压和氧化时间，制备出具有不同微观形貌的TiO2纳米管阵列薄膜。并通过在空气氛围中煅烧得到具有混晶结构的TiO2纳米管阵列薄膜。其次，在纳米管阵列薄膜表面培养大鼠胶质瘤细胞系C6细胞，采用免疫荧光染色法对接种于不同管径TiO2纳米管阵列薄膜上的C6细胞进行观察;并通过MTT比色法进行不同管径TiO2纳米管阵列对C6细胞增殖情况影响的检测;再利用流式细胞仪对培养在不同管径TiO2纳米管阵列上C6细胞的凋亡情况进行检测。最后，从TiO2纳米管阵列表面培养的C6细胞中提取RNA，根据文献和专用设计软件设计并进行相应的mRNA引物合成;取细胞RNA进行逆转录和聚合酶链式反应;随后对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，并将电泳结果放在紫外线透射反射分析仪上观察，然后通过凝胶成像系统测算电泳条带的光密度值。\n 本研究表明：纳米管的管径尺寸随着电压的增加而变大;延长氧化时间可以增加纳米管的长度，但这样会降低F-的扩散速率，从而使氧化速率降低，因此在薄膜中会出现沟壑形貌;TiO2纳米管阵列薄膜样品经高温退火处理后，变为锐钛矿和金红石的混晶结构;通过细胞免疫化学分析及MTT实验证明，C6细胞在TiO2纳米管阵列表面的生物学行为具有明显的尺寸依赖性，TiO2纳米管阵列在管径范围介于10-30nm之间时有利于C6细胞的生长;细胞在15nm-TNT的薄膜表面具有最佳活性，当管径超过50nm时，TiO2纳米管阵列能够明显地诱导细胞凋亡;C6胶质瘤细胞在不同样品表面培养24小时后多种炎性介质基因表达水平有差异，且不同炎性介质基因表达水平趋势不同;总之，15nm的管径间距适合作为整合蛋白回馈细胞核的信号通路，并能够最大程度地刺激整合蛋白的活性，从而影响细胞行为，而大于50nm的管径间距会明显地限制细胞的附着和迁移，最终导致细胞凋亡。

关键词： Rab蛋白   脂滴合成   分子机制   细胞生物学功能  

摘要： Rab40c是一种新型Rab蛋白。目前哺乳动物小分子GTPaseRab40c的性质和功能还未被详细研究。本文拟探讨Rab40c在细胞中的定位及其细胞生物学功能。在本文中，我们首先明确了Rab40c的亚细胞定位。细胞免疫荧光实验结果显示过表达的Rab40c主要分布在脂滴表面，而不是高尔基体，内体或溶酶体。而且，过表达的Rab40c在细胞饥饿状态下与内质网-高尔基体中间室标志物ERGIC53也有共定位现象。有趣的是，Rab40c的分布是一个动态的过程。随着脂滴生成和成熟，Rab40c逐渐招募到脂滴上。接着，我们进一步探索了Rab40c对脂滴的影响。研究结果发现过表达Rab40c可诱导脂滴聚集增大且细胞内甘油三酯含量升高;敲除细胞中的Rab40c可温和的引起脂滴变小;随着前脂肪细胞3T3-L1诱导分化成脂肪细胞，Rab40c的蛋白表达量呈增加趋势。由此看出，Rab40c参与脂滴的生成。最后，我们分析了Rab40c调节脂滴的分子机制。研究结果显示Rab40c诱导脂滴聚集增大不依赖于GTPase活性，而是依赖于Rab40c特有的结构域SOCSbox。GST-pulldown实验结果发现，Rab40c通过SOCSbox不仅可与脂滴相关蛋白Tip47相互作用，而且其自身可形成同源二聚体调节脂滴的合成。\n 我们的研究结果揭示了Rab40c是一种与脂滴有关的新型Rab蛋白，它在调节脂滴合成的过程中起到了重要的作用。我们的工作为更深入的研究其生物学功能和分子机制奠定了基础，也为脂滴代谢障碍相关疾病防治的研究提供了理论依据。