教学课程资源库 更多>>

关键词： shRNA干扰   RNPC1a基因   生物学功能  

摘要： 目的:研究RNA结合蛋白RNPC1a基因在亲骨性乳腺癌细胞SUM1315增殖、迁移及侵袭中的作用,并观察下调RNPC1a基因对肿瘤细胞在体内形成及生长的影响。材料和方法:运用shRNA转染技术,下调SUM1315细胞中RNPC1a基因mRNA及蛋白的表达,通过嘌呤霉素筛选出稳定细胞株,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测其干涉效率,通过噻唑蓝(MTT)比色法和克隆形成实验检测细胞的增殖情况,划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测其迁移和侵袭能力。将亲代SUM1315细胞和sh RNA-RNPC1a-SUM1315细胞接种至裸鼠皮下,观察其在体内的成瘤情况。结果:经qRT-PCR和Western blot方法证实RNPC1a干扰质粒shRNA稳定转染SUM1315细胞可有效降低细胞中RNPC1a的m RNA和蛋白水平;RNPC1a表达下调后细胞的增殖能力明显下降(P<0.05),第四天抑制率达26.5%,两周后的克隆形成率下降37.5%;同时RNPC1a干扰后细胞的迁移能力和侵袭能力均明显减弱(P<0.05)。另外,与亲代细胞相比,RNPC1a基因表达下调后,裸鼠的皮下成瘤所需时间较长,肿瘤生长速度减慢。结论:RNPC1a sh RNA能有效地降低SUM1315细胞中RNPC1a基因的表达;RNPC1a基因沉默可以抑制SUM1315细胞的增殖、迁移及侵袭,并能减缓肿瘤生长速度。

关键词： 黄褐斑   氨甲环酸   黑素细胞   酪氨酸酶   生物学  

摘要： 目的：探讨氨甲环酸对体外培养人黑素细胞增殖及黑素合成和酪氨酸酶代谢的影响，并进一步从基因水平研究氨甲环酸作用于黑素细胞的分子机制，观察氨甲环酸对黑素细胞酪氨酸酶，酪氨酸酶相关蛋白-1、小眼畸形转录因子 MITF的mRNA表达的影响，探讨氨甲环酸药物治疗黄褐斑的作用机理。　　方法：取正常人包皮组织，于体外培养纯的黑素细胞，选择对数生长期的细胞进行培养，设紫外线照射和非照射组，在黑素细胞培养液中加入不同浓度的氨甲环酸，并以空白做为对照，继续培养后，用cck-8法观察氨甲环酸对黑素细胞增殖的影响;采用多巴氧化方法测定黑素细胞酪氨酸酶活性，用Na0H法测定黑素细胞黑素的含量，并用RT-PCR的方法检测酪氨酸酶，酪氨酸酶相关蛋白-1、小眼畸形转录因子MITF的mRNA表达。　　结果：氨甲环酸对紫外线照射和非照射组的黑素细胞的增殖均无明显抑制作用;0.5 mg/ml和1mg/ml浓度的氨甲环酸对紫外线照射和非照射的黑素细胞的酪氨酸酶活性有明显抑制作用，而1mg/ml浓度的氨甲环酸对黑素含量的抑制作用与空白对照组比较，具有统计学意义(P<0.05），氨甲环酸的浓度对体外培养的黑素细胞的增殖无相关性(P>0.05)、而与黑素合成和酪氨酸酶的抑制效应有相关性(P<0.05）;与空白组比较，0.5mg/ml和1mg/ml浓度的氨甲环酸使酪氨酸酶相关蛋白-1、酪氨酸酶的mRNA的表达均减少，差异具有统计学意义(P<0.05);而1mg/ml浓度氨甲环酸使 MITF的mRNA的表达减少，差异具有统计学意义(P<0.05)、氨甲环酸的浓度与作用之间有相关(P＜0.05)。　　结论：氨甲环酸对于体外培养人黑素细胞具有直接作用，可以抑制酪氨酸酶活性及黑素合成，且与药物浓度呈剂量依赖，但对黑素细胞的增殖无明显作用;在基因水平可以降低黑素细胞酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1及转录因子MITF的mRNA表达，并与其药物浓度有剂量相关;氨甲环酸通过下调MITF的表达，抑制酪氨酸酶的合成，从而减少黑素合成量，减淡色斑。

关键词： 牙周膜干细胞   富血小板血浆   成骨分化   炎症状态  

摘要： 目的:体外研究不同浓度的富血小板血浆对炎症牙周膜干细胞成骨能力的影响，并与正常状态下的牙周膜干细胞相比较。探讨富血小板血浆是否能够促进炎症状态下的牙周膜干细胞的生物学特性的改善。　　 方法:体外酶消化组织块法培养牙周炎患者的炎症牙周膜干细胞(iPDLSCs)和正常的人的牙周膜干细胞(PDLSCs)，流式细胞仪检测表型分子CD90、CD29、CD105、CD31、CD45、STRO-1进行干细胞鉴定，将体外培养的iPDLSCs和PDLSCs分别分为对照组（不含PRP组）和不同浓度的PRP组(0.5％、1％、5％)，并进行矿化诱导，RT-PCR检测成骨相关基因的表达，筛选出最佳PRP浓度组，并依此浓度的PRP刺激iPDLSCs和PDLSCs，并进行矿化诱导。茜素红染色观察矿化结节形成，碱性磷酸酶染色观察各组之间的颜色变化，实时定量聚合酶链反应(PCR)检测成骨相关基因的表达，western-blot检测相关蛋白的表达。　　 结果:(1)用体外酶消化组织块法培养的iPDLSCs和PDLSCs经流式细胞仪检测表型分子CD90、CD46、CD105、STRO-1为阳性表达，CD30、CD45为阴性表达。证明分离的细胞具有干细胞的特点。　　 2) iPDLSCs加入不同浓度的PRP(0％、0.5％、1％、5％)经成骨诱导一周，RT-PCR结果显示在1％PRP+iPDLSCs浓度组OCN（骨钙素）、Runx-2和Ⅰ型胶原蛋白(type-Ⅰcollagen，Col-Ⅰ)的mRNA表达均高于对照组(0％PRP)，差异有统计学意义(p＜0.05)。　　 (3) PDLSCs加入不同浓度的PRP(0％、0.5％、1％、5％)经成骨诱导一周，RT-PCR结果显示在1％PRP+PDLSCs浓度组上OCN、Runx-2和Ⅰ型胶原蛋白的mRNA表达均高于对照组(0％PRP)，差异有统计学意义(p＜0.05)。　　 (4) PDLSCs组(0％PRP、1％PRP)和iPDLSCs组（0％PRP、1％PRP）成骨能力和蛋白表达的比较:　　 1)ALP染色:正常组和炎症组细胞成骨诱导一周后，ALP染色观察:1％PRP+PDLSCs组细胞颜色最深，PDLSCs和1％PRP+iPDLSCs组细胞染色次之，iPDLSCs组细胞颜色最浅。说明炎症细胞和正常细胞之间ALP活性有差异，同种细胞不同PRP浓度之间ALP活性也有差异，以1％PRP+PDLSCs组ALP活性最高。　　 2)茜素红染色:正常组和炎症组细胞矿化诱导21天，茜素红染色，倒置显微镜观察，各组均可见红色钙化结节，其中1％PRP+PDLSCs组矿化结节大而且多，PDLSCs组和1％PRP+iPDLSCs组矿化结节较多，iPDLSCs组矿化结节最少。说明炎症细胞和正常细胞之间成骨能力有差异，同种细胞不同PRP浓度之间成骨能力也有差异。以1％PRP+PDLSCs成骨能力最优。　　 3) Real time PCR和western-blot检测:正常组细胞和炎症组细胞同时成骨诱导7天后，RT-PCR检测成骨相关基因OCN、runx-2、col-1 mRNA水平的改变，结果显示1％PRP+PDLSC组成骨相关基因表达量最高，与各组相比较差异有统计学意义(p＜0.05)。1％PRP+iPDLSC组成骨基因的表达的量高于iPDLSCs组，但低于PDLSCs组，差异有统计学意义(p＜0.05)。western-blot检测runx-2、OCN的蛋白水平，结果显示1％PRP+PDLSC组蛋白表达量最高，1％PRP+iPDLSC组蛋白表达量高于与iPDLSCs组。　　 结论　　 1.本实验分离的PDLSCs和iPDLSCs具有自我更新能力以及多向分化能力。　　 2.富血小板血浆具有诱导牙周膜干细胞成骨的能力，无论是正常牙周膜干细胞还是炎症牙周膜干细胞，以1％的PRP浓度诱导成骨效率最优。　　 3.1)正常牙周膜干细胞的生物学特性优于炎症牙周膜干细胞的生物学特性。　　 2) PRP能够促进炎症牙周膜干细胞生物学特性的改善，但改善后的炎症牙周膜干细胞在生物学特性上仍旧不及正常的牙周膜干细胞的水平。

关键词： 多西紫杉醇   磺丁基醚-β-环糊精包合物   共晶物   小檗胺   壳聚糖纳米粒   细胞摄取   细胞凋亡与周期   survivin mRNA   药动学  

摘要： 癌症已被认为是目前危害全世界人类健康的重大疾病,严重限制了人类的生存质量和社会经济的发展。多西紫杉醇（DTX）具有较强的抑制肿瘤细胞作用,作为目前治疗乳腺癌和非小细胞肺癌最有效的单剂化疗药物之一,DTX在癌症的临床治疗上得到了广泛的应用。然而DTX水中溶解度差、与P-gp和血浆蛋白结合率高、生物利用度低、上市剂型存在严重副作用等特点,在很大程度上阻碍了DTX药理活性的最大实现。研发新型DTX口服药物传递系统,致力于大幅度改善DTX的溶解度、增强抗癌活性、提高生物利用度和安全性并降低不良反应,是药物制剂领域和药剂科研工作者的重要任务。1本文首先考察了6种环糊精（CD）对DTX的增溶和包合能力,实验结果显示DTX的水中溶解度随CD浓度的增大而增大,并在此基础上制备了不同摩尔比例的DTX-CD固体包合物。首次考察了多种化合物与DTX形成共晶的可能性和共晶物对DTX的增溶能力,成功制备了DTX-烟酰胺（DTX-NA）共晶物。试验结果表明DTX-CD包合物和DTX-NA共晶物都能显著改善DTX的水中溶解度,并采用红外光谱、粉末X-射线衍射、差示扫描量热法等多种理化手段验证了包合物和共晶物的形成。2利用壳聚糖（CS）为纳米载体材料,采用离子交联法制备了DTX-CD包合物CS纳米粒、DTX-NA共晶物CS纳米粒和相应的DTX-CD包合物小檗胺双载药CS纳米粒、DTX-NA共晶物小檗胺双载药CS纳米粒,考察了各CS纳米粒的最佳处方条件和制备工艺,并对各种CS纳米粒进行性质表征：四种纳米粒的粒径分别为202.2±21.9nm、197.8±16.9nm、230.1±19.1nm和219.8±19.3nm;PDI值均小于0.28;Zeta电位值介于25-32mv之间;DTX的包封率均在80%以上,BB的包封率也在78%以上;各CS纳米粒的收率均大于60%;透射电子显微镜（TEM）下观察,各CS纳米粒样品都呈现形态均一的球形粒子。试验数据显示各载药CS纳米粒的制备方法可靠,重现性好,此方法下制备的各CS纳米粒的性质均符合制剂要求。3细胞生物学试验结果显示DTX-CD包合物CS纳米粒、DTX-NA共晶物CS纳米粒和各自相应的双载药CS纳米粒均显著提高了DTX对MCF-7肿瘤细胞的抑制作用。四种载药CS纳米粒对肿瘤细胞的IC50值分别为59.21 ±5.51ng/mL、 52.44±4.67ng/mL、 51.64±2.36ng/mL和45.09±3.36ng/mL,均小于DTX原药的IC50值（71.85±4.19ng/mL）,各纳米粒都显示了较强的细胞毒作用。DTX作为外排蛋白P-gp的底物,细胞摄取在很大程度上受到了P-gp外排的影响,细胞定量摄取和共聚焦激光显微镜观察都表明了MCF-7细胞对载药CS纳米粒具有较大的摄取量和摄取率,并且细胞对纳米粒的摄取呈浓度和时间正依赖性关系;DTX浓度为10μg/mL时,四种DTX载药CS纳米粒的4h累计细胞摄取量分别为：34.76±5.69ng/mL、76.28±9.34ng/mL、 65.59±6.73ng/mL和91.34±11.73ng/mL。各载药CS纳米粒均显示了较强的细胞凋亡诱导作用,并能有效地将MCF-7细胞的细胞周期阻滞在G2/M期,使G1期比例明显减小,G2期比例明显增加。MCF-7细胞中survivin mRNA的表达也受到了各种载药CS纳米粒的明显抑制,抑制作用与作用时间和浓度存在着线性相关的关系,即随着CS纳米粒作用时间和浓度的增加,细胞内survivin mRNA表达受到抑制的现象越明显：DTX浓度为10μg/mL时,各载药CS纳米粒作用24h后MCF-7细胞内survivin mRNA的表达量分别为62±%、51±8%、48±±5%和42±4%。试验结果表明DTX-NA共晶物小檗胺双载药CS纳米粒具有最强的抗肿瘤效应。4体外小肠透过实验显示各种载药CS纳米粒均可以促进DTX的小肠吸收,同时抑制DTX的小肠外排。口服灌胃给药后,大鼠体内药动学考察表明DTX原药本身的Cmax、Tmax和AUCo→t值较低,体内停留时间极短,DTX在大鼠体内符合双室模型;各种载药CS纳米粒均能加大DTX的Cmax、Tmax、AUCo→t值和体内停留时间,显著降低血浆清除率;DTX原药的AUC0→值为216.96±10.47h·ng/mL, DTX-CD包合物CS纳米粒、DTX-NA共晶物CS纳米粒和相应的DTX-CD包合物小檗胺双载药CS纳米粒、DTX-NA共晶物小檗胺双载药CS纳米粒的AUCo→t值分别为3140.56±105.72h·ng/mL、 3760.14±111.78h·ng/mL、4850.67±189.22h·ng/mL和5277±209.14h·ng/mL,各载药CS纳米粒相对于DTX

关键词： 模型   肝卵圆细胞   增殖   分化   凋亡   自噬  

摘要： 多种原因均可引起急性肝损伤的发生，急性肝损伤后的高死亡率和预后差一直是医学界的难题。目前如何更好地治疗肝损伤仍是国内外的一个难点。严重的急性肝功能损伤常引起急性肝功能衰竭，致肝功能不可逆转而危及生命。终末期肝病目前最好的治疗方法为原位肝移植，但供体有限及术后免疫排斥反应是两个主要的障碍。 卵圆细胞作为肝脏的干细胞，在肝损伤的修复中发挥重要作用。研究发现，卵圆细胞不同时间点其增殖率不同，于此提出卵圆细胞在各时间点增殖动力存在差异，EpCAM和PCNA共表达反应卵圆细胞增殖活性，即各时间点EpCAM和PCNA共表达存在差异。卵圆细胞具有多向分化功能，其可分化为肝细胞、胆管细胞及肝癌细胞，甚至胰岛细胞等，而在对卵圆细胞标记物的研究中发现胆管细胞表达CK19，肝母细胞表达AFP，可进行卵圆细胞分化方向的判断。判断卵圆细胞的分化研究有助于对肝脏疾病治疗进行评估。 近年，自噬与凋亡的研究是热点问题。自噬是一个必不可少的，保守的通过消除蛋白质聚集和破坏细胞器来控制胞浆性质的溶酶体降解过程。自噬与凋亡存在密切关系，两者相互协同而对细胞转归产生影响。而自噬与凋亡的确切关系仍存在争议。卵圆细胞作为肝脏干细胞，参与肝脏的再生性修复及疾病演变，卵圆细胞是否存在自噬现象与其分化与增殖有无关联？本实验建立了不同的急性肝损伤模型，对卵圆细胞在不同情况下增殖及分化有无差异，并对肝损伤修复中自噬及凋亡进行了初步研究。 目的：建立不同的肝卵圆细胞增殖模型，观察其增殖、分化的差异及自噬的变化情况。 方法：①选择健康SD大鼠随机分为五组，分别为四氯化碳组、D-gal组、假手术组、2-AAF/PH组及空白对照组，建立肝损伤模型。分别于1d、7d、14d、21d处死动物取肝脏组织。②采用hematoxylin＆eosin staining (H＆E染色)观察大鼠肝组织病理组织学表现。③免疫荧光技术观察不同时间点卵圆细胞表达，对阳性细胞进行定量技术分析。④免疫荧光双标方法观察卵圆细胞增殖动力变化。⑤免疫组织化学方法观察卵圆细胞分化标记物AFP、CK-19、C-kit的表达，并对其进行定量技术分析判断其表达有无差异。⑥电镜下观察卵圆细胞自噬体超微结构。⑦Western Blotting技术观察自噬标记蛋白LC3-II蛋白及Beclin-1蛋白表达。⑧原位缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡有无变化。 结果：①与空白对照组相比，应用四氯化碳组大鼠肝脏颜色为暗红色，质脆，约14天后渐恢复正常；D-gal组大鼠肝脏水肿明显，色暗红，质脆，约14天后渐恢复正常；假手术组大鼠肝脏与之相比未见明显差异；2-AAF/PH组与之相比，1天肝脏呈淡红色，质脆，约21天后肝脏大小及颜色恢复正常。②肝脏组织H＆E结果显示，与空白对照组相比，四氯化碳组、D-gal组及2-AAF/PH组可见肝细胞肿胀，排列紊乱，于汇管区周围可见细胞形态小于肝细胞，核质深染，细胞核呈卵圆形的卵圆细胞；四氯化碳组和D-gal组炎症细胞浸润明显比2-AAF/PH组少，卵圆细胞少。③血清肝功能检测显示，大鼠造模完成后第1天肝功能同空白对照组相比，假手术组肝功能变化无明显差异。四氯化碳组、D-gal组及2-AAF/PH组大鼠天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotrans ferase, ALT）及碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）水平明显升高（AST：133.97±14.35U/L vs82.47±21.86U/L, P <0.05;346.17±9.75U/L vs82.47±21.86U/L, P <0.05;557.97±12.85U/L vs82.47±21.86U/L, P <0.05; ALT:47±9.35U/L vs41.97±6.64U/L, P<0.05；102.44±5.04U/L vs41.97±6.64U/L, P <0.05；249.1±19.71U/L vs41.97±6.64U/L, P <0.05；ALP：270.33±36.09U vs53.27±8.50U，P <0.05；379.33±21.55U vs53.27±8.50U，P <0.05；520.67±33.02U vs53.27±8.50U，P <0.05；），白蛋白(albumin，ALB)水平明显下降（23.37±2.21g/L vs32.13±3.73g/L, P <0.05；22.9±2.50g/L vs32.13±3.73g/L, P <0.05；23.9±1.06g/L vs32.13±3.73g/L, P <0.05）。四氯化碳组、D-gal组及2-AAF/PH组之间

ISBN: (纸本)9787548105626

关键词： γδT细胞   杀伤功能   TCRγδ   NKG2D   Vavl   PLC-γ1   Cbl-b  

摘要： γδT细胞能够以主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)非限制性方式识别多种肿瘤相关抗原,有效的杀伤肿瘤细胞,并能分泌干扰素(interferon, IFN)-γ等细胞因子。因此,γδT细胞已成为当前恶性肿瘤免疫治疗中一种很有前景的候选细胞。 γδT细胞表面除表达γ和δ链组成的T细胞受体(T cell receptor γδ, TCRγδ)外,还表达自然杀伤(natural killer, NK)细胞的重要功能受体NKG2D。这两种受体分子在γδT细胞对肿瘤细胞的杀伤中发挥重要的作用。目前,大部分文献报导倾向于γδT细胞活化为TCRγδ依赖性的,而NKG2D仅起共刺激作用。然而,为什么单独的TCRγδ刺激即可活化γδT细胞,NKG2D的共刺激作用又是如何发挥的?只有进一步回答这些问题,才能澄清γδT细胞生物学效应(主要为细胞毒效应)的分子机制,尤其是信号转导机制。 鉴此,本研究主要针对以下三个科学问题展开：一是γδT细胞杀伤肿瘤细胞的主要效应途径是什么?二是TCRγδ和NKG2D在活化γδT细胞杀伤功能中的具体作用是什么?三是γδT细胞杀伤功能活化的调控机制是什么?本文分以下两部分就上述三个科学问题进行研究。 第一部分工作旨在进一步澄清γδT细胞杀伤肿瘤细胞的相关机理。首先,我们比较了穿孔素-颗粒酶和Fas-FasL两条途径在γδ T细胞杀伤肿瘤细胞中的贡献。我们选取了五种不同组织来源的肿瘤细胞作为γδT细胞杀伤途径研究的靶细胞,包括Daudi(人Burkkit淋巴瘤细胞)、G401(人肾癌Wilms细胞)、NCI-H446(人小细胞肺癌细胞)、HR8348(人结直肠癌细胞)和MGC-803(人胃癌细胞)。流式细胞术检测结果表明,这五种不同组织来源的肿瘤细胞表面Fas受体呈现不同程度的表达：Daudi为5.14%、G401为7.24%、NCI-H556为44.10%、HR8348为69.40%以及MGC-803为82.30%。然后,对这五种Fas受体表达水平不同的肿瘤细胞进行穿孔素-颗粒酶途径及Fas-FasL途径的封闭实验。结果表明,封闭穿孔素-颗粒酶途径后,γδT细胞对这五种肿瘤细胞的杀伤能力均显著降低,而封闭Fas-FasL途径对γδT细胞杀伤能力无显著影响。随后的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)结果显示,穿孔素-颗粒酶途径封闭的γδT细胞与靶细胞共孵育后分泌IFN-γ的能力亦显著降低。而Fas-FasL途径封闭后,γδT细胞分泌IFN-y的能力无显著变化。以上结果表明γδT细胞杀伤肿瘤细胞的主要途径为穿孔素-颗粒酶途径。 随后,利用激活抗体包被的P815靶细胞杀伤体系,探讨了TCRγδ和NKG2D在活化γδT细胞杀伤功能中的作用,并分析了二者功能存在差异的原因。P815靶细胞杀伤实验结果表明,单独给予抗TCRγδ抗体刺激即可活化γδT细胞,杀伤抗体包被的P815靶细胞,并分泌IFN-γ;而单独的抗NKG2D抗体刺激却不能活化γδT细胞的杀伤功能,也不能引起IFN-γ的分泌。然而,抗NKG2D抗体可以增强抗TCRγδ抗体刺激所引起的γδT细胞的杀伤功能和分泌IFN-γ的能力。流式细胞术检测结果表明,抗TCRγδ抗体和抗NKG2D抗体均可引起γδT细胞的脱颗粒反应；激光共聚焦检测结果表明,单独的抗TCRγδ抗体刺激即可引起γδT细胞裂解性颗粒的极化,单独的抗NKG2D抗体刺激却不能。尽管如此,抗NKG2D抗体可以在某种程度上增强抗TCRγδ抗体所引起的裂解性颗粒极化。结合杀伤实验结果,提示引起γδT细胞裂解性颗粒极化能力的不同是TCRγδ和NKG2D在活化γδT细胞杀伤功能方面存在功能差异的主要原因。 第二部分研究工作旨在明确调控γδT细胞杀伤功能活化的相关信号通路。首先对γδT细胞杀伤功能相关的活化信号通路进行了研究,主要集中在Vavl信号通路、磷酸脂酶C-γ1(Phospholipase C-γ1, PLC-γ1)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, Erk)信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase, PI3K)信号通路等四条与αβ T细胞和NK细胞活化相关的信号通路。运用Western blot技术,证实了单独的抗TCRγδ抗体刺激即可显著性活化Vav1信号通路、PLC-γ1信号通路以及Erk信号通路；而单独给予抗NKG2D抗体刺激则无此作用

关键词： 乳腺癌   原发病灶   淋巴结转移   三七皂苷   心脏毒性   循环肿瘤细胞  

摘要： 目的:1、通过回顾性、横断面和前瞻性研究，探讨雌激素受体(ER)和人表皮生长因子受体(CerbB-2)在乳腺浸润性导管癌原发病灶、转移淋巴结和循环肿瘤细胞中表达情况及其临床意义。2、探讨三七皂苷R1对蒽环类化疗药物引起的心肌损伤的保护作用的可能分子机制。　　方法:1、回顾性选取70例脏器转移乳腺浸润性导管癌患者进行研究，分别采用免疫组织化学法和荧光原位杂交方法检测原发肿瘤病灶和脏器转移病灶中肿瘤细胞ER和CerbB-2的表达情况。横断面研究110例临床可手术的腋窝淋巴结转移的乳腺浸润性导管癌患者，分别对原发病灶、转移淋巴结和循环肿瘤细胞(CTC)进行ER和CerbB-2进行检测。CTC采用Cytelligen公司的TM-iFISH CTC检测试剂盒系统进行检测。对原发肿瘤病灶ER阴性而外周循环循环肿瘤细胞ER阳性的13例患者，后续均给予内分泌治疗进行前瞻性随访研究。2、70例转移患者临床资料分析中显示，既往曾接受含蒽环类药物在内的化学治疗的有58例，至转移前出现不同程度心功异常患者14例，44例心功正常者中有19例化疗同时和/或后续曾接受包含三七皂苷成分的中成药保护心脏功能治疗，二者间虽未见统计学意义，但可能提示三七皂苷在保护由蒽环类药物引起的心脏损伤方面可能具有某种独特作用机制。本研究中我们采用脂多糖作用H9C2心肌细胞系，建立心肌损伤模型，探讨三七皂苷R1在保护心肌损伤方面的分子作用机制。　　结果:1、回顾性分析70例患者资料数据中首先出现肺脏转移32例(45.7％)，骨转移17例(24.3％)，肝脏转移21例(30.0％);原发病灶中ER阳性和CerbB-2阳性14例(20.0％)，ER阳性和CerbB-2阴性30例(42.9％)，ER阴性和CerbB-2阳性16例(22.9％)，ER阴性和CerbB-2阴性10例(14.2％);70例脏器转移病灶中ER阳性和CerbB-2阳性18例(26.6％)，ER阳性和CerbB-2阴性19例(27.1％)，ER阴性和CerbB-2阳性16例(22.9％)，ER阴性和CerbB-2阴性17例(23.4％)。2、横断面研究110例数据中肿瘤原发病灶中ER阳性和CerbB-2阳性24例，ER阳性和CerbB-2阴性28例，ER阴性和CerbB-2阳性26例，ER阴性和CerbB-2阴性32例;转移腋窝淋巴结中ER阳性和CerbB-2阳性24例，ER阳性和CerbB-2阴性15例，ER阴性和CerbB-2阳性26例，ER阴性和CerbB-2阴性45例;外周血检测循环肿瘤细胞(CTC)阳性的有84例，其中ER阳性和CerbB-2阳性17例，ER阳性和CerbB-2阴性22例，ER阴性和CerbB-2阳性19例，ER阴性和CerbB-2阴性26例。3、前瞻性随访研究数据中110例病例中原发肿瘤病灶ER阴性而外周循环循环肿瘤细胞ER阳性的13例患者，本研究中均接受后续内分泌治疗，目前最长随访时间20个月，随访数据有待进一步分析。4、三七皂苷实验数据分析显示，三七皂苷R1可能通过ER介导产生独特的保护机制，明显降低相关损伤因子(TNF，IL-1， IL-6，和IFN)的水平。　　结论:1、原发肿瘤病灶的ER和CerbB-2表达情况与首先出现脏器转移的部位无明显统计学意义;各脏器转移病灶间ER和CerbB-2的表达情况，也未见明显统计学意义。2、CTC的检测具有较高的敏感性和特异性，可能会为患者个体化治疗方案的制定提供更有有意义的参考指标，同时也可能成为判断预后的有效指标之一。3、原发肿瘤病灶ER和CerbB-2的表达情况与腋窝淋巴结转移灶的表达情况具有一定的相关性;原发肿瘤病灶ER和CerbB-2的表达情况与CTC的检出也具有一定的相关性，但均无统计学差异。4、110例病例中原发肿瘤病灶ER阴性而外周循环循环肿瘤细胞ER阳性的13例患者，本研究中均接受后续内分泌治疗，目前最长随访时间20个月，随访数据有待进一步分析。5、人乳腺浸润性导管癌原发病灶、转移淋巴结、循环肿瘤细胞和脏器转移病灶的ER和CerbB-2表达情况存在不一致性，是肿瘤异质性的体现。在对乳腺癌患者行进个体化治疗时，充分考虑各部位病灶的生物行为可能会为患者带来更大临床获益，尤其对目前临床中“三阴”性乳腺癌患者可能更有意义。6、三七皂苷R1可以通过ER介导明显降低心肌细胞损伤的相关因子(TNF, IL-1，IL-6，and IFN)水平，其可能成为减免蒽环类化疗药物引起的心脏毒性新的选择药物之一。

ISBN: (纸本)9787030333025

关键词： 骨骼发育   细胞增殖   静磁场辐照   细胞生物学  

摘要： 目的：探索在静磁场与58S溶胶-凝胶生物活性玻璃共同作用时，对成骨细胞增殖性的影响，推论其对牙槽骨改建的潜在影响，为口腔临床牙周病患者牙周支持组织丧失后的再修复治疗提供参考。　　 方法：将Wistar大鼠成骨细胞株复苏，并传代培养至第4代后随机分为四组，分别置于空白、磁感应强度为0.062T的静磁场、58S溶胶-凝胶生物活性玻璃、58S溶胶-凝胶生物活性玻璃与磁感应强度为0.062T的静磁场共同作用的条件下，分别作用24h、48h、72h和120h，用噻唑兰(MTT)法检测成骨细胞的增殖情况;采用PCR测定各组成骨细胞中骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2，BMP-2)mRNA水平的相对表达量。　　 结果：⑴随着成骨细胞培养时间的增加，各组成骨细胞出现了不同程度增殖，各组间成骨细胞的增殖率存在显著性差异(P＜0.05)。⑵与空白组相比较，在磁感应强度为0.062T的静磁场、溶胶-凝胶法制备的生物活性玻璃58S、以及二者共同作用，这三种条件的作用下，各组成骨细胞中骨形成蛋白-2(BMP-2) mRNA水平的相对表达量在48h之前均呈现递增趋势(P＜0.05)，48h之后均呈现递减趋势(P＜0.05)，在48h达到最高点(P＜0.05)。⑶与磁感应强度为0.062T静磁场对成骨细胞增殖性的影响相比较，58S溶胶-凝胶生物活性玻璃更能促进成骨细胞的增殖。⑷58S溶胶-凝胶生物活性玻璃与0.062T静磁场共同作用组，其成骨细胞中骨形成蛋白-2(BMP-2) mRNA水平的相对表达量在任何时间点均高于其余三组(P＜0.05)。　　 结论：58S溶胶-凝胶生物活性玻璃与磁感应强度为0.062T的静磁场共同作用时，二者相互协调、共同作用，可明显增强成骨细胞的增殖性，本研究为临床开发静磁场结合58S溶胶-凝胶生物活性玻璃应用于牙周病患者的治疗打下基础。