教学课程资源库 更多>>

关键词： 骨髓移植   细胞反应   抗原反应   细胞生物学  

摘要： 目的：通过体外抑制实验和建立小鼠异基因骨髓移植移植物抗宿主病(GVHD)动物模型比较具备特异性抗原识别功能与不具备特异性抗原识别功能Tregs的免疫调节效应，为受者抗原特异性Tregs应用于临床免疫治疗提供有力证据。\n 方法：⑴BM-DCs分离培养及鉴定:分别从BALB/C小鼠、C57BL/6小鼠、C3H/HeNCrlVr小鼠的双侧股骨中分离树突状细胞(BM-DCs)，于含10％胎牛血清的1640完全培养基、重组鼠GM-CSF、IL-4培养6天，加入LPS继续培养16小时后收集细胞，用流式细胞仪检测细胞表面CD11C及CD86分子的表达。⑵从CD4+T细胞中诱导扩增Tregs及Tregs的抗原表达鉴定:用免疫磁珠分选法从BALB/C小鼠脾细胞中分选CD4+T细胞，分别与BALB/C小鼠、C57BL/6小鼠、C3H/HeNCrlVr小鼠的DCs混合，并加入IL-2和雷帕霉素(RAPA)培养扩增5天后，收获细胞并以流式细胞仪检测扩增的细胞CD25及FOXP3的表达。⑶以C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞作为刺激细胞、以CFSE标记的BALB/C小鼠新鲜分离的CD4+CD25T细胞作为增殖效应细胞，共同培养于96孔圆底板进行混合淋巴细胞反应，同时分别加入不同数量的新鲜分离nTregs和不同DC诱导产生的iTregs进行混合淋巴细胞反应，在反应5天后收集细胞以流式细胞仪检测CD4+CD25-T细胞的增殖效应。比较用CD4CD25免疫磁珠分选试剂盒分选获得的新鲜分离CD4+CD25+细胞(nTregs)与不同DC诱导产生的CD4+CD25+FOXP3+细胞(iTregs)对效应性T细胞（Teffs）的增殖抑制效应。⑷建立小鼠异基因移植GVHD模型:以C57BL/6(H-2b)雄性小鼠为供鼠、8-10周龄SPF级BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠，受鼠接受剂量率0.5 Gy/min、总剂量8.0 Gy的全身照射(TBI)预处理后，以1∶1比例输入供鼠骨髓单个核细胞及脾淋巴细胞建立小鼠异基因移植GVHD模型。⑸比较不同DC诱导产生和新鲜分离的CD4+CD25+FOXP3+细胞对移植效应的影响:受鼠于移植0天、+1天、+3天和+5经尾静脉分别输入新鲜分选的同基因(H-2d)小鼠、异基因(H-2b)小鼠的nTregs和不同DC诱导产生的iTregs治疗GVHD，观察移植受鼠GVHD发生率、长期存活率、植入及造血重建等移植效应。\n 结果：①新鲜分选和不同DC诱导产生的CD4+CD25+T细胞FOXP3表达检测:经流式细胞仪检测，免疫磁珠法新鲜分选的CD4+CD25+细胞FOXP3阳性表达率为5％;经BALB/C、C57BL/6和C3H/HeNCrlVr小鼠DCs诱导培养BALB/C小鼠脾CD4+T细胞获得的CD4+CD25+细胞FOXP3阳性表达率分别为14.7％、12.7％和19.7％;经统计学分析，3种不同基因小鼠DC诱导产生的CD4+CD25+T细胞FOXP3表达均较新鲜分离的CD4+CD25+细胞增高，差异有统计学意义(P＜0.05);但3种不同基因小鼠DC诱导产生的CD4+CD25+细胞之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。②不同Tregs对体外混合淋巴细胞反应的抑制试验:新鲜分离的同基因(H-2d)和异基因(H-2b)小鼠nTregs对淋巴细胞增殖的抑制率差别无统计学意义(P＞0.05)。异基因(H-2b)小鼠DCs诱导的iTregs对淋巴细胞增殖的抑制率比2种新鲜分离的nTregs明显增高（P＜0.05）;而同基因(H-2d)和第三方(C3 H/HeNCrlVr)小鼠DCs诱导的iTregs对淋巴细胞增殖的抑制率则比2种新鲜分离的nTregs降低(P＜0.05)。③不同Tregs对小鼠异基因骨髓移植效应的影响:注射骨髓细胞和脾淋巴细胞的小鼠全部移植成功，均出现GVHD的临床表现如弓背、脱毛、体重下降及肝脏、脾脏、小肠组织GVHD病理学改变。各组受鼠GVHD严重程度比较:GVHD组＞allo-nTregs(C57BL/6)组＞allo-iTregs(C3H)组＞auto-nTreg(BALB/C)组＞auto-iTreg(BALB/C)组＞allo-iTregs(C57BL/6)组;各组受鼠移植+60天存活率:GVHD组和allo-nTregs(C57BL/6)组均无存活，auto-nTreg(BALB/C)组及allo-iTregs(C3H)组均为20％，auto-iTreg(BALB/C)及allo-iTregs(C57BL/6)组均为40％。注射Tregs显著延长GVHD小鼠的存活期(P＜0.05)，注射具有抗原特异性的Tregs的小鼠存活率、嵌合体比例及外周血淋巴细胞CD4+CD25+FOXP3+表达均比注射新

关键词： 细胞生物学   调控网络   p53   分子   机制   环境   期刊   Cell  

摘要： 《分子与细胞生物学期刊》（Journal of Molecular Cell Biology）近日在线发表了中科院生化与细胞所吴家睿研究组与陈洛南研究组共同合作取得的研究成果，报道了一种细胞环境对p53分子调控网络的影响机制及其在肿瘤发生中的作用。

关键词： 细胞生物学   精品课程   教学模式   教学效果  

摘要： 本文结合教学实践经验,针对建立细胞生物学精品课程的一系列问题进行探讨,并且结合现代技术在细胞生物学中的应用,总结细胞生物学精品课程的教学模式及方法,从而有效地提高细胞生物学的教学效果。

关键词： 生殖细胞发育   人类   路线图   《自然》杂志   美发   美国加州大学   细胞生物学   致病原因  

摘要： 世界上约有10％的夫妇患有不孕症，致病原因多种多样，其中之一便是不能正常产生精子或卵子细胞。据《自然》杂志2012年12月16日报道，美国加州大学洛杉矶分校的研究人员当日在《自然·细胞生物学》上发表的一项针对人类生殖细胞早期发育情况的研究成果，或将为这种疾病的治疗带来希望，让人造生殖细胞离现实又近了一步。

关键词： 胃癌   Notch1   NICD表达   化疗敏感性   细胞株增殖  

摘要： 目的:\n 1.研究Notch1胞内段NICD(Notch1 Intracellular Domain)在不同分化程度胃癌组织中的差异性表达。\n 2.研究外源性NICD过表达对胃癌细胞株AGS的增殖、转移以及化疗敏感性的影响。\n 方法:\n 1.收集温州医学院附属第一医院2012年胃癌手术标本共12例。其中男性9例，女性3例，平均年龄66.25±11.86岁，其中高分化腺癌3例、中分化腺癌3例，低分化腺癌3例及未分化腺癌3例。所有患者术前均未接受放疗和化疗。另取同期门诊胃镜室行活检术取得的正常胃组织12例，其中男9例，女3例，平均年龄62.8±5.1岁。所有病例均获得伦理审查委员会机构的伦理批准。所有标本均保存于液氮中。采用Western Blotting法检测不同胃组织季正常胃组织中NICD的相对表达量。\n 2.用阳离子脂质体lipofectamine2000将携带有NICD胞内段的真核表达质粒(pIERS2-EGFP-NICD)转入AGS细胞，并将转入空质粒的AGS细胞作为阴性对照组，AGS细胞作为空白组。转染24小时后，采用500μg/ml G418进行稳定筛选，筛选二十天后半量(250μg/ml)维持培养。\n 3.采用实时荧光定量PCR法检测三组细胞Notch1信号通路相关基因的表达。采用Western blot检测三组细胞NICD蛋白表达。\n 4.采用CCK8法检测三组细胞的细胞增殖，Transwell实验检测三组细胞的侵袭能力，顺铂(DDP)、氟尿嘧啶（5-FU）检测外源性NICD过表达对胃癌细胞化疗敏感性的影响。\n 5.统计学方法:采用SPSS15.0统计学软件进行分析，实验结果采用均数加减标准差，显著性采用单因素方差分析及t检验(P＜0.05)。\n 结果:\n 1.胃癌组织中，随着分化程度的降低，NICD的表达逐渐升高（图1A），正常胃粘膜组织NICD相对表达量为0.20±0.01;高分化胃癌组织NICD相对表达量为0.50±0.03;中分化胃癌组织NICD相对表达量为0.61±0.03;低分化胃癌组织NICD相对表达量为0.73±0.10;未分化胃癌组织NICD相对表达量为0.90±0.17(图1B)。胃癌组较正常组表达量有统计学差异(p＜0.05, t=9.439)。\n 2.转染后荧光显微镜下观察，实验组细胞及阴性对照组细胞均带有绿色荧光，空白对照组则无荧光。\n 3.实时荧光定量PCR检测，与阴性对照组细胞、空白对照组细胞相比较，实验组细胞下游基因Hes1、NF-κ B2mRNA表达明显增加，而JAG1、notch1基因则无明显变化。Western blot证实实验组细胞NICD蛋白表达量明显增加。\n 4.实验组细胞同对照组细胞相比，增殖率明显升高;Transwell实验表明，实验组细胞穿过transwell小室数58.8±7.4，阴性对照组细胞22.6±3.17，空白对照组细胞23±2.86。实验组细胞迁移能力高于对照组(P＜0.05)。DDP，5-FU分三个浓度抑制细胞生长，实验组抑制率明显低于阴性对照组和空白对照组。\n 结论:\n NICD在不同分化的胃癌组织中均有表达，且随着分化程度的降低，NICD的表达增加。表达外源性NICD能够促进胃癌细胞AGS的增殖和侵袭能力，降低肿瘤药物对化疗的敏感性。

关键词： 细胞生物学   中医学院   教学参考资料  

ISBN: (纸本)9787513212816

摘要： 本书是全国中医药行业高等教育”十二五”规划教材《细胞生物学》的配套习题集，可供中医学、中药学、中西医临床医学和药学类专业学生使用。

关键词： 癌   中药疗法   防治   癌细胞   细胞生物学   研究  

ISBN: (纸本)7530873960

摘要： 本书分五部分。第一部分从分子生物学角度介绍了人体正常细胞是怎么演变为癌细胞的。第二部分探索改变癌细胞生物学特性的一些实验及结果。第三部分就癌细胞在中药剂作用诱导下，针对体内癌细胞的超前或癌前治疗预防及其可能的效应。第四部分进一步讨论了癌细胞基因表达改变与癌症的“自然消退”(自愈)以及对癌症的治疗和预防的理想前景。第五部分结合笔者的研究讲诉了所进行的实验渊源。

关键词： 成骨不全   细胞转化   碱性磷酸酶   细胞生物学  

摘要： 目的：通过研究白细胞介素-1受体相关激酶-4(interleukin-1 receptor associatedki-nase-4，IRAK-4)对成骨细胞形成过程中特异性转录因子Runx2的影响。探讨IRAK-4对成骨细胞转化过程中特异性转录因子Runx2的作用机制，为临床治疗骨不连提供新的思路及理论指导。　　 方法：⑴利用小鼠肌源细胞C2C12建立间充质细胞转化为成骨细胞的模型，实验随机分为3组:对照组:细胞悬液中不加任何药品;BMP-2组:在细胞悬液中加入BMP-21μg/ml;BMP-2+IRAK-4 siRNA组:在细胞悬液中加入IRAK-4 siRNA100pmol、BMP-21μg/ml。⑵碱性磷酸酶(ALP)荧光活性测定检测不同浓度下BMP-2的成骨活性作用及干扰IRAK-4后对成骨细胞的分化影响。⑶采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测单独或者联合加入BMP-2及IRAK-4 siRNA对成骨细胞转化过程中特异性转录因子转录因子Runx2 mRNA表达的影响。⑷蛋白印迹法(Western blot)法检测单独或者联合加入BMP-2及IRAK-4siRNA对成骨细胞转化过程中特异性转录因子转录因子Runx2蛋白表达的影响。　　 结果：①经过碱性磷酸酶染色、苏木素复染可见成骨细胞红棕色颗粒;茜素红染色法可见成骨细胞特征性橘红色结节，鉴定为成骨细胞。②BMP-2对成骨细胞的转化有促进作用且有量效相关性。③干扰IRAK-4后对成骨细胞的分化有促进作用。④BMP-2+IRAK-4 siRNA组通过RT-PCR结果显示Runx2 mRNA的表达量高于对照组、BMP-2组，差异有统计学意义(P＜0.05)。⑤BMP-2+IRAK-4 siRNA组通过Western blot结果显示Runx2蛋白的表达量增高。　　 结论：⑴BMP-2可以促进间充质细胞向成骨细胞的转化，并且有量效相关性。⑵IRAK-4对成骨细胞的分化有抑制作用。此抑制作用是通过抑制成骨细胞转化过程中特异性转录因子Runx2的活性实现的。

关键词： 真菌细胞   科学出版社   分子生物学  

摘要： ISBN:9787030376664科学出版社2013年6月1日出版定价:108.00元16开本平装460页内容简介:该书以当代真菌细胞生物学前沿论题的新观点和新理论为基础,以丝状真菌和单细胞酵母的细胞生长和发育的分子生物学为主线,从细胞的骨架系统、内膜系统、有丝分裂、减数分裂、极性生长、发育分化、性激素、有性生殖的交配系

关键词： 滋养细胞   胎盘组织   侵袭能力   胎儿生长受限   原因不明复发性流产   子痫前期   子痫先兆   功能异常   相关疾病   RNA   调控   调节控制  

摘要： 滋养层细胞是胚胎与母体直接接触的部分,滋养细胞侵入母体蜕膜后,不被母体排斥而快速增殖是妊娠成功的关键因素之一,同时滋养细胞有节制地侵入子宫内膜基质也是正常妊娠所必需。滋养层细胞生物学功能的异常可能导致自然流产、妊娠高血压疾病及胎儿生长受限等病理妊娠。