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关键词： Vps24蛋白   MLE12细胞   生物学特性   信号通路  

摘要： 目的：\n Vps24(vacuolar protein sorting24)是转运必需内吞体分选复合物(endosomalsorting complex required for transport，ESCRT)中ESCRT-Ⅲ复合物的重要组成部分。ESCRTs的主要功能包括，介导泛素化的内吞体膜蛋白分选，形成多泡体(multivesicular body，MVBs)，并转运入溶酶体进行降解，从而调控受体信号通路。它也能够调控胞质分裂、病毒包装、出芽及自噬等。ESCRTs由四类具有不同生物学功能的蛋白复合物构成，即ESCRTs-0，-Ⅰ，-Ⅱ，和-Ⅲ，它们通过精密的分工协作识别并分选泛素化膜受体[1]。ESCRT-Ⅲ是一种动态多聚体，主要由四种核心亚基构成，即Vps20，Snf7，Vps24和Vps2[2]。在MVBs形成过程中，Vps24与ESCRTs的其他成员共同作用，使囊泡膜内化入腔，并实现腔内囊泡与内体膜的最终分离[3]，从而介导受体信号通路的调控。\n Ⅱ型肺泡上皮细胞（typeⅡ alveolar epithelial cell，AEⅡ）是末梢肺组织中的重要细胞系，具有合成、分泌表面活性物质(PS)，增殖分化以补充AEⅠ，及参与免疫调控等功能。体外研究表明，原代分离培养的AEⅡ，其特征分子SPC的表达和板层小体等会随着时间的推移而逐渐降低，转分化为AEⅠ[4，5]。而在体内，AEⅡ是AEⅠ的祖细胞，随着肺泡上皮的发育和分化，SPC的表达升高。由此可知，内环境稳态与维持AEⅡ分泌PS有关。板层小体是AEⅡ合成分泌储存PS的主要结构，而多泡体是板层小体的前体[6]。也有文献指出，ESCRTs对哺乳动物上皮细胞的极性维持具有重要作用，敲除ESCRTs成员Tsg101可使上皮细胞失去极性[7]。因此，ESCRTs可能在末梢肺组织稳态维持中具有重要作用。MLE12(MouseLung Epithelial12)细胞是AEⅡ的近似细胞系，以其为研究对象，用以探究AEⅡ在末梢肺组织稳态维持中的重要作用。\n 本课题以探寻Vps24的功能为核心，借助体外重组技术构建表达载体，建立高表达Vps24的稳定转染细胞系，并初步分析高表达Vps24对MLE12细胞生物学特性的改变。\n 方法：\n 1、重组质粒的构建\n 2、细胞培养\n 3、基因转染及稳定筛选\n 4、Western Blotting\n 5、碘化丙啶染色\n 6、Realtime PCR\n 7、RT-PCR\n 8、统计分析\n 结果：\n 1、成功构建外源性高表达Vps24的重组质粒\n 将小鼠的Vps24全长编码区基因克隆入pcDNA3.1/myc-His-B真核表达载体\n 2、成功建立外源性高表达Vps24的稳定转染细胞系\n 将重组质粒转染入MLE12细胞并进行稳定筛选及鉴定，得到外源性高表达Vps24的稳定转染细胞系M12V24\n 3、外源性高表达Vps24能够增强ESCRTs行使胞质分裂的能力\n 流式细胞技术检测细胞周期可知，Vps24的过表达能够增强ESCRTs行使胞质分裂的能力，消解多倍体。\n 4、外源性高表达Vps24显著降低E-cadherin mRNA表达水平\n 随机选取的10个M12V24阳性单克隆中，9个单克隆的E-cadherin mRNA表达水平均出现明显的降低，提示Vps24的过表达可能影响MLE12细胞的分化。\n 5、外源性高表达Vps24不能显著增强Bleomycin诱发EMT\n (1) Bleomycin处理细胞后，在我们观察的时间段内，细胞形态均发生一定改变，并未出现明显的上皮细胞表型变为间质细胞表型\n (2) Realtime PCR检测可知，细胞并未发生Vimentin mRNA表达水平的明显升高\n 6、Tunicamycin诱发ER Stress体外模型的确立\n (1)通过活细胞计数，确定Tunicamycin诱发ER Stress的最佳浓度为6ng/ml\n (2)通过检测Bip mRNA表达水平及XBP-1剪切情况，确定Tunicamycin诱发ER Stress最佳时间为24小时\n 7、ER Stress及Vps24过表达与ER Stress联合作用均不能诱发EMT\n (1)在正常MLE12细胞培养条件下，经Tunicamycin处理后，细胞并未由上皮细胞表型变为间质细胞表型\n (2) Realtime PCR检测可知，细胞并未发生Vimentin mRNA表达水平的明显升高\n 结论：\n 外源性高

关键词： 人体免疫系统   T淋巴细胞   机制   科学中心   细胞生物学   生物化学   细胞活化   分子功能  

摘要： 中科院上海生科院生物化学与细胞生物学所／圈家蛋白质科学中心（上海）许琛琦研究员、中科院强磁场科学中心王俊峰研究员等人首次证明：钙离子能够改变脂分子功能来帮助T淋巴细胞活化，提高T淋巴细胞对外来抗原的敏感性，从而帮助机体清除病原体。

关键词： 生物物理学   生物化学   征稿简则   栏目设置   分子生物学   细胞生物学   蛋白质组学   系统生物学  

摘要： （2012年12月修订）1征稿范围与栏目设置1.1征稿范围本刊为国内外公开发行的全国性学术期刊,月刊,每月20日发行.征稿的学科范围是生物化学、分子生物学、生物物理学、细胞生物学、神经科学、免疫学,以及基因组学、蛋白质组学、系统生物学等相关学科领域.1.

关键词： 脂肪间充质干细胞   免疫表型   增值活性   细胞鉴定   消化性溃疡  

摘要： 研究背景及目的：\n 成体间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有多向分化能力,研究证实MSCs可分化为胃肠道上皮细胞,有望通过移植MSCs来修复损伤的胃黏膜上皮组织,恢复黏膜原有的防御屏障功能并提高溃疡愈合质量(quality of ulcer healing,QOUH),从而达到治疗并防止消化性溃疡(pepticulcer,PU)复发的目的。国外有研究采用骨髓间充质干细胞(bone marrow derived stem cell,BSCs)治疗胃溃疡(gastric ulcer,GU)并取得了令人鼓舞的结果,证实了通过移植BSCs可加速溃疡的愈合。然而,由于BSCs的数量少,仅占骨髓有核细胞的0.001%～0.01%,并且获取骨髓组织时创伤性大,这使得BSCs的临床应用前景受到了限制。脂肪间充质干细胞(adipose-derived stromal cells,ASCs)作为其中一种MSCs,具有细胞数量大、取材创伤性小、可上皮细胞分化、无免疫排斥反应等优点。利用ASCs移植治疗GU,有可能会成为一种新颖、有效的治疗手段。本研究旨在观察SD大鼠ASCs的生物学特点与不同年龄、不同取材部位的关系,为ASCs移植胃溃疡治疗的实验寻找理想的种子细胞提供实验依据。\n 方法：\n SD大鼠,雌、雄不限,分为1月龄(幼龄组)和12月龄(成年组)两种,取腹腔大网膜脂肪组织或腹股沟脂肪组织进行分离、培养与鉴定。随机分为4组:A组为取材于腹腔大网膜脂肪组织的1月龄SD大鼠;B组为取材于腹股沟脂肪组织的1月龄SD大鼠;C组为取材于腹腔大网膜脂肪组织的12月龄SD大鼠;D组为取材于腹股沟脂肪组织的12月龄SD大鼠;以Ⅰ型胶原酶消化脂肪组织后提取ASCs进行贴壁培养,相差显微镜下观察ASCs的形态,绘制细胞生长曲线,并用流式细胞术鉴定第四代ASCs的表面标志物CD29,CD45,CD90的表达率。\n 结果：\n 1、四组SD大鼠培养出的细胞均贴壁生长,以梭形为主,部分呈星形或多角形,符合间充质干细胞形态特征,各组原代细胞与传代细胞在形态学上无明显差异。\n 2、四组SD大鼠第4代ASCs的生长曲线均呈S型;ASCs生长的潜伏期、进入平台期时间在四组间差异无统计学意义(P>0.05)。\n 3、1月龄组与12月龄组的ASCs在细胞倍增时间上差异具有显著统计学差异(P<0.01),不同部位间差异无统计学意义(P>0.05)。\n 4、第四代ASCs免疫表型结果:CD29和CD90呈明显阳性,而CD45呈明显阴性,符合间充质干细胞表型特征。三种免疫表型的阳性或阴性表达率在不同月龄及不同取材部位的四组间差异无统计学意义(P>0.05)。\n 结论：\n 通过酶消化法获得的SD大鼠的脂肪组织间充质干细胞,细胞贴壁生长,呈现类似成纤维细胞样形态学特征,免疫表型显示CD29和CD90呈阳性,而CD45呈阴性,符合间充质干细胞的特征。1月龄SD大鼠的ASCs的增值活性优于12月龄组,腹腔大网膜脂肪组织与腹股沟脂肪组织来源的ASCs在细胞形态学、增值活力及表面抗原CD29、CD45、CD90表达率上无明显差异。

关键词： 细胞生物学   实验   教学改革  

摘要： 细胞生物学是当代生命科学的基础学科,也是发展迅猛的前沿学科之一。为了促进学生的实践动手能力和实践创新能力,配合细胞生物学理论课教学改革的不断深化,细胞生物学实验教学改革已是大势所趋。该教研组经过多年的探索,从教学体系、教学内容和教学手段等方面对细胞生物学实验教学进行了改革,旨在充分调动学生学习的主动性和积极性,培养学生的独立思考、综合运用知识和科研创新的能力。

关键词： 细胞生物学   教学   改革  

摘要： 针对细胞生物学的教学改革,首先从培养目标这个一点来作为我们工作的出发点,然后制定相对合理的科研教学大纲;教师要注重教学中内容的改革,我们的教师应具备创新教学思维,可以在教学中采用多样化的教学实践方法,要在课程中充分调动学生对细胞生物学的学习积极性。努力克服在以往传统教学中的那些弊端,以更好地满足我们为社会更好发展提供和培养高素质以及创新性的人才。

关键词： 分子细胞生物学   生物学方法   多细胞生物体   Wilson   DNA水平   南方医科大学   运行程序   生命现象  

摘要： 新年伊始，我刊本期推出了由南方医科大学基因工程研究所撰写的最新分子细胞生物学技术研究进展的系列专题，旨在向读者提供从事分子与细胞生物学研究的平台。20世纪初叶，即1925年，杰出的细胞生物学与遗传学家Wilson E．B．在他的不朽著作《细胞的发育与遗传》（The cell in development and heridity）中提出“一切生命的关键问题都要到细胞中去寻找”（The key to every biological problem must finally be sought in the cell）的名言。细胞生物学发展至今天，证明了Wilson的天才预见。细胞，无论作为单细胞生物体，或是作为多细胞生物体的基本结构与功能单位，它（或它们）都遵循着生物体的基本生命运行程序，它（或它们）起于细胞的分裂，再经繁殖、生长、发育、分化、衰老、突变（尤其是癌变）、疾病，直至死亡。这一运行程序是如此地绵延不断与纷繁复杂，以至科学发展至今天，生命现象仍然是令人着迷与难解的探索课题。本系列文章即介绍了当前最新的如何探索这些生命奥秘的手段与途径，其中包括如何使细胞“返老还童”（rejuvenation）成为多潜能的干细胞从而获得重新分化的能力、如何从源头上即DNA水平上早期寻找出细胞的疾病病因所在以及机体罹患疾病的病原体、如何不改变DNA而阻止恶性细胞的发生与发展即用miRNA来调控细胞运行的周期等。我们希冀这些方法能得到人们更多、更广泛的应用，更希望从这些方法的思路中得到启迪，创建出自己的更好的方法。以及藉此作出更多更大的成果，为我国分子细胞生物学领域、乃至基础医学与临床领域走在世界前列作出贡献。

关键词： 硫化氢   次氯酸   分子探针   合成工艺   光学性质   成像机理   细胞生物学  

摘要： 硫化氢(H2S)和次氯酸(HOCl)是两种重要的氧化还原型物种，它们跟生物体的新陈代谢以及疾病有着重大的关联。为探究它们的生物学功能，我们需要研究它们在生物体内的存在与含量变化。为此，设计合成具有高灵敏度、高选择性的硫化氢与次氯酸荧光探针，具有重要的生物学意义。本论文在前人工作的基础上，根据一些特异性化学反应，设计合成了若干分子探针用于识别硫化氧和次氯酸。论文分六章，分别包括以下内容:\n 第一章首先简要介绍了荧光传感器的基本概念以及设计原理。其次介绍了硫化氢及次氯酸分子的细胞生物学。综述了近些年关于硫化氢与次氯酸分子识别探针的相关报道。简要介绍了香豆素染料和罗丹明染料的光学性质及应用研究。\n 第二章基于硫化氢可还原叠氮基为氨基的化学原理，我们设计合成了带叠氮基团的香豆素。该叠氮香豆素不发射荧光，当它与硫化氢作用后，叠氮基还原为氨基再发生分子内酯交换反应游离出羟基香豆素从而发射强烈的荧光。探针具有高选择性识别硫化氢，几乎不受其它活性物质的干扰，我们验证了探针的检测机理，并实现了在细胞水平上对硫化氢成像。\n 第三章基于硫化氢可与Michael受体发生共轭加成反应的化学原理，我们设想合成带有Michael受体的荧光素衍生物。按照设想的荧光素合成方法，我们并未合成出所要的目标化合物，却意外得到一个新的荧光化合物。我们通过核磁共振，高分辨质谱等表征手段，甚至通过化学理论计算模拟得知该荧光化合物是种香豆素染料。该染料分子具有高达0.68的量子产率，斯托克位移为150nm，荧光强度不受pH和阳离子干扰，具有潜在的生物应用价值。\n 第四章研究了次氯酸的氧化性，能够将C-N键氧化为C=N双键。我们设计合成了一系列苯并噻唑衍生物，并筛选出与次氯酸具有较强荧光响应探针分子SA-thiazoline。当探针与次氯酸作用后，单键被氧化为双键产生更大的共轭结构而使分子发光。其检测的灵敏度与选择性较高并将可应用到生物体系里，实现了其在L929细胞里次氯酸的成像分析。\n 第五章，设计了一种六元内环的罗丹明探针，利用了罗丹明“关-开”工作原理，基于次氯酸的脱肟反应，该探针能与次氯酸快速做出响应，通过目视比色法以及荧光分析法可以对其进行高灵敏检测，并可以在细胞水平上对次氯酸成像。\n 第六章，将研究生阶段工作中一些失败的例子加以总结分析，希望能对后来者有所启发与帮助。

关键词： 人体免疫系统   科学家   机制   细胞生物学   自身免疫病   科学中心   生物化学   《自然》  

摘要： 日前,国际权威学术期刊《自然》在线发表了中科院上海生科院生物化学与细胞生物学研究所/国家蛋白质科学中心（上海）许琛琦研究员领导的研究组的最新成果,首次证明钙离子能改变脂分子功能来帮助T淋巴细胞活化,提高T细胞对外来抗原的敏感性,从而帮助机体清除病原体。这项新成果对治疗自身免疫病、慢性病毒感染、肿瘤等多种与T细胞相关的疾病有很好的指导意义。