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关键词： PBL   细胞生物学   多元化教学模式  

摘要： 以问题为基础的学习(problem-based learning,PBL)的教学方法是一种国际上广泛认同和有效的医学课程模式,它将问题作为教学的基本因素,使学生在不断的提出问题和解决问题中完成教学内容的学习,这种方法在培养学生分析问题和解决问题的能力、养成终生学习习惯方面具有极大的促进作用。该文介绍了一种新的基于医学细胞生物学课程特点的PBL教学模式,它是包括病例模式、微型病例模式、核心问题模式的多元化教学模式。文章从教学框架构建、教材及病例编写、课堂教学组织、教学效果评价等多个环节进行了全方位介绍和探讨,为细胞生物学教学水平的整体提升提供了新的思路。

关键词： 耐顺铂卵巢癌   顺铂   周期分布   增殖   凋亡  

摘要： 目的:探讨耐顺铂卵巢癌SKOV3/DDPⅡ细胞对于顺铂作用后其细胞周期、凋亡、增殖及铂类耐药相关基因ARHGDIB和CCND1表达量的变化。方法:采用流式细胞术检测不同浓度和时间顺铂作用后SKOV3/DDPⅡ细胞周期和凋亡率的变化,并与标记GFP的上皮性卵巢癌细胞株SKOV3-GFP(敏感株)相比较;通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测不同浓度和时间顺铂作用后细胞增殖的变化;实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测裸鼠体内瘤块耐药基因CC-ND1和ARHGDIB基因的表达情况。结果:半抑制浓度的顺铂作用48h后,SKOV3-GFP和SKOV3/DDPⅡ两株细胞分布于G0/G1期的比例相对于无顺铂处理组明显下降(P<0.01,P<0.05),SKOV3/DDPⅡ细胞分布于G2/M期的比例则相对于无顺铂处理组明显升高(P<0.01);而顺铂作用48h内SKOV3-GFP和SKOV3/DDPⅡ两株细胞凋亡率随时间和浓度的增大而增大;以9.9,19.8,29.7μmol/L浓度的顺铂处理6d以后,SKOV3/DDPⅡ的增殖抑制得到解除,并继续生长,而SK-OV3-GFP细胞则随顺铂作用时间延长增殖持续受到抑制。顺铂作用体内移植瘤5次后,CCND1在SKOV3/DDPⅡ-5的相对表达比SKOV3/DDPⅡ-0增高92.98倍,作用第8次后,ARHGDIB在SKOV3/DDPⅡ-8的相对表达比SKOV3/DDPⅡ-0增高2.51倍。结论:具有耐药表型的卵巢上皮癌细胞在顺铂作用下降低分布于G0/G1期细胞数使细胞生长受到一定程度的抑制,但在顺铂刺激后肿瘤细胞过度表达CCND1基因使细胞顺利通过G1/S检查点促进肿瘤细胞增殖,同时上调表达ARHG-DIB基因抵抗顺铂诱导的肿瘤细胞凋亡。

关键词： RNA   编码   科学家   细胞生物学   科学研究院   研究论文   生物化学   封面故事  

摘要： 国际著名学术期刊《分子细胞》不久前以封面故事发表了中科院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所陈玲玲研究组的最新研究论文，揭示了一类全新内含子来源的长非编码RNA的产生机制，及其参与剪接调控的重要功能。这将为进一步了解PWS综合症的病理机制提供新的研究思路。

关键词： 神经干细胞   中枢神经系统损伤   持续活化型   Gli2   神经球   慢病毒转染法   星形胶质细胞   Nestin  

摘要： 目的探讨外源表达持续活化型Gli2对小鼠星形胶质细胞生物学特性的影响。方法构建可表达持续活化型Gli2的慢病毒载体,包装慢病毒颗粒,继而感染小鼠星形胶质细胞,对其生物学特性的改变进行鉴定。结果研究发现,含有外源表达的持续活化型Gli2的小鼠星形胶质细胞在神经干细胞培养基中连续培养13 d后可获得形成细胞球的能力,且形成的细胞球与正常的小鼠神经球在形态上相近;对所形成的细胞球做免疫荧光染色,结果显示神经干细胞的特异性标志物Nestin呈阳性。结论在小鼠星形胶质细胞中外源表达持续活化型Gli2后可使其获得形成神经球样细胞球的能力。

关键词： 会议信息   生物物理学   会议名称   分子生物学   细胞生物学   物理学会   生物化学   生物工程  

摘要： 会议名称（中文）：国际生物物理学会第57届年会会议名称（英文）：Biophysical Society 57th Annual Meeting所属学科：生物物理学、生物化学及分子生物学，细胞生物学．

关键词： 哮喘   基底硬度   转化生长因子-β1   气道成纤维细胞   力学行为   发病机制   动物实验  

摘要： 哮喘是一种严重的呼吸系统疾病。在哮喘中不仅存在气道炎症，并且还存在气道组织的重塑（airway remoldeling）。在气道重塑中，气道壁增厚，上皮下纤维化，成肌纤维细胞（myofibroblasts，MF）和平滑肌细胞﹙airway Smooth muscle cell，ASMC﹚过度增生。气道成纤维细胞不仅是气道的结构细胞，其在气道组织中的增值、迁移与分化等行为与气道重塑的发展过程密切相关。已有研究表明，在转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）的诱导下，气道成纤维细胞可以向成肌纤维细胞分化。成肌纤维细胞的超微结构介于成纤维细胞和平滑肌细胞之间，并且也表达平滑肌细胞的特征性蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA），有人推测成肌纤维细胞是成纤维细胞向平滑肌细胞转分化的过度形态。此外，在气道重塑中，由于成肌纤维细胞过度合成和分泌细胞外基质（excellular matrix，ECM）蛋白，从而导致细胞外基底膜增厚和基底硬度增加。然而，细胞外基底硬度的增加能否影响气道成纤维细胞的增殖、迁移等生物学行为，能否影响炎症因子TGF-β1诱导下的气道成纤维细胞向成肌纤维细胞的分化以及分化细胞的力学行为，从而加重哮喘的发病，至今并未被研究过。\n 为了研究这个问题，本课题以SD（Sprague Dawley）大鼠气道成纤维细胞作为实验载体。首先，人工合成不同硬度的PDMS（Polydimethylsiloxane，PDMS）基底，杨氏模量分别1kPa、10 kPa、50 kPa；其次，原代培养和鉴定大鼠气道成纤维细胞。然后，将大鼠气道成纤维细胞接种在不同硬度的基底上，测量基底硬度对气道成纤维细胞形态、黏着斑、增殖和迁移等生物学行为的影响。最后，将大鼠气道成纤维细胞接种在不同硬度的基底上，并用10 ng/mL的TGF-β1诱导其向成肌纤维细胞分化。测量基底硬度对TGF-β1诱导的气道成纤维细胞向成肌纤维细胞分化的影响以及分化细胞力学行为的影响。本文的主要研究内容和结果如下：\n ①基底硬度对气道成纤维细胞形态、黏着斑、增殖与迁移等生物学行为的影响：用相差显微镜观察并记录基底硬度对气道成纤维细胞粘附形态的影响；免疫荧光法检测基底硬度对气道成纤维细胞黏着斑（vinculin）的影响；细胞计数法测量不同硬度基底上气道成纤维细胞的生长曲线；MTT法检测基底硬度对气道成纤维细胞增殖活力的影响；划痕法检测基底硬度对气道成纤维细胞迁移的影响。研究发现，基底硬度对气道成纤维细胞的生物学行为有重要影响。首先，不同硬度基底上的气道成纤维细胞的粘附形态明显不同。基底硬度越高，气道成纤维细胞的铺展面积越大、细胞长短径比值越高；其次，免疫荧光检测结果显示，基底硬度对气道成纤维细胞黏着斑（vinculin）的形成有影响作用，基底硬度越高，黏着斑（vinculin）的大小越大；然后，不同硬度基底上的气道成纤维细胞的生长曲线显示，在细胞未长至融合状态时，基底硬度越高，气道成纤维细胞的生长速度越快；另外，MTT试验的结果表明，将气道成纤维细胞接种于不同硬度基底上24 h、48 h和72 h后，细胞的OD值均有极显著性差异（P<0.01），基底硬度越高，气道成纤维细胞的增殖活力越高；最后，划痕法测量细胞迁移的结果表明，将不同硬度基底上的成纤维细胞划痕处理12 h、24 h后，细胞的迁移率也具有极显著性差异（P<0.01），细胞外基底硬度越高，气道成纤维细胞的迁移能力越强。\n ②基底硬度对TGF-β1诱导的气道成纤维细胞向成肌纤维细胞分化的影响：用PR-PCR法测量基底硬度对分化的细胞中α-SMA和I型胶原（collagen I）mRNA表达的影响；酶联免疫吸附分析（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测基底硬度对分化过程中细胞分泌到胞外基质中 collagen I蛋白表达的影响；Western blot检测基底硬度对分化的细胞中α-SMA蛋白表达的影响。研究发现，基底硬度能促进气道成纤维细胞向成肌纤维细胞的分化。首先，PR-PCR的结果表明，和硬度为1 kPa基底上分化的细胞相比，硬度为10 kPa基底上分化的细胞的α-SMA和collagen I mRNA的表达量分别增加了0.14和0.32倍。而在硬度为50 kPa的基底上分化的细胞的α-SMA和collagen I mRNA的表达量分别增加了0.72（P<0.05）和0.64（P<0.05）倍；其次，ELISA的结果显示，和硬度为1 kPa的基底上分化的细胞相比，硬度为10 kPa和50 kPa的基底上分化的细胞分泌到细胞外基质中的co

关键词： 骨骼发育   成骨细胞   流体剪切力   细胞生物学  

摘要： 目的：通过研究流体剪切力（fluid shear stress，FSS）对成骨细胞(osteoblast，OB)的细胞骨架、Ca2+响应、细胞周期、分化标志物碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)的活性、与OB分化密切相关的基因(BMP2，Runx2，Osterix)及其蛋白表达的变化，以阐明FSS对OB细胞生物学功能的影响，对OB分化的作用机制及BMP2-Runx2-Osterix信号通路的关系，为力学刺激在骨质疏松的预防和治疗方面的作用提供实验依据。\n 方法：⑴使用胶原酶消化法、分段胶原酶法、组织块法三种方法分离OB，比较OB成活率、操作时间、操作复杂程度，选择分离OB的最优方法。⑵使用MGG、茜素红、ALP三种化学染色方法来鉴定分离的OB，用CCK-8法绘制生长曲线。⑶将OB分为四个组，使用12dyn/cm2的FSS刺激OB，分别为0min（对照组），30min刺激组，60min刺激组，120min刺激组。免疫荧光染色后观察FSS刺激OB不同时间后所引起的细胞骨架变化，Image J软件计算细胞分形维数，比较细胞内部复杂程度。⑷使用Ca2+试剂盒检测钙响应，ALP测试盒检测ALP活性，流式细胞术检测各刺激组细胞周期的变化。⑸Real-time PCR检测FSS刺激不同时间后OB BMP2、Runx2、Osx基因表达。⑹Western blot检测FSS刺激不同时间后OB BMP2、Runx2、Osx蛋白表达水平变化，使用quantity one进行光密度分析。\n 结果：①OB分离的三种方法均可获取OB，胶原酶消化法相对其它两种方法，具有细胞分离操作简单、时间短，细胞成活率高等优点。②MGG染色观察细胞充分伸展，呈梭形、三角形或不规则多边形，ALP染色观察胞膜及胞浆内颗粒染色呈棕色或咖啡色，茜素红染色观察到在细胞团处有橘红色钙化结节，鉴定分离细胞具备OB典型形态及标志性特征。③对照组OB呈梭型或多角形无序排列在载玻片上，12dyn/cm2的FSS作用OB30min后，细胞呈长梭形且与所受力方向呈大约45°夹角，被不同程度的拉伸延长。作用60min后，细胞被进一步拉伸其排列与受力方向趋于一致，细胞内微丝明显增厚且丰富。作用120min后，细胞内分散分布的深染小颗粒增多，细胞染色质固缩，表明细胞出现损伤。12dyn/cm2的FSS刺激OB后可引起细胞骨架形态、微丝丰富度及细胞复杂程度的变化，以60min最明显(P＜0.01)。④与对照组相比，在FSS刺激30min后Ca2+浓度明显升高，延续至60min为高峰平台期(P＜0.05)，120min后Ca2+响应回落；ALP活性升高，在刺激60min时升高最为明显(P＜0.05)；各组细胞周期无明显变化。⑤相对对照组各组BMP2、Runx2、Osterix基因表达均上调，以60min刺激组最明显(P＜0.01)。⑥相对对照组各组BMP2、Runx2、Osterix蛋白表达均上调，以60min刺激组最明显(P＜0.01）。\n 结论：⑴胶原酶消化法是一种方便、高效、细胞生物学特性稳定的原代OB分离培养方法。⑵12dyn/cm2的FSS刺激OB能改善OB的细胞生物学的功能，促进BMP2、Runx2、Osterix基因及其蛋白表达的上调，并以60min的时间刺激效果最明显。⑶12dyn/cm2的FSS可能通过改变OB骨架促进Ca2+浓度升高，进而激活与分化高度相关的BMP2-Runx2-Osterix信号通路，提高OB分化标志物ALP的活性，最终促进成骨，为骨疾病力学响应提供新思路。

关键词： 细胞生物学   教学改革   思考   探索  

摘要： 根据多年教学实践思考和探索细胞生物学教学改革的方法，从优化课程内容、改革教学模式、改进实验教学和改革考核方式等几方面入手，最大限度地调动学生的主观能动性，克服传统教学中的弊端，提高教学质量，提高人才培养的能力和水平，从而更好地满足当今社会发展对高素质创新型人才的需要。

关键词： 确炎舒松   骨髓间充质干细胞   生物学特性   细胞形态  

摘要： 目的:从SD雌性大鼠骨髓中分离培养骨髓间充质干细胞，并研究不同浓度确炎舒松对体外培养的骨髓间充质干细胞各种生物学特性的影响。\n 方法:\n 1.应用全骨髓贴壁法分离培养4周龄雌性SD大鼠骨髓间充质干细胞并鉴定。\n 2.以不同药物浓度(a:1×10-4mol/L，b:5×10-5mol/L，c:1×10-5mol/L，d:1×10-6mol/L，e:1×10-7mol/L，f:0 mol/L)干预培养，显微镜观察细胞形态变化。\n 3.以不同药物浓度(abcdef)分别加入接种有BMSCs的96孔板中培养，另设一组只加培养基及相应的DMSO，每种浓度设6个复孔，24小时及48小时测定3孔对应吸光度值，分析实验组与对照组增殖情况。\n 4.以不同浓度确炎舒松(abcdef)分别加入接种细胞后的六孔板中培养48小时， Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况，并记录数据。\n 5.将BMSCs以适当浓度接种于若干六孔板中，()A组加入地塞米松(10-8M/L)+抗坏血酸(50ug/ml)+β磷酸甘油(10mmol/L)，()B组加入确炎舒松（10-6mol/L）+抗坏血酸(50ug/ml)+β磷酸甘油(10mmol/L)，() C组确炎舒松(10-6mol/L)，() D组加入抗坏血酸50ug/ml+β磷酸甘油10mmol/L，()E组不加任何药物。\n 每三天换液同时加入各自药物培养21天，分别提取总RNA，应用RT-PCR扩增OCN及β-actin，并进行电泳，采取图像进行应用quantity one软件进行灰度分析。\n 6.将BMSCs以适当浓度接种于若干六孔板中，分为ABCDE（同上）五组，每三天换液同时加入各自药物培养21天后进行茜素红染色，观察染色结果并拍照。\n 结果:\n 1.通过流式表面标记物的鉴定及分化能力的检测表明此次试验成功培养出大鼠骨髓间充值干细胞。\n 2.与对照组相比，abcd组各组细胞数量减少，形态改变，而e组的数量及形态未见明显不同。\n 3.各实验组与对照组进行Dunnett-t检验，除E组（培养48小时）组外，余P值均＜0.01，有统计学意义。\n 4.流式细胞仪凋亡检测结果经统计学分析，Dunnett-t检验，除E组（10-7mol/L）外(P=1)，其余各组与对照组相比都有统计学意义。\n 5.电泳结果应用quantity one软件进行灰度分析（等高线定量法），结果与对照组（E组）相比， A、B组OCN表达变化与E组相比经统计学分析有统计学意义，而C、D组无统计学意义。A、B组BMP-2表达变化与对照组相比有统计学意义，C、D两组BMP-2变化与对照组相比无统计学意义。\n ***三孔茜素红染色阳性，DE两组茜素红染色为阴性。\n 结论:\n 1.本次实验通过全骨髓贴壁法成功分离培养出骨髓间充质干细胞。\n 2.本次实验10-6-10-4mol/L确炎舒松干预大鼠骨髓间充质干细胞后，其形态发生改变，对细胞生长具有抑制作用。\n 3.本次实验10-6-10-4mol/L确炎舒松组可引起大鼠骨髓间充质干细胞凋亡增加，提示我们局部注射时应控制浓度，减少副作用的产生。\n 4.本次试验10-6mol/L确炎舒松与地塞米松(10-8mol/L)一样，可促进大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化。

关键词： 细胞凋亡   FAM3B蛋白   基因表达   细胞生物学  

摘要： 本文对FAM3B基因沉默诱导p53依赖的细胞凋亡问题进行了研究。FAM3B是2002年发现的一种蛋白质，具有炎性因子类似的二级结构。先前的研究发现FAM3B在胰腺中高表达，因此又称为胰腺衍生因子(PANcreatic-DERived factor, PANDER)。有报道FAM3B通过与肝脏和内分泌胰腺的作用参与糖和脂的代谢。除胰腺和肝脏外，FAM3B还在其它多种组织细胞表达，提示其可能具有保守的生理功能。我们发现FAM3B在小鼠的多种组织以及人源和鼠源的诸多细胞系中表达，用RNA干扰(RNAi)的方式抑制FAM3B表达会诱发细胞凋亡;死亡受体Fas的膜结合形式增多;促凋亡蛋白Bax表达增多，抑凋亡蛋白Bcl-2表达减少;caspase-8、caspase-9和caspase-3的剪切增加;凋亡标志分子PARP的剪切及入核增加。上述结果表明FAM3B的沉默同时激活外源性和内源性凋亡通路。进一步的机制研究表明，用Fas的中和抗体或者通过RNAi抑制FADD表达均不能逆转FAM3B沉默诱发的细胞凋亡，而caspase的抑制剂可以部分逆转上述过程，说明死亡受体激活介导的外源性凋亡通路不参与FAM3B沉默诱发的细胞凋亡。进一步的研究发现将FAM3B沉默能显著促进p53表达。通过RNAi敲减p53几乎可以完全逆转FAM3B沉默诱导的Bax蛋白的上调，Bcl-2蛋白的下调，caspase-8、caspase-9和caspase-3的剪切以及细胞的凋亡，上述结果表明p53在FAM3B沉默诱发的细胞凋亡中起关键作用。此外，我们发现FAM3B的沉默会减少Mdm2蛋白的表达，促进p53的磷酸化。综上所述，我们的研究表明FAM3B的沉默一方面通过Mdm2蛋白的下调表达促进p53的积聚，另一方面促进p53的磷酸化，进而激活p53下游的凋亡相关通路引发细胞凋亡。本研究所发现的FAM3B表达抑制对细胞活力的影响以及FAM3B和Mdm2/p53之间的关系，为今后进一步探讨FAM3B的生理功能和病理意义提供了新的线索。