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关键词： 肌腱干细胞   富血小板血浆   肌腱病  

摘要： 肌腱病(Tendinopathy)的发病率极高,是骨科、运动医学、康复医学、职业病防治和老年医学的常见疾病。肌腱病严重影响人们的工作与生活,特别影响运动员竞技水平的发挥,常迫使优秀运动员提早退役。肌腱病的主要临床表现为肌腱或肌腱-骨胳连接处的疼痛、压痛甚至断裂、关节活动度受限。肌腱腱病最常见的发病部位依次为髌腱、跟腱、冈上肌腱肩袖、指深屈肌腱及肱骨外上髁伸肌总腱止点。足底筋膜炎、跟腱炎、髌腱炎、网球肘、高尔夫肘、冈上肌腱炎都是肌腱病。虽然肌腱病如此常见,其发病机制仍不清楚,常认为与肌腱韧带的急慢性损伤有关。 新近发现的肌腱干/祖细胞(Tendon stem/progenitor cells, TSPCs),也称为肌腱干细胞(tendon stem cells, TSCs)或肌腱源性干细胞(tendon-derived stem cells, TDSCs),经传代培养后可直接成为腱细胞,具有成体干细胞的自我复制和诱导成脂、成软骨、成骨分化的潜能,是腱细胞的前体细胞。研究表明,TSCs参与肌腱的急慢性损伤修复,是肌腱急慢性损伤修复过程中的关键效用细胞。不同剂量的反复循环机械应力刺激可影响肌腱干细胞力学生物学行为,进一步导致肌腱内环境的稳态和肌腱病的发生。应用体外循环机械牵伸系统模拟细胞在体反复机械应力状态,证明4%的机械拉伸能增加TSCs增殖、促进TSCs成为腱细胞,然而8%的机械拉伸可诱导TSCs分化为脂肪、软骨和骨细胞。可见,小的机械拉伸(有序和适度的体育锻炼)可促进TSCs增殖并成为腱细胞,有利于肌腱的强壮及肌腱的健康;而持续较大的机械负荷(如过度劳损)是有害的,它促使肌腱干细胞分化为非腱细胞,导致脂肪堆积、黏液形成和肌腱钙化,表现为肌腱病的典型病理变化。可见,TSCs可能是探索肌腱病的突破口。 因为对肌腱病还没有本质认识,临床治疗还往往是经验性的。治疗方法包括：局部制动休息、减负训练、按摩冷疗、离心型运动、口服非甾体类抗炎药物、局部注射富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)、细胞疗法、体外冲击波术、严重时可给予糖皮质激素等治疗。对于保守治疗无效、临床症状持续较重者,可给予外科手术治疗。在这些治疗方法中,PRP局部注射具有自体来源、制作简单、可制作成凝胶状、临床使用安全、方便、经济等优点,倍受医生和患者的欢迎。因此,临床应用PRP局部注射治疗“肌腱病”值得我们关注。 PRP是全血经过梯度离心分离获得的、含有超过基线水平的浓缩血小板血浆。一般而言,血小板含量至少要达到正常血的3-5倍才能称之为PRP。当PRP被激活后,其血小板释放出大量的生长因子,包括血小板衍生生长因子(PDGF),转化生长因子p(TGF-p),血管内皮细胞生长因子(VEGF),纤维生长因子(FGF),内皮细胞生长因子(EGF),血小板衍生内皮细胞生长因子(PDEGF),胰岛素样生长因子(IGF)等。这些生长因子对细胞的增殖和分化有着重要的作用,能够刺激损伤组织血管神经化、为细胞修复或再生损伤组织提供血供和营养。 体外研究已经发现PRP能促进TSCs增殖和成腱细胞形成,动物实验研究也已证实这一结果,一些临床试验也已经验证PRP能够促进肌腱和韧带急慢性损伤的愈合和有效治疗肌腱病。然而,PRP局部注射治疗肌腱和韧带的急慢性损伤和肌腱病并不总是令人满意,有一些临床试验却发现PRP对肌腱和韧带急慢性损伤的修复和肌腱病的治疗无益。因此,应用PRP治疗肌腱病仍需进一步基础与临床研究。 我们知道,临床应用的PRP是个体化准备的,没有明确的定义。因而,每一个人的PRP都可能不一样,并且在某些情况下,有些病人不能成功获得PRP。仔细分析PRP的制备过程及其组成成份,我们发现只有两类(共有4种)不同的PRP在临床使用：其中一类含白细胞(L-PRP和L-PRF),另一类不含白细胞(P-PRP、P-PRF)。有研究发现应用富含白细胞的PRP有较乏白细胞的PRP更为严重的急性炎症反应。因为TSCs是肌腱急慢性损伤修复的关键效用细胞,我们假设L-PRP不利于肌腱和韧带的愈合是因为L-PRP会抑制TSCs的正常活性。 本课题为证实上述假设共分为3章,即肌腱干细胞的分离、培养和鉴定;P-PRP和L-PRP的制备和鉴定;P-PRP和L-PRP对TSCs增殖、分化和细胞力学的影响。研究目的是为临床合理应用PRP局部注射治疗肌腱病提供理论依据。 第一章兔肌腱干细胞的分离、培养及鉴定 目的：分离和鉴定兔肌腱干细胞(TSCs)并评估其干细胞特性为下一步实验做准备。研究内容包括：(1)TSCs的分离及培养;(2)TSCs的克隆形成能力及增殖能力检测;(3)TSCs的流式细胞仪及免疫荧光鉴定;(4)TSCs的成脂、成软骨、成骨分化能力测定。 方法：从新西兰大白兔中获取TSCs已

关键词： 细胞生物学   教学改革  

摘要： 细胞生物学课程具有综合性、抽象性、复杂性和知识更新快的特点。细胞生物学课程组始终以现代化教育理念为指导,不断对细胞生物学课程教学的内容、方法、手段和教学模式等方面进行改革,以适应社会经济发展对复合型、创新性人才的需求。

关键词： 白血病   磁性纳米颗粒   四氧化三铁   聚乙烯亚胺   生物相容性   磁共振成像  

摘要： 一、聚乙烯亚胺包被的四氧化三铁磁性纳米颗粒对SHI-1细胞生物学特性的影响 目的初步探讨聚乙烯亚胺包被的四氧化三铁（PEI-Fe3O4）磁性纳米颗粒对白血病细胞株SHI-1的生物学特性的影响，探究磁共振细胞影像技术跟踪细胞生物学行为的可行性。 方法（1）、以人急性单核细胞白血病细胞株SHI-1为对象，用透射电镜观察PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒能否被细胞内吞；（2）、用电感耦合等离子发射光谱仪及普鲁士蓝染色观察细胞纳米颗粒载量的影响因素；（3）、用CCK-8法检测PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒对SHI-1细胞增殖的影响；用流式细胞术（FCM）检测PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒对细胞分化、凋亡的影响；以甲基纤维素半固体培养基培养法检测PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒对细胞集落形成能力的影响；（4）、以transwell跨膜实验检测PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒对SHI-1细胞侵袭能力的影响；以荧光实时定量PCR检测PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒对SHI-1细胞MMP-2、MMP-9、CD44、CXCR4、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达水平的影响；以未经PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒处理的SHI-1细胞作为对照组。 结果（1）、PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒能成功被SHI-1细胞内吞；（2）、细胞内磁性纳米颗粒载量与其起始浓度及与细胞共培养的时间呈正相关，随细胞分裂传代而减少。（3）、以5～100μg Fe/ml PEI-Fe3O4处理细胞，60～100μg Fe/ml组对细胞的抑制率高于5～50μg Fe/ml组，差异具有统计学意义（P <0.05）；30μg Fe/ml PEI-Fe3O4处理SHI-1后，和对照组相比，在TPA诱导分化前后的CD11b和CD14表达差异无统计学意义，（P>0.05）；以0、20、50μg Fe/ml PEI-Fe3O4处理24h后的SHI-1细胞的集落形成率，在各组间差异没有统计学意义（P>0.05）；（4）、以0～50μg Fe/ml PEI-Fe3O4处理SHI-1细胞24h，细胞凋亡率随PEI-Fe3O4浓度的增加而增高（P <0.05），实验组SHI-1细胞侵袭能力较对照组显著下降（P <0.05），测量标记细胞的MMP-2、MMP-9、CD44、CXCR4、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达水平发现TIMP-2表达下调，MMP-9表达上调。 结论（1）、PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒可高效率标记SHI-1细胞； （2）、在5～50μg Fe/ml范围内，对SHI-1细胞的增殖、集落形成能力、分化没有显著影响； （3）、25和50μg Fe/ml浓度的PEI-Fe3O4磁性纳米颗粒对SHI-1细胞MMP-2、CD44、CXCR4、TIMP-1mRNA表达水平无影响，但使TIMP-2表达下调，MMP-9表达上调。 二、聚乙烯亚胺包被的四氧化三铁磁性纳米颗粒标记的SHI-1细胞在裸鼠的MR成像 目的白血病细胞的髓外浸润常常成为白血病化疗或移植后复发的根源，若能及时发现白血病细胞的转移和浸润机理，对于白血病髓外浸润病灶的临床诊断和治疗都将有重大意义。本文旨在通过应用磁性纳米颗粒PEI-Fe3O4标记的SHI-1细胞在裸鼠皮下成瘤并以MR检测瘤体内SHI-1细胞的信号，为在活体内探究白血病，尤其是中枢神经系统白血病的转移和浸润的病理生理机制奠定基础。 方法对20只4至6周龄的Babl/c裸鼠以环磷酰胺腹腔注射，随机分为4组，每组5只裸鼠，将经0、25、50μg Fe/ml PEI-Fe3O4处理24h的SHI-1细胞1×107个分别注射于裸鼠的左前肢皮下，空白对照组在相同部位注射等体积的PBS，记录各组别瘤体生长速度，应用MR成像技术检测瘤体信号强度，R T-P C R检测皮下瘤体内SHI-1细胞的MLL/AF6基因表达。 结果经0、25、50μg Fe/ml PEI-Fe3O4处理后SHI-1细胞的皮下成瘤率为100%，未经标记的SHI-1组比较，25、50μg Fe/ml PEI-Fe3O4处理组的皮下瘤生长速度无明显差异，MR检测瘤体信号随PEI-Fe3O4浓度的增加而降低，随肿瘤的生长而增高（P<0.05）。各组别瘤体内均可检测到SHI-1细胞的MLL/AF6基因表达。 结论经PEI-Fe3O4标记的SHI-1细胞在体内具有增殖能力，可被MR成像技术检测。

摘要： Antigen recognition by CD4+ T cells leads to large-scale spatial and temporal molecular redistributions, forming the immunological synapse. We have previously shown that upon dissociation, T cells capture large membrane fragments from antigen-presenting cells directly from the immunological synapse. The mechanism and biological significance of this process, termed trogocytosis, is still unclear. In this thesis I examined the impact that trogocytosis has on the individual T cell after capturing molecules from the antigen presenting cell. I employed murine fibroblast cell lines expressing an I-Ek molecule loaded with a covalently attached antigenic peptide (moth cytochrome C 88-103) and with or without a GFP-tagged cytoplasmic tail as antigen presenting cells for T cells from a peptide-specific TCR transgenic mouse. Using a combination of high-resolution microscopy and flow cytometry, I showed that the trogocytosed material is retained on the surface of the T cell and is associated with sustained signaling after removal of the antigen presenting cells. The intercellular trogocytosis correlates with alterations in and is associated with sustained survival of the trogocytosis-positive (trog+) cells in vitro. I also showed that sustained signaling in trog+ T cells occurs at the trogocytosed spot and is initiated by the trogocytosed material. I conclude, that after trogocytosis, trog+ T cells present antigen and induce activation of antigen-specific naïve T cells. The findings from this thesis will help to elucidate the role of trogocytosis on CD4+ T cells.

关键词： 细胞生物学   研究性教学  

摘要： 细胞生物学是生命科学领域的四大基础学科之一。本文从研究性教学模式角度对细胞生物学课程的教学内容、教学方法、课程考核方法等的优化改革提出了几点思考。

关键词： 中国科技   陕西省   论坛   中国作物学会   植物分子生物学   细胞生物学   中国科协   植物生理  

摘要： 10月13日，由中国科协主办，中国植物生理与植物分子生物学学会承办，中国细胞生物学学会、中国植物学会、中国遗传学会、中国作物学会协办的第二十次中国科技论坛在陕西省西安市杨凌区召开。

关键词： 结直肠肿瘤   癌胚抗原   转染   生物学  

摘要： 目的观察癌胚抗原（CEA）过表达对结肠癌细胞生物学特性的影响。方法以重组CEACAM5一eGFP—cDNA慢病毒和荧光对照增强型绿色荧光蛋白（eGFP）慢病毒分别转染鼠结肠癌CT26细胞，构建稳定表达癌胚抗原的CT26CEA单克隆细胞株和仅表达荧光蛋白的CT26GFP单克隆细胞株，并以逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法进行鉴定，随后用噻唑蓝（MTr）比色法绘制体外生长曲线并计算体外细胞群体倍增时间，用噻唑蓝（MTT）法检测30、60、90、120min黏附率，用Transwell法检测16h迁移率和侵袭率，用流式细胞术检测细胞周期和增殖指数及凋亡指数。结果CT26CEA细胞株与CT26GFP细胞株比较，30、60、90、120rain黏附促进率分别为10．0％（P〉0．05）、13．8％（P〈0．01），14．7％（P〈0．01），4．0％（P〉0．05），16h迁移促进率为21．8％（P〈0．01），侵袭促进率为39．5％（P〈0．01），体外细胞群体倍增时间、细胞周期分布、增殖指数、凋亡指数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论癌胚抗原过表达可以促进结肠癌细胞黏附、迁移和侵袭，对细胞增殖和凋亡无显著影响。

关键词： 细胞生物学   综合实验   科研意识   教学改革  

摘要： 通过对《细胞生物学》综合实验的教学改革,提高生物科学专业学生的科研创新意识。方法:在生物科学专业增设生物技术综合实验课程,以单克隆抗体实验为中心通过综合性、设计性实验培养学生发现问题、思考问题和解决问题的能力,提高了学生对科研的认识。结果:通过教学改革使学生对科研过程有基本的了解,在标书撰写、实验操作、论文写作方面均有提高。实验教学改革提高了学生的动手能力,能培养具有初步科研能力的生物专业人才。

关键词： 医学细胞生物学   全英教学   留学生教育  

摘要： 留学生教育逐渐成为中国高等教育的重要部分。通过留学生医学细胞生物学全英教学实践,总结经验和体会,分析和探讨存在的问题,为更好地开展留学生教学提供意见和参考。

关键词： 胃肠肿瘤   预后   肿瘤分期   细胞生物学  

摘要： 目的探讨胃肠道间质瘤（GIST）的分级和分期方法。方法依据自建的新的方法用12项指标对613例GIST进行了分级和分期的研究。此12项指标包括2项肉眼播散指标（包括肝转移和腹膜播散），5项显微镜下播散指标（包括淋巴结转移，血管、脂肪、神经和黏膜浸润），以及5项组织形态学指标（包括核分裂象≥10／50HPF、肌层浸润、肿瘤性坏死、围绕血管呈簇状排列和明显异形）。结果在293例无上述指标的患者中，5年无瘤生存率（DFS）和5年总生存率（OS）分别为99．3％和100．0％，此组被划分为非恶性GIST，不需要进一步分级。在318例患者中发现至少1项至6项上述指标，另2例患者有7项上述指标。此320例患者术后5年DFS和5年OS分别为43．9％（中位6．7年）和59．7％（中位9．3年）。有无肉眼播散（P〈0．01）和有无镜下播散（P=0．001）的患者DFS显示差异有统计学意义。在无肉眼播散的患者中，DFS和0s与恶性指标数相关（均P〈0．01），但在有肉眼播散的患者中，DFS和0s与恶性指标数无关（分别为P=0．882和0．441）。结论恶性GIST可以依据无或有肉眼播散划分为临床Ⅰ期和Ⅱ期。临床Ⅰ期GIST可依据恶性指标数分级。临床Ⅱ期GIST预后差，预后与恶性指标数无关，不再分级。此种分级和分期与预后密切相关。