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关键词： 三氧化二砷   成体肝脏祖细胞   增殖   代谢  

摘要： [目的] 探讨三氧化二砷(AS2O3)对小鼠肝脏祖细胞(adult hepatic progenitor cells, AHPCs)增殖及代谢的影响。 [方法] 应用改良Seglen二步法结合机械离心获取小鼠肝脏祖细胞,原代培养12天的细胞用于实验。实验组细胞分别加入含2μ M和4μM的AS2O3培养液,不含AS2O3的培养液作为阴性对照组。采用RT-PCR技术检测三组细胞ki-67mRNA的变化,免疫荧光法观察三组细胞ki-67蛋白的表达,Western-blot技术检测三组细胞PCNA蛋白的表达,酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测三组细胞上清液中尿素浓度的变化。 [结果] (1)AHPC接种3～4天后活化增殖,7天后可形成明显的细胞克隆,10天后进入稳定增殖期,持续观察40天细胞未丢失增殖活性。AHPC接种后第1天强阳性表达Albumin,不表达AFP和CK19。接种后第5天,克隆内细胞开始表达AFP。接种35天左右,克隆内部分细胞强阳性表达CK-19,另有部分细胞强阳性表达Albumin,少数细胞仍强阳性表达AFP。 (2)①阴性对照组所含ki-67阳性细胞的比例普遍较高(25.1%±2.8%),而AS2O3(2μM)组(18.8%±1.0%)和AS2O3(4μM)组(11.8%±2.0%)的ki-67阳性细胞比例逐渐降低。在对照组与AS2O3(4μM)组间,以及AS2O3高低浓度组间可见明显统计学差异(P值分别为0.005,0.027),而AS2O3(2μM)组ki-67阳性细胞比例在数值上较对照组为低,但统计学差异并不明显(P=0.177).②ki-67mRNA的表达量在AS2O3处理组明显下降,并以AS2O3(4μM)组降低最为明显。对照组与AS2O3(2μ M)组间、对照组与AS2O3(4μM)组间以及AS2O3高低浓度组间均存在明显统计学差异(P值分别为0.005,<0.001,<0.001)。而三组间内参18s mRNA的表达并无明显改变,这一结果表明AS2O3可在转录水平调控ki-67的表达。③Western-blot法比较三组间PCNA蛋白的变化表明随着AS2O3浓度的增加,PCNA表达逐渐下降,并呈剂量-效应关系。④Urea浓度随着AS2O3浓度增加而逐渐下降。对照组与AS2O3(2μ M)组间(0.586±0.056nmol/u1VS0.506±0.058nmol/u1,p=0.022).对照组与AS203(4μM)组间(0.506±0.058nmol/ul VS0.410±0.045nmol/ul,p<0.001)以及AS2O3高低浓度组间0.506±0.058nm01/ul vs0.410±0.045nmol/u1,p=0.009)均存在明显统计学差异,表明AS2O3降低了细胞的代谢能力,并呈剂量-效应关系。 [结论] (1)成功的建立了原代小鼠肝脏祖细胞(AHPC)体外培养模型。 (2)体外培养的原代小鼠肝脏祖细胞(AHPC)具有较强的增殖能力及双向分化潜能。 (3)三氧化二砷(AS2O3)可以抑制原代小鼠肝脏祖细胞(AHPC)的增殖,并降低其代谢能力。

关键词： 医学   教材   细胞生物学   高等学校  

ISBN: (纸本)9787030381064

摘要： 本书从医学角度系统介绍了细胞生物学的基本理论、基本知识和基本技能。本书融合学科发展的最新成果，从细胞整体、显微、亚显微和分子等各级水平上阐述细胞结构、功能及生命活动规律，并结合医学各专业的特点，介绍细胞生命活动机制与医学的关系。本书共分为４部分：医学细胞生物学概论、细胞的结构与功能、细胞的增殖、分化、衰老与死亡、细胞工程。

关键词： 细胞生物学   优秀人才   学报   连续出版物   湖州   中华人民共和国  

摘要： 为了促进中国细胞生物学教学研究的发展,鼓励细胞生物学教学人才的储备及培养,湖州海创生物科技有限公司与《中国细胞生物学学报》联合推出"细胞生物学教学优秀人才评选活动"。本奖项主旨在于奖励

关键词： 动态生化信号   Y型微流控剪切装置   剪切流   传递函数   截止频率  

摘要： 细胞微环境中除了微流体流动引起的动态变化的剪应力外,还包含多种浓度随时间变化的生化因子,即动态生化信号,这些动态生物力学和生化信号对细胞功能和细胞行为起重要的调控作用。近年来,微流控芯片技术成为离体构建细胞微环境用以研究细胞与微环境相互作用的重要实验技术平台。但现有的大多数研究将细胞暴露于恒定浓度的生化环境中,仅能为细胞加载单一的生物力学或生化信号,并且忽略了微通道传输特性对动态生化信号传输的影响,导致无法实现对离体细胞生物力学或生化动态微环境的精确控制。 基于流体力学和微流控芯片技术,本文设计了一种流量法控制两种动态生化信号快速切换刺激的Y型微流控剪切装置。该装置能对离体培养的细胞精确加载剪应力和不同动态生化信号的组合切换刺激用于细胞生物学分析。将Y型微流控剪切装置的混合通道看作信号传输系统,考虑微通道内定常流和单向振荡流流速分布、Taylor-Aris弥散、分子横向扩散、通道尺寸等因素的影响,系统分析了混合微通道的传输特性和动态生化信号在混合微通道内的传输规律。 在定常流情况下,利用分离变量法求解混合微通道内动态生化信号传输的Taylor-Aris弥散控制方程,得到了混合微通道信号系统传递函数和截止频率的解析表达式。数值计算结果表明混合微通道信号系统具有低通滤波特性,其截止频率是由微通道高度H、流体动力粘度μ、分子扩散系数D、传输距离z和剪应力τw决定的函数。 在单向振荡流情况下,用数值仿真方法分析了振荡流频率、振荡流幅度、平均流量和传输距离对微通道内动态生化信号传输的影响。结果表明,振荡流频率接近于生化信号频率时,振荡流对生化信号传输有明显的非线性调制作用；增大振荡幅度将加剧生化信号的非线性失真程度。摄动分析结果表明,振荡流与动态生化信号的非线性相互作用是导致振荡流与定常流中生化信号传输产生差异的根本原因。 本文工作有助于理解动态生化信号在动态微环境中的传输规律,同时也为运用微流控芯片技术离体构建动态的细胞微环境时相关微通道传输系统的优化提供了一定的理论依据。

ISBN: (纸本)9787030360083

关键词： 多发性骨髓瘤   c-maf基因   siRNA   生物学特性  

摘要： 目的：验证c-maf基因在人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞株中的表达,采用RNA干扰技术沉默c-maf基因,观察其对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖、侵袭力的影响,探讨c-maf基因在多发性骨髓瘤中的作用。 方法：(1)脂质体法将c-maf siRNA转染多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226。(2)RT-PCR技术检测c-maf基因在多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226中的表达情况、验证转染效果。(3)MTT检测c-maf基因沉默后多发性骨髓瘤细胞增殖活性的改变。(4)Transwell小室实验检测c-maf基因沉默后多发性骨髓瘤细胞侵袭力的改变。 结果：(1)利用脂质体转染细胞后4h,在荧光显微镜下观察实验细胞。结果显示,明显看到细胞荧光着色,与背景反差明显。(2)RT-PCR检测结果显示c-maf siRNA实验组条带亮度较空白对照组和阴性对照组明显弱。半定量分析各组c-maf基因表达抑制率显示：c-maf siRNA实验组的表达抑制率为(60.38±7.36)%,与阴性对照组(44.01±6.31)%及空白对照组(39.66±6.95)%相比较,差距均有统计学意义(P<0.05)。(3)Transwell试验以粘附细胞数量评价细胞侵袭力的强弱,结果显示：c-maf siRNA组、NC siRNA组、空白对照组粘附于下室面的细胞数量分别为：35.66±5.09、57.01±10.22、60.33±9.63个。c-maf siRNA组与其余二组对比,差异有显著统计学意义(P<0.01)。(4)分别取转染后24、48、72、96、120小时的细胞行MTT试验,以OD值代表活细胞数量,结果显示c-maf siRNA组在培养24小时即出现试验效应,第48小时差异最明显,c-maf siRNA组OD值为：0.26±0.08,NC siRNA组OD值为：0.51±0.12,空白对照组OD值为：0.56±0.29,实验组和其他两组比较有统计学意义(P<0.05)。 结论：(1)c-maf基因在多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226中高表达,通过siRNA转染能有效沉默c-maf基因的表达。(2)c-maf siRNA可明显抑制多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖及侵袭力。(3)c-maf基因可能做为多发性骨髓瘤生物治疗的靶基因。

关键词： CIB1基因   慢病毒表达载体   RNAi   基因感染   病毒包装  

摘要： 目的：1.构建靶向钙整合素结合蛋白1（calcium-and integrin-binding protein,CIB1）的慢病毒表达载体pGV-siCIB1。2.研究RNA干扰下调CIB1表达对胶质母细胞瘤U87细胞的生长、凋亡、迁移的作用，并探讨其可能的作用机制。方法：1.针对CIB1基因序列（NM006384），利用RNA干扰序列的设计原则，设计针对CIB1的RNAi序列，合成单链DNAoligio，退火配对产生双链，通过其两端所含的酶切位点直接连入酶切后的RNAi慢病毒载体上；将连接产物转入制备好的细菌感受态细胞，PCR鉴定阳性重组子后，测序验证，测序结果经比对确认正确的克隆即为构建成功的CIB1基因RNA干扰慢病毒表达载体pGV-siCIB1。2.将慢病毒表达载体感染293T细胞，进行病毒的包装、纯化、浓缩及病毒滴度的测定。以EGFP为报告基因,分别以MOI值1,5,10,100感染细胞，观察感染后48h、72h、96h的感染效率，确定最佳感染时间以及MOI值。3.采用MTT法检测RNAi后CIB1对U87细胞生长的影响；流式细胞仪检测细胞周期和凋亡；划痕试验分别在0h、12h、24h、36h、48h观察RNAi后CIB1对U87细胞迁移的作用。qRT-PCR法检测细胞凋亡相关基因MRNA的表达。 结果：1.经测序验证，成功构建慢病毒表达载体pGV-siCIB1。成功包装病毒，纯化、浓缩及测定病毒的滴度。***-siCIB1感染U87具有较高的感染效率，当MOI=5时，感染效率达90%以上。***法证实RNAi后CIB1对人脑胶质瘤细胞U87的生长抑制效应具有时间依赖的关系，随时间延长，抑制作用逐渐增强，24-96h pGV-siCIB1感染组与NC感染组有统计学意义（P<0.05）；流式细胞术显示，RNAi后CIB1诱导了U87细胞的凋亡，NC感染组、pGV-siCIB1感染组凋亡率分别为0.22%、18.2%；细胞划痕结果显示，NC感染组及pGV-siCIB1感染组在0h、12h、24h、36h、48h的细胞迁移距离差异无统计学意义（P>0.05），而36h、48h NC感染组与pGV-siCIB1感染组的细胞迁移距离有统计学意义（P<0.05）。qRT-PCR检测细胞凋亡相关基因，结果表明pGV-siCIB1感染组与NC感染组相比Bcl-2mRNA的表达显著降低，而Bax、P53、P21、Caspase3mRNA的表达显著增高。二组凋亡相关基因的mRNA表达量差异有统计学意义（P<0.05）。结论：1.成功构建靶向钙整合素结合蛋白CIB1的慢病毒表达载体pGV-siCIB1。***下调CIB1表达抑制胶质母细胞瘤U87生长、诱导细胞凋亡、阻止细胞迁移。

关键词： 实验   细胞生物   教材   高等学校  

ISBN: (纸本)7030374974

摘要： 者多年教学实践并参考吸收了近年来国内院校细胞生物学实验教材的精华，由11位一线教师及专家编写而成。全书分为4个部分共24个实验，内容涵盖显微镜技术、细胞化学、细胞器的分离和鉴定、染色体标本制作、细胞培养和细胞融合、染色体畸变检测、细胞凋亡检测等基础性实验及综合设计性实验的选题、设计和实施等。实验内容设置合理，可操作性强，能够反映目前细胞生物学研究现状和发展趋势。在编写中对每个实验易出现的问题进行了提示，为培养学生的探究及思维能力，每个实验设置了思考问题。本书旨在培养学生基本的细胞生物学实验技能和综合创新能力。本书可作为地方高等师范院校生命科学专业的本科生教材及考研参考用书，也可作为相关专业的教  更多...

关键词： 课程生活化   生活化教学   学生实际   学生为中心   细胞生物学   课堂教学   实践能力   学生生活   新课程   中学生物  

摘要： 新课程提倡教师的教学活动在内容上要联系生活、社会以及学生实际，用生活化的内容充实课堂教学，为课堂增添生活气息和活力；在方法上要以学生为中心展开探究、实践活动，实现课程生活化、社会化、实用化；在课外作业和活动中要体现生物的实用性和广泛性，让生物更贴近学生生活。那么，在中学生物课堂中如何来实施生活化教学，促使学生将书本知识转化为实践能力，促使学生全面发展？笔者结合教学实际谈谈自己的看法。

关键词： Importazole   Fenretinide   多发性骨髓瘤   侧群细胞   NF-κB   细胞凋亡  

摘要： 【研究目的】 1.探讨入核受体抑制剂Importazole (IPZ)对多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)细胞生物学特性的影响及其可能的作用机制。 2.探讨维甲酸衍生物Fenretinide对MM侧群细胞生物学特性的影响及其可能的作用机制。 【研究方法】 一、入核受体抑制剂Importazole对多发性骨髓瘤细胞生物学特性的影响 1.通过免疫荧光技术观察骨髓瘤细胞系、原代细胞及正常人单个核细胞NF-κB、Importin β的表达和定位。 2.不同浓度IPZ处理骨髓瘤RPMI8226、NCI-H929、LP-1、SKO-007、KMS11、原代细胞、正常人单个核细胞，用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)比色法检测细胞的活力；流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡。Western blot(WB)法检测细胞核内NF-κB的蛋白表达。电泳迁移位移实验(electrophoretic mobility shiftassay,EMSA)检测核内NF-κB的DNA结合活性。RT-PCR检测NF-κB信号通路下游靶基因的变化。 3.干扰Importin β后WB检测干扰效率，免疫荧光观察NF-κB在细胞中的定位，流式细胞术检测细胞凋亡。 二、维甲酸衍生物Fenretinide对多发性骨髓瘤侧群细胞生物学特性的影响。 1．用不同浓度Fenretinide处理骨髓瘤RPMI8226、NCI-H929、LP-1、SKO-007、KMS11、原代细胞、正常人单个核细胞，用MTT法检测细胞的活力，流式细胞术检测细胞凋亡。 2．基于侧群(side population, SP)细胞对核染料(Hoechst33342)的排斥反应，借助流式细胞仪检测Fenretinide、硼替佐米、地塞米松（单用及合用）处理后NCI-H929SP细胞比例的变化。 3．分选NCI-H929SP和主群(main population, MP)细胞，将分选后的SP和MP细胞分别予Fenretinide、硼替佐米、地塞米松（单用及合用）处理，用MTT法检测细胞的活力，流式细胞术检测细胞周期和凋亡。 4．集落形成实验检测Fenretinide单用或与硼替佐米、地塞米松联合用药对SP细胞集落形成能力的影响。 5．检测Fenretinide对SP和MP细胞活性氧的影响。 【研究结果】 一、入核受体抑制剂Importazole对多发性骨髓瘤细胞的影响 1. Importin β在多发性骨髓瘤原代细胞中高表达。 2.干扰NCI-H929细胞Importin β表达后可抑制NF-κB入核并诱导细胞凋亡。 3. IPZ呈时间浓度依赖方式抑制骨髓瘤RPMI8226、NCI-H929、LP-1、SKO-007、KMS11细胞增殖及诱导凋亡。 4.8μM IPZ分别作用RPMI8226和NCI-H929细胞24h，可以诱导S期细胞分别由(53.55±0.94)％、(52.42±1.16)％减少至(45.19±1.62)％、(42.27±1.02)％；明显抑制NF-κB入核进而影响其与DNA的结合活性。同样浓度IPZ作用于CD138+骨髓瘤原代细胞2h可即可抑制NF-κB入核，16h可显著诱导细胞凋亡。但对正常人骨髓单个核细胞的诱导凋亡作用并不明显，与不加药组对比，无统计学差异。 5. IPZ可抑制骨髓瘤原代细胞NF-κB信号通路下游靶基因BCL-2、C-IAP1、XIAP的表达。 二、维甲酸衍生物Fenretinide对多发性骨髓瘤侧群细胞的影响。 ***呈浓度依赖方式抑制RPMI8226、 NCI-H929、LP-1、SKO-007、KMS11细胞的增殖。 ***单用或与硼替佐米、地塞米松合用可明显降低NCI-H929SP细胞的比例(p<0.05)。 3．经分选后的SP细胞周期主要处于G0/G1期，而MP细胞主要处于S期与G2期。 4．硼替佐米、地塞米松单用与合用对骨髓瘤SP细胞无明显杀伤作用。Fenretinide单用或与硼替佐米、地塞米松合用可诱导SP细胞凋亡。 ***细胞的集落形成能力强于MP细胞，硼替佐米和地塞米松对NCI-H929SP细胞的集落形成能力影响不大，而Fenretinide及含Fenretinide的联合用药均可显著降低NCI-H929的SP细胞的集落形成能力。 ***通过促使细胞产生活性氧诱导细胞凋亡。 【研究结论】 1．入核受体抑制剂IPZ通过抑制P65入核，阻断激活的NF