教学课程资源库 更多>>

关键词： 分子生物学   细胞生物学   肿瘤学  

ISBN: (纸本)9787516303290

摘要： 本书比较系统地介绍了人类肿瘤的一般生物学特点，同时兼顾介绍近年出现的一些新的概念和研究方向。主要内容包括肿瘤的病因学、发病学、肿瘤防治蓟相关知识等方面。编写思路是先介绍正常细胞活活动的机制，然后介绍肿瘤细胞的结构性改变以及由此产生的功能改变。

关键词： 椎间盘退变   慢病毒   骨髓核间充质干细胞   组织工程   干细胞移植  

摘要： 椎间盘退变(Intervertebral Disc Degeneration，IVDD)是导致腰背痛及脊柱退行性疾病的病理基础，是引起反复腰背痛(Low Back Pain，LBP)、椎间盘突出、椎管狭窄的主要原因，进而会引起突出髓核组织对椎管内神经产生压迫，导致一系列神经损伤症状，甚至瘫痪。腰背痛以及脊柱退行性相关疾病会带来许多直接和间接的社会和个人经济损失，已经成为当今社会备受关注普遍的健康问题。\n 椎间盘退变病理过程主要为髓核细胞减少和细胞功能丧失，细胞外基质减少，椎间盘生物力学功能丧失。虽然髓核细胞只占椎间盘比重的1％，但是却是Ⅱ型胶原和蛋白多糖等椎间盘基质主要生产者。当髓核细胞受到外界刺激，比如:异常应力，遗传因素，吸烟，营养障碍等因素影响，髓核细胞出现过度凋亡或者死亡，细胞数量减少，功能丧失，合成代谢与分解代谢失衡，细胞微环境遭到破坏，进而形成恶性循环，最终出现髓核含水量减少，髓核组织纤维化，导致椎间盘退变发生和发展。随着分子生物学，基因治疗技术，细胞移植技术和组织工程技术的快速发展，为从细胞水平和分子水平延缓或者逆转椎间盘退变提供了新的方法。其中干细胞移植修复椎间盘退变成为研究热点。\n 骨髓间充质干细胞来源于成人的骨髓基质，其扩增能力很强，可在体外传40代以上仍保持干细胞特性，并且已经成功建立了永生化的骨髓间充质干细胞系，成为了修复损伤和治疗退变性疾病的主要干细胞来源。目前骨髓间充质干细胞在骨科领域也受到了广泛关注，尤其在修复椎间盘退变方面也获得大量应用，通过基因修饰，复合组织工程支架，甚至单纯的自体骨髓间充质干细胞椎间盘内注射移植等，无论是从动物实验水平，还是人体试验水平，均获得了较好的预期结果，大量的实验数据证明骨髓间充质干细胞在修复椎间盘退变方面应用前景广泛。但是骨髓间充质干细胞并非完美无缺，其存在着细胞数量有限，并随着年龄增加数量和增值能力减少和降低，需要有创操作才能获得，患者可能需要实施多次手术，并且还存在着免疫排斥反应和传播病毒风险。\n Risbud等证明椎间盘组织中存在原始祖细胞，而Blanco进一步由退变椎间盘组织中分离出符合干细胞标准的髓核间充质干细胞(Nucleus Pulposus-Mesenchymal Stem Cell，NP-MSC)，此类细胞表达干细胞标志CD44、CD29、CD90、CD73、CD105、CD166、CD106，不表达造血干细胞标志物CD34、CD45、CD14、CD19，并且具有成骨、成软骨分化能力，无成脂分化能力，与骨髓间充质干细胞比较在向软骨诱导分化后在蛋白多糖、Ⅱ型胶原、COMP、SOX6、SOX9mRNA基因表达与骨髓间充质干细胞无明显差别，并推测通过激活内源性干细胞对于修复或者延缓椎间盘退变可能有所帮助。但是其细胞功能如何及是否具有修复椎间盘退变的作用，还没有相关文献报道。那么髓核间充质干细胞在正常髓核组织中是否存在，其是否也具有多向分化能力？正常与退变髓核间充质干细胞在细胞增殖和多向分化能力之间有无差别？而通常培养的髓核细胞表型如何，是否也表达干细胞标志物？髓核间充质干细胞在体外培养传代过程中其表型有无变化，细胞因子是否对其表型具有调节作用？能否通过构建永生化髓核间充质干细胞，为椎间盘组织工程提供大量、内源性的干细胞，从而为修复或者延缓椎间盘退变提供可能，成为本次研究的主要内容。\n 第一部分、正常人髓核间充质干细胞分离、培养与鉴定\n 目的：由正常髓核组织中分离、培养间质干细胞，并进行鉴定，了解正常椎间盘组织中是否也存在髓核间充质干细胞及其特性。\n 方法：取5例胸腰椎爆裂骨折患者术中切除的椎间盘组织中，采用机械酶消化法分离培养细胞，接种于含10％胎牛血清的低糖DMEM培养液中。同时由同一个体的椎弓根钉道中提取骨髓血，分离培养骨髓间质干细胞，接种于含10％胎牛血清的低糖DMEM培养液中，作为阳性对照。观察髓核间质干细胞体外传代过程中细胞形态变化;取第3代大多数为梭形的细胞，通过流式细胞术测定干细胞标志物:CD105、CD29、CD44，造血干细胞标志物:CD34、CD14、CD45和HLA-DR及成熟髓核细胞标志CD24表达情况;利用RT-PCR检测干细胞基因SOX2，Nanog的表达;通过体外诱导分化观察其成骨、成脂和成软骨能力。\n 结果：正常髓核组织中成功分离培养出梭形细胞，细胞形态观察原代细胞早期贴壁形态不均一，大多以梭形细胞为主，其中有部分多边形和三角形细胞，但是当细胞生长达到90％融合时，细胞形态发生改变，基本上都向纺锤梭形细胞转化。传代后，第3代细胞形态几乎全部转变为纺锤梭形，并呈现极性或者旋涡状生长。流式检测结果:干细胞相关标志CD105、CD29、CD44均为阳性，而CD34、CD14

关键词： 细胞生物学   科研创新   人才培养  

摘要： 人才培养是高校的根本任务,科研创新人才的培养是时代发展提出的新要求。通过近年来的教学实践,我们立足教学过程的多样化,注重学生科研思维和创新能力的培养,在以培养科研创新人才为导向的细胞生物学教学中进行了许多有益的改革和探索。本文对此进行综述。

关键词： 椎间盘退行性变   髓核间充质干细胞   营养   增殖   凋亡  

摘要： 目的研究大鼠髓核间充质干细胞（NPMSC）体外培养的最佳血清浓度并探讨椎间盘退变的机制。方法用胶原酶、胰酶序贯消化法从SD大鼠腰部和尾部的椎间盘组织中提取NPMSC，并进行体外培养，将其传代。（1）利用流式细胞仪对第3代传代的NPMSC细胞表型CD29、CD34、CD24、CD90、CD105进行鉴定；（2）利用普通PCR鉴定体外培养的NPMSC细胞基因Sox2、Nanog的表达；（3）在37℃、21%O2、5%CO2的细胞培养箱中用成骨、成软骨、成脂培养液诱导培养第3代传代NPMSC，2～4周以后，用染色剂对其进行染色，观察其成脂、成骨、成软骨能力。（4）在37℃、21%O2、5%CO2的细胞培养箱中用不同浓度（0%、5%、10%、20%、30%）的DMEM-F12血清培养液培养第3代传代的NPMSC，72小时以后，利用CCK-8法检测细胞的增殖，并采用RT-PCR检测细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9的mRNA表达，借助流式细胞仪对细胞进行细胞凋亡的检测。结果（1）大鼠NPMSC的成骨、成软骨能力强，成脂能力较差，且其细胞表面高度表达CD29、CD90、CD105，低度表达CD24、CD34，细胞基因Sox2、Nanog高度表达。（2）随着培养液血清浓度增加，OD值增大，NPMSC的凋亡率降低，细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9基因的mRNA表达增加。结论（1）大鼠NPMSC具有间充质干细胞特性；（2）细胞外营养影响大鼠NPMSC的增殖、分泌、凋亡。

关键词： 细胞生物学   海洋科学   教学方式  

摘要： 细胞生物学是海洋科学专业学生的必修课程之一。在教学过程中,如何让学生既能掌握基础理论知识,又能将学到理论知识应用于海洋科学研究,是上好该课程需要解决的关键问题。本文主要针对海洋科学专业细胞生物学的教学改革进行探讨。

关键词： Cell resealing technique   Disease model cells   Semi-intact cells   Single cell biology  

摘要： Semi-intact cells are cells whose plasma membrane is permeabilized with toxins by creating pores. Semi-intact cells allow for the exchange of the original cytosolic proteins with an exogenously-made cytosol prepared from cells of varying states, such as cells at different stages of the cell cycle, differentiation, or cells in a diseased state. Recently we found that the pores in semi-intact cells can be resealed by calcium ions. Here, we introduce a basic protocol for preparing a “disease-model cell” using the resealing technique of semi- intact cells, in which the cytosolic conditions of a diabetic liver was replicated, and demonstrate the disturbances in endocytosis and signal transduction in the diabetic liver-model cells. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

关键词： 肾细胞癌   长链非编码RNA   RCRF   转移   预后  

摘要： 研究背景和目的 肾细胞癌（renal cell carcinoma, RCC），又称肾癌，在所有成人恶性肿瘤中占3%左右，是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于膀胱癌。在泌尿系统恶性肿瘤中，肾癌致死率最高，5年生存率为69.4%。然而，由于缺乏适用于肾癌早期诊断的肿瘤标记物，有20%-30%的患者在诊断时已经发现远处转移，而且术前未发现转移的肾癌患者手术以后有20%-40%在随访时发现复发或远处转移。如果诊断时已经出现远处转移，5年生存率则会降低至不到10%。然而到目前为止，肾癌的转移机制仍不明确。因此，研究肾癌的转移机制，筛选能够预测肾癌复发转移的标记物显然具有重要意义。近年来，长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）逐渐成为研究的热点，已有多项研究显示lncRNA的异常调节与恶性肿瘤的发生、发展密切相关。因此，该研究的目的是找出可能与肾细胞癌复发转移相关的lncRNA，并通过一系列细胞功能实验证实其对肾癌细胞侵袭和转移的作用。 研究方法 1、采用lncRNA芯片技术，根据诊断时有无远处转移，将肾透明细胞癌患者分为两组。获取两组患者的肾癌原发灶组织，筛选出在两组中表达量有明显差异的lncRNAs； 2、采用实时定量PCR技术，对筛选出来有明显差异表达的lncRNAs进行肿瘤组织与癌旁正常肾脏组织对照大样本验证，并对大样本患者临床病理资料进行统计学分析，研究其与患者的临床指标及预后的关联； 3、采用小干扰RNA（siRNA）干扰肾癌细胞系ACHN中相关lncRNA，使其表达量降低，然后通过细胞增殖试验、细胞凋亡试验、划痕试验和Transwell试验研究该lncRNA对肾癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。 结果 1、在有远处转移组和无远处转移组的肾透明细胞癌组织中，筛选出差异表达lncRNAs300余个，其中一部分lncRNAs在有远处转移组表达上调，另一部分表达下调。根据差异倍数以及错误发现率false discovery rate(FDR)，最终选定RCRF进行下一步实验。 2、根据实时定量PCR实验，发现与癌旁正常组织相比，肾癌组织中RCRF的相对含量明显增多，（p<0.01）。另外，通过对80例肾癌组织及癌旁组织的检测以及分析临床病理资料，发现RCRF表达在高级别肾透明细胞癌、有淋巴转移或远处转移的肿瘤组织中表达量增多（p<0.01）。 3、siRNA干扰目标lncRNA后，ACHN细胞的增殖能力下降、凋亡数量增加、迁移及侵袭能力下降。 结论 1、RCRF在肾透明细胞癌肿瘤组织中明显上调，并且与肾癌病理级别和转移相关，提示其可能影响肾癌患者的预后。 2、siRNA干扰RCRF后，ACHN细胞的增殖能力下降、凋亡数量增加、迁移及侵袭能力下降，表明RCRF使肾癌细胞的生物学行为发生改变，更容易增殖、侵袭和迁移，而不易凋亡。

关键词： 替吉奥   三维适形放疗   胰腺癌  

摘要： 目的:探究替吉奥复方制剂联合三维适形放射疗法对胰腺癌细胞生物学的影响及安全性评价。方法:培养PANC-1人胰腺癌细胞,构建PANC-1胰腺癌裸鼠异位肿瘤模型并随机进行分组。观察替吉奥联合三维适形放疗对胰腺癌肿瘤细胞生长的抑制作用,记录荷瘤裸鼠的肿瘤体积以及生存期。同时观察联合治疗所产生的副作用。结果:相比于单独用药组和单独放疗组,联合组能够显著抑制肿瘤体积生长,延长荷瘤裸鼠的中位生存期。结论:替吉奥单独给药和单独三维适形放疗均能抑制肿瘤的生长,二者联合使用能够发挥协同作用,是一种潜在的高效的胰腺癌治疗手段。

关键词： EcoRI   异亮氨酸   异白氨酸   番木瓜   多年生草本果   A-1   DNA   拟南芥突变体   端粒酶活性   日出   细胞生物学   宿主植物   维管束鞘细胞  

摘要： 理论A整套试题总分:116分,时间:120 min,每个问题只有一个正确答案(每题2分)细胞生物学A1.内啡肽是由脑垂体和其他脑细胞分泌的天然镇痛剂。结合到脑细胞上的受体后,内啡肽可以缓解疼痛并产生愉快的感觉。

关键词： 伤口愈合   成纤维细胞   整合素连接激酶   QLT0267  

摘要： 目的观察不同浓度的QLT0267抑制整合素连接激酶(ILK)的活性对成纤维细胞(Fb)生物学特征的影响。方法收集整形手术后剩余的皮肤标本,采用机械法加酶消化法分离培养Fb,随机分为空白对照组、5 nM组、10 nM组、20 nM组、30 nM组、DMSO组,其中空白对照组常规培养不做任何处理,5 nM组、10 nM组、20 nM组、30 nM组按培养基中QLT0267浓度分别为5、10、20、30 nmol/L加入QLT0267溶液[二甲基亚酮(DMSO)为溶剂],DMSO组加入与30 nM组中QLT0267溶液同体积的DMSO,分组处理12、24、48、72 h后在倒置相差显微镜下观察细胞形态。CellTiter试剂盒检测分组处理24、48、72 h后各组Fb的增殖情况,并与空白对照组比较计算增殖抑制率;在48 h时间点,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况以及Western Blot法观察Fb表达磷酸化蛋白激酶B(pAKT)、总蛋白激酶B(tAKT)蛋白的变化。对数据进行LDS-t检验和重复测量设计方差分析检验。结果经浓度大于10 nmol/L的ILK特异性抑制剂作用下,Fb膨胀,细胞核固缩或破碎,并出现细胞凋亡,随QLT0267浓度的增高和刺激时间的延长,细胞形态的改变更加明显。CellTiter试剂盒检测结果显示10 nmol/L以上的QLT0267能明显抑制Fb的增殖,且随着QLT0267浓度的增高和刺激时间的延长,增殖抑制率也升高(F处理组=94.242,P<0.05;F时间=240.490,P<0.05;F处理与时间=11.551,P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示与对照组比较,10 nmol/L以上的ILK特异性抑制剂能诱导Fb凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。Western Blot结果显示在各组tAKT的表达组间差异无统计学意义(P>0.05)的前提下,不同浓度QLT0267组pAKT的表达比空白对照组低,并随着QLT0267浓度的上升而pAKT蛋白生成下降(P<0.05)。结论 10 nmol/L浓度以上ILK特异性抑制剂QLT0267能刺激Fb发生形态改变,抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。推测ILK可能通过影响Fb中pAKT的生成参与创面愈合过程的调控。