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关键词： Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶   生物学活动   肿瘤细胞   细胞增殖   细胞迁移   细胞凋亡   抑制作用  

摘要： 研究目的:　　研究Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(cGMP dependent protein kinaseⅡ，PKGⅡ)对包括人非小细胞肺癌细胞株A549、人肝癌细胞株HepG2、人肾癌细胞株OS-RC-2、人结肠癌细胞株SW480和人胶质瘤细胞株U251在内多种肿瘤细胞株的由表皮生长因子(Epidermal growth factor, EGF)启动的增殖、迁移和凋亡等生物学活动改变的抑制作用。　　研究方法:　　(1)以编码PKGⅡ cDNA的腺病毒Ad-PKGⅡ感染各肿瘤细胞株，使其高表达PKGⅡ，并以cGMP类似物8-pCPT-cGMP特异性激活PKGⅡ。　　(2)用CVTK方法检测细胞的增殖。　　(3)用Transwell检测细胞的迁移。　　(4)用TUNEL检测细胞的凋亡。　　(5)用Pull-down方法检测活性小G蛋白Rac1的水平。　　(6)用Western Blotting检测相关蛋白的表达和磷酸化水平。　　研究结果:　　(1) PKGⅡ抑制EGF诱导的肿瘤细胞的增殖，并抑制与增殖相关的PCNA的表达和ERK的磷酸化。　　(2) PKGⅡ抑制EGF诱导的肿瘤细胞的迁移，并抑制与迁移相关的小G蛋白Rac1的活化和MMP2和MMP7蛋白的表达。　　(3) PKGⅡ拮抗EGF的抗凋亡效应，并影响凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达，降低Bcl-2/Bax比值。　　(4) PKGⅡ阻断EGF对EGFR的活化。　　研究结论:　　研究结果显示，在五种肿瘤细胞株中，PKGⅡ通过阻断EGF对EGFR的活化，进而抑制EGF诱导的细胞增殖和迁移，并抑制EGF拮抗凋亡的效应，发挥抗癌作用。表明PKGⅡ具有广谱抗癌作用，是一潜在的抑癌因子。

关键词： 椎间盘   间质干细胞   细胞生物学特性  

摘要： [背景]腰背痛的发生大多与椎间盘退变疾病的发生有关,预防和治疗椎间盘退变的疾病有重大的意义。近来有学者发现髓核间质干细胞(NPMSC)存在于椎间盘中,这种干细胞对椎间盘微环境的适应性,对应用组织工程治疗椎间盘退变有重要意义,但椎间盘退变的过程并没有发生逆转或者明显抑制,NPMSC在椎间盘退变中所产生的作用机制还有待探索。炎症因子是促进椎间盘退变的因素之一本文通过将IL-1β作用于NPMSC以研究其生物学特性变化,为NPMSC的进一步体内试验应用提供依据。 [目的]研究炎症因子IL-1β对大鼠髓核间质干细胞细胞生物学特性的影响。 [方法]取3月龄雄性SD大鼠3只,取其脊柱腰段椎间盘髓核组织,用胶原酶,胰酶序贯消化法分离并培养细胞。采用流式细胞术检测细胞免疫表型CD24,CD34, CD45, CD90, CD105表达；利用RT-PCR检测干细胞多能基因SOX2, Nanog的表达。通过体外诱导分化培养观测髓核间质干细胞成脂、成骨、成软骨分化能力。设置IL-1β梯度作用浓度,使用CCK-8检测工L-1β作用于髓核间质干细胞效果并筛选其最佳作用浓度及时间。采用最佳作用浓度,设实验组与对照组,利用流式细胞术检测IL-1β作用于髓核间质干细胞后的凋亡率；荧光定量PCR检测IL-1β作用于髓核间质干细胞后SOX9,蛋白多糖,Ⅱ型胶原酶,caspase-3的基因表达变化。 [结果]我们体外分离培养出的细胞电子显微镜下观察为纺锤样长梭形；通过流式细胞仪检测所培养细胞表面免疫标志后发现：CD90、CD105表达阳性,CD45、CD34、CD24表达阴性；利用RT-PCR检测其可表达干细胞基因SOX2, Nanog;诱导分化培养后发现其具有成骨和成软骨分化能力,成脂分化能力较差。CCK-8检测结果：IL-1β可以抑制NP-MSC的增殖活性,与作用时间、作用浓度存在一定的依赖关系,并筛选出最佳作用时间为48H,最佳作用浓度为50ng/ml;流式细胞仪检测凋亡比率结果：实验组为(8.5±0.15)%高于对照组(2.1±0.12)%；实时荧光定量PCR结果显示；SOX9,蛋白多糖,Ⅱ型胶原的mRNA表达下调,caspase-3表达上调。 [结论]IL-1β具有抑制NP-MSC的增殖活性并诱导其凋亡的作用,是导致椎间盘自身干细胞无法发挥修复作用的原因之一。

关键词： 细胞生物学和医学遗传学   实验教学   学习兴趣   培养策略  

摘要： 本文从参观实验室、调整实验方案、理论联系实际、互相沟通等方面论述了培养学生对细胞生物学和医学遗传学课程学习兴趣的策略,以期提高实验教学质量和学生综合素质。

关键词： 细胞生物学   多媒体实验教学  

摘要： 本文根据笔者多年来《细胞生物学》课程的教学经验,再结合学生的实际情况,针对如何提高细胞生物学教学效果这一问题,提出采取理论与实验相结合;教学内容的精选与讲解的科普化相结合;传统课堂教学方式与现代教学手段相结合一系列教学措施,并通过实践取得了很好的效果。

关键词： DDR2   骨髓间充质干细胞   成骨分化  

摘要： 骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)是现阶段研究广泛的一种重要的成体干细胞。因其具有良好的生长、分化能力以及向多种细胞分化的潜能,成为研究骨再生工程中重要的种子细胞,它对骨组织缺损的修复有着良好的效果。但是BMSCs向成骨细胞分化并修复骨组织缺损是一个复杂的过程,是由许多细胞外因子共同作用产生的结果。近年来的研究证实DDR2(Discoidin Domain Receptor2)作为I型胶原的特异性受体,在成骨细胞的分化中发挥重要的调节作用。而对于其在BMSCs向成骨细胞的分化过程中所起到的作用还鲜有研究,对其作用机理尚不明确。本实验通过DDR2基因缺失小鼠BMSCs的分离、培养和鉴定,初步探索DDR2基因缺失对小鼠BMSCs成骨分化能力的影响,为进一步研究BMSCs的成骨分化能力奠定理论基础。研究内容与方法:***2基因缺失小鼠BMSCs细胞的分离、培养和鉴定。***2对于BMSCs细胞特异性分化特性的影响作用。***2基因缺失对于BMSCs增殖、凋亡、分化的调控作用。***2基因缺失对于BMSCs成骨能力的影响。***2基因缺失对BMSCs在动物体内骨组织修复能力的影响。我们采用了利用改良型全骨髓贴壁法分离培养DDR2基因缺失小鼠及野生型小鼠的BMSCs,观察对比两种细胞形态;流式细胞技术检测两种细胞表面标记分子的表达;MTT分析检测细胞生长周期;流式细胞技术检测细胞凋亡情况,将两种细胞进行成骨、成脂诱导后,real time-PCR检测两种BMSCs成骨诱导3,7,14天后,其成骨相关基因的表达量变化;以及对成骨分化相关蛋白的检测;包括ALP、茜素红染色及OCN、ALP蛋白定量检测。最后采用小鼠颅骨缺损的模型,将BMSCs与支架材料HA/TCP复合后植入骨缺损区,在成骨6周后进行MicroCT扫描及HE染色,观察DDR2基因缺失对小鼠成骨能力的影响研究结果与结论:1.成功分离培养出DDR2基因缺失小鼠的BMSCs,其生长状态与正常野生小鼠的BMSCs相同,外形均呈长梭形,可见细胞成旋涡状紧密排列生长,其表面标记物的表达符合间充质干细胞的特点,细胞具有体外诱导成骨与成脂分化的能力,证明培养的细胞是BMSCs。***2基因缺失后,对BMSCs的凋亡略有抑制作用,但并不影响其正常的生长与传代。3.体外对两种BMSCs进行成骨和成脂诱导分化后发现,DDR2基因缺失后,BMSCs的成骨分化能力明显减弱,对其成脂分化能力略有减弱。4.两种BMSC s经成骨诱导以后,发现DDR2基因缺失后BMSCs的碱性磷酸酶活性降低,OCN分泌减少,对其成骨相关基因的表达量有明显的抑制作用。5.体内实验证实了DDR2基因缺失的BMSCs的骨修复能力明显低于正常野生型小鼠的BMSCs。本研究结果证实DDR2基因缺失后,对于BMSCs细胞形态特征生长特性没有明显影响。但对其向成骨细胞分化有明显的抑制作用,可以降低细胞碱性磷酸酶的活性,减少OCN分泌,抑制其成骨相关基因的表达。体内实验也证实DDR2基因缺失后,BMSCs修复骨组织缺损的能力明显减弱。

关键词： 医学生   细胞生物学   教学效果  

摘要： 细胞生物学的绪论是医学生的第一堂专业课,值得重视,以讲故事的方式说历史,纵横联系讲述概念,联系临床知识增加学生兴趣,以提问来集中学生上课注意力,这些方式有助于提高教学效果。

关键词： 子宫内膜癌   凋亡   乳酸脱氢酶抑制剂   糖酵解  

摘要： 目的 子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年升高，严重威胁着女性的生命健康。流行病学统计显示子宫内膜癌高危人群多为肥胖，患有糖尿病，高血压等代谢异常疾病的妇女，而糖代谢与子宫内膜癌的关系也日益得到重视。大多数肿瘤细胞利用糖酵解代谢途径产生的ATP，作为其能量提供的主要方式。靶向针对糖酵解途径抑制肿瘤生长，日益成为治疗肿瘤的新策略。Galloflavin (GF)作为新一代乳酸脱氢酶抑制剂，目前还没有此药物干预子宫内膜癌的基础研究。因此，本研究通过分析GF对人子宫内膜癌细胞株的影响，探讨其作用的可能机制。 方法 MTT法观察终浓度为0μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L GF分别作用于ECC-1、Ishikawa子宫内膜癌细胞株72h后，检测其对细胞增殖的抑制作用。以乳酸脱氢酶试剂盒检测GF干预后乳酸脱氢酶的活性的变化；以乳酸定量试剂盒检测GF干预后乳酸生成量变化；以ATP定量试剂盒检测GF干预后ATP生成量的变化；以2-NBDG检测GF干预后葡萄糖摄取量的变化；以DCFH-DA检测GF干预后细胞内活性氧物质产生量(ROS)的变化；以流式细胞仪、AnnexinV/FITC标记法检测细胞凋亡；以蛋白印迹法分析GF对BCL-2、MCL-1,Cleaved Caspase3蛋白表达的影响。同时行Annexin V-PI染色、流式细胞仪检测草氨酸盐对其凋亡的影响。 结果 GF抑制Ishikawa，ECC-1细胞的增殖并且随GF浓度增加，增殖抑制增加，呈剂量依赖性。GF处理细胞后乳酸脱氢酶的活性显著下降，乳酸产生量下降，ATP产生量下降，葡萄糖摄取量下降。活性氧物质产生量增加，Annexin V-PI染色、流式细胞仪检测均表现细胞凋亡比例逐渐增高，证实了GF具有诱导细胞凋亡的作用；GF蛋白印迹检测表明GF可使Cleaved Caspase3表达升高, BCL-2和MCL-1表达下降,GF对人子宫内膜癌细胞株的增殖有显著的抑制作用。 结论 GF导致ATP的耗竭，伴随着细胞内氧化应激产物的增加导致线粒体内凋亡机制的启动，最终导致肿瘤细胞增殖受抑制。靶向针对乳酸脱氢酶治疗子宫内膜癌前景广阔。

关键词： 细胞生物学   教学能力   合作探究   激发兴趣   知识小结  

摘要： 细胞生物学是生命科学专业的基础学科,也是四大前沿学科之一。对于刚博士毕业新入职的教师而言,如何教好这门课程尤为重要。本文从教师自我教学能力的提升、学生学习主动性的培养、学生学习兴趣的激发及教学策略的改进四方面论述了新入职教师如何教好细胞生物学。

关键词： 细胞生物学 实验 职业大学 教材 医学遗传学  

ISBN: (纸本)9787030419835

摘要： 医学细胞生物学和遗传学的理论和技术是医学科学知识结构的重要组成部分。本教程涵盖了这两个学科常用实验方法中与基础和临床医学关系密切的内容。上篇对每个实验的目的、基本原理、操作流程和实验结果做了比较详细的介绍，而下篇则根据两个学科的进展和未来发展趋势，结合自身的教学和科研体验，分别归纳出两套可操作性较强，能够体现学科间交叉渗透特点的综合性实验。

关键词： 细胞趋化因子   肝癌细胞   增殖   侵袭  

摘要： 1．研究背景和目的 CXCL1又被称作GRO-α，属CXC趋化因子家族【1】，早期研究发现CXCL1在很多肿瘤的的发生、生长、发展、增殖、侵袭、迁移、血管新生、淋巴管新生、淋巴转移、转化等过程中发挥关键作用【2】。然而目前趋化因子CXCL-1与肝癌的发生发展间的关系报道甚少，本实验将更深入的研究目的基因CXCL-1对肝癌生长，增殖，迁移，侵袭及转移的影响和作用的机制，我们应用第三代慢病毒系统介导【3-5】的基因转染技术作用于肝癌细胞系MHCC97L（简称97L），阐明目的基因CXCL-1在肝癌增殖、侵袭、迁移，转移中的主要作用，讨论CXCL-1作为肝癌分子靶点的可行性，为肝癌患者早期的诊断、治疗及预后评价奠定理论的基础。 2．方法 利用前期实验室已经构建的慢病毒感染97L细胞，筛选出稳定表达目的基因的细胞，扩大培养，荧光定量PCR、蛋白免疫印迹等方法检测转染CXCL-1后，97L细胞中靶基因在转录和翻译两个层面的表达；利用细胞单克隆形成实验、MTT比色法、流式细技术检测细胞周期来研究CXCL-1对细胞体外生长增殖能力的影响；利用Transwell小板实验检测目的基因CXCL-1对肝癌细胞迁移能力和侵袭能力的影响。实验所得的数据用SPSS16.0软件包进行数据分析，用重复测量单因素方差分析对比转染前后肝癌细胞株荧光定量PCR、细胞功能试验（包括MTT、胞单克隆形成实验、流式细胞技术检测细胞周期）、Transwell迁移及侵袭实验是否具有显著性差异，P小于＜0．05为有统计学意义 3．结果 带目的基因的慢病毒载体转染低转移潜能的肝癌细胞株97L，并设立对照，实验分组后将其命名为CXCL-1/97L,GFP/97L,未经任何处理的细胞为97L。 MTT法观察稳定表达CXCL-1基因后体外细胞的增殖情况，细胞在4个时间点（24、48、72、96小时）增殖速度显著增强（P＜0.05）；细胞单克隆形成实验结果也显示CXCL-1/97L细胞的活性明显较其他两对照组强(P＜0.01)，细胞周期检测结果显示出CXCL-1/97L细胞中G1期细胞数量比例减少，G2期比例明显较其他两对照组增加(P＜O.05)，结果均说明过度表达的CXCL-1能显著增强肿瘤细胞体外生长能力。体外迁移侵袭小室实验检测稳定表达目的基因后细胞迁移和侵袭能力的改变， CXCL1/97L细胞的侵袭能力较对照组明显增加，差异具有统计学意义(P＜0.01)。CXCL1/97L细胞的迁移能力较对照组无明显差异（P＞0.05）。这些结果表明CXCL-1表达水平增加显著增强肝癌细胞侵袭能力，但对其迁移能力无影响。 4.结论 我们选择LV介导的转染系统，构建了稳定并高度表达靶基因CXCL-1的肝癌细胞系，后期在体外细胞功能的研究中，可以发现靶基因CXCL-1可能是肝癌生长、增殖、侵袭的促进基因。