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关键词： 亚硝酸钠   硫酸铵   肿瘤微环境   增殖   迁移   侵袭  

摘要： 随着农业化肥，工业防腐剂的广泛应用，自然界水体和土壤中氨氮，硝态氮，亚硝态氮含量逐年增加。亚硝酸盐是常见的亚硝态氮，硫酸铵是常用的化肥，近年来在环境中负荷不断加大。与此同时，流行病学研究显示，氨氮污染严重的地区癌的发病率和死亡率逐步增高，尤其是肺癌近年来最为严重。深入研究氨氮与肺癌的发生、发展关系有非常重要的意义。 目的：选择肺癌为研究对象，氨氮及亚硝酸盐对于肺癌细胞演变的生物学作用。在模拟的肿瘤微环境中研究氨氮及亚硝态氮对于肺癌细胞的侵袭作用所起的作用。为进一步了解亚硝酸盐和肺癌的关系补充依据。 方法：用小鼠成纤维细胞L929和小鼠肺癌细胞LLC细胞共培养，体外模拟肿瘤微环境，制作细胞模型。免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达；以亚硝酸钠代表亚硝态氮，以硫酸铵代表氨氮。体外细胞增殖指标采用MTT细胞增殖活性；PI染色流式细胞术分析细胞周期；Hoechst33258荧光染色计数细胞分裂指数；细胞迁移和侵袭能力判定采用划痕实验和Transwell侵袭实验，结合细胞爬片细胞形态变化判定上皮间质转化（epithelial-to-mesenchymal transition，EMT）的发生。免疫荧光法检测活性氧的含量。 结果：MTT结果显示：对LLC细胞，亚硝酸钠、硫酸铵、亚硝酸钠硫酸铵混合液有浓度依赖性增殖抑制作用（P<0.05），亚硝酸钠在0.8mg L-1-1.0mg L-1，细胞增殖有小幅增加；硫酸铵浓度在1.0mg L-1-1.8mg L-1，细胞增殖有小幅增加；亚硝酸钠和硫酸铵混合液对细胞增殖抑制作用明显比单纯亚硝酸钠组和硫酸铵组低（P<0.05）；对L929细胞，亚硝酸钠在0.8mg L-1-1.0mg L-1浓度范围内，硫酸铵在1.0mg L-1-1.8mg L-1范围内对细胞增殖有促进作用；对LLC或L929细胞的促增殖作用，相同剂量，相同时间条件下，硫酸铵作用强于亚硝酸钠（P<0.05）；亚硝酸钠或硫酸铵对L929细胞促增殖作用强于LLC（P<0.05）。将L929和LLC细胞共培养（L929-LLC）模拟肿瘤微环境，经免疫组化法检测到共培养体系中一些细胞的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达呈阳性，证实这些细胞已转化为肿瘤相关成纤维细胞（carcinoma-associatedfibroblasts，CAFs）。经MTT结果显示对L929-LLC细胞，亚硝酸钠在0.8mg L-1-1.0mgL-1，对细胞增殖有促进作用；硫酸铵浓度在1.0mg L-1-1.8mg L-1，48小时，对细胞增殖有促进作用，亚硝酸钠或硫酸铵对L929-LLC细胞促增殖作用强于单独培养的LLC和L929细胞（P<0.05）；亚硝酸钠和硫酸铵混合液浓度在0.1mg L-1-1.8mg L-1对细胞增殖有促进作用，其中浓度在1.8mg L-1时，对细胞增殖促进作用最显著（P<0.05）；1.8mg L-1亚硝酸钠硫酸铵混合溶液（1:1）对L929-LLC细胞促增殖作用强于单独用硫酸铵组，而硫酸铵组又强于单纯亚硝酸钠组（P<0.05）。亚硝酸钠、硫酸铵、亚硝酸钠硫酸铵混合液对细胞增殖无抑制作用。分别将0.8mg L-1浓度的亚硝酸钠、1.0mg L-1浓度硫酸铵、1.8mg L-1亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液加入L929-LLC中48小时，PI染色，流式细胞术分析发现：S期加G2期细胞所占比例分别为(9.13±1.54)%、(10.17±2.10)%、(16.32±1.13)%，与各自空白对照组相比，差异明显（P<0.05），其中，亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液处理的L929-LLC细胞S期加G2期细胞所占比例高于硫酸铵组，而硫酸铵组高于单纯亚硝酸钠组（P<0.05）；Hoechst33258荧光染色，显微镜下计数细胞分裂指数发现：细胞分裂指数分别为(13.41±4.17)%、(15.2±3.75)%、(18.78±4.91)%，与各自空白对照组相比，差异明显（P<0.05），其中，亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液处理的L929-LLC细胞分裂指数高于硫酸铵组，而硫酸铵组又高于单纯亚硝酸钠组（P<0.05）；倒置显微镜下发现:亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液处理L929-LLC细胞48小时，大批细胞呈细长的梭形，梭形细胞数量明显比单纯硫酸铵组多，单纯亚硝酸钠组梭形细胞数相对较少；划痕实验结果显示：亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液处理的L929-LLC细胞划痕愈合的相对距离高于硫酸铵组，而硫酸铵组又高于单纯亚硝酸钠组（P<0.05）；Transwell细胞侵袭实验显示：穿过基底膜的细胞数个数分别为90±2.94，114±3.43，132±3.96，与各自空白对照组相比，差异明显（P<0.05）。亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液处理的L929-LLC穿

关键词： 沈阳农业大学   分子生物学   细胞生物学   郭志   天柱山   英才  

摘要： 郭志富,男,1980年9月生,博士,副教授,硕士生导师。1998年9月—2002年7月本科就读于内蒙古民族大学农学院,2002年9月—2008年7月于四川农业大学小麦研究所攻读硕士和博士学位,2005年7月至今工作于沈阳农业大学生物科学技术学院生物技术教研室,2009年9月破格遴选为细胞生物学及生物化学与分子生物学学科硕士生导师。2010年7月—2011年1月受日元贷款人才培养计划资助于日本京都大学育种研究室进行合作研修。2013年入选辽宁省百千万人才工程万人层次人选。校级精品课《分子生物学》和《细胞生物学》主讲教师。

关键词： PI-103抑制剂   卵巢癌   细胞生物学特性   脂肪酸合酶  

摘要： [研究目的]　　PI-103是一种人工合成的小分子磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双抑制剂，通过研究PI-103对卵巢癌细胞增殖、侵袭等恶性表型的调控，以及PI-103抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路后对卵巢癌FASN表达水平的影响，探讨PI3K/Akt/mTOR信号通路与FASN之间的关系，为临床卵巢癌诊治以及选择性靶向药物应用提供新的实验研究依据。　　[研究方法]　　***法检测不同浓度的PI-103（0.125、0.25、0.5、1.0、2.0及4.0μmol/L）处理24h、48h、72h后卵巢癌细胞A2780的生长抑制情况，并根据公式计算出PI-103对细胞的抑制率，细胞生长抑制率=1-（实验组吸光度值-空白组吸光度值）/（对照组吸光度值-空白组吸光度值）。　　2.平板克隆形成实验检测A2780细胞PI-103（2.0μmol/L）处理后与对照组的克隆形成细胞增殖的情况，并根据公式计算细胞克隆形成率，平板克隆形成率=平板克隆数/种板细胞数。Transwell实验检测A2780细胞PI-103(2.0μmol/L)作用24h内与对照组的细胞侵袭情况，并计数侵袭的细胞。　　3.前期研究通过Western blotting方法检测实验室现有的A2780、SKOV3/DDP及SKOV3三种卵巢癌细胞中FASN的蛋白表达水平，筛选出FASN表达量最高的A2780卵巢癌细胞株进行药物干预后，再通过Western blotting方法检测比较A2780经PI-103处理前后FASN、p-Akt、p-rpS6、Akt、rpS6蛋白的表达水平，Image J软件检测蛋白条带灰度值，比较A2780细胞处理前后FASN、p-Akt、p-rpS6、Akt、rpS6蛋白的灰度值改变是否具有统计学意义，以了解PI-103对卵巢癌的影响以及FASN与PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制情况。　　[研究结果]　　***-103能够抑制A2780细胞的生长。细胞的生长抑制率随着PI-103浓度的(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L)增加而逐渐增加(P＜0.05)。同时，随着作用时间延长（24h-48h-72h），增殖抑制的作用也显著增加(P＜0.05);当PI-103以2.0μmol/L处理A2780细胞72h时，细胞的抑制率接近50％;PI-103以4.0μmol/L处理A2780细胞72h，抑制作用最明显（P＜0.05）。　　***-103能够显著抑制A2780细胞的增殖及侵袭能力。平板克隆形成实验结果显示实验组的克隆形成率为(8.33±1.01)％，明显低于对照组((15.33±0.83)％)，提示PI-103对A2780卵巢癌细胞增殖具有抑制作用，两组差异具有统计学意义。Transwell侵袭实验结果显示对照组穿过上室的平均细胞数分别为156.33±4.04个，而实验组穿过细胞数为58.67±6.51个，两组差异有统计学意义。　　***-103能够显著抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路及FASN蛋白的表达。Image J软件检测蛋白条带灰度值，A2780、SKOV3/DDP及SKOV3三种细胞中FASN表达量相对于内参灰度值，A2780的表达量最高，为(58.02±3.25)％，SKOV3/DDP(46.99±5.43)％，SKOV3(37.97±2.78)％。实验组目的条带蛋白灰度值分别为对照组的FASN(63.05±6.45)％、p-Akt(70.53±5.47)％、p-rpS6(71.25±8.56)％、rpS6(95.76±3.54)％、Akt(102±7.83)％、β-actin(98.26±6.02)％。结果表明加入PI-103后FASN、磷酸化的Akt和rpS6蛋白表达量明显下降，而非磷酸化的Akt和rpS6表达无明显差异。　　[结论]　　1.一定浓度的PI-103在体外实验中可以显著抑制卵巢癌A2780细胞的生长、增殖、侵袭的能力。　　***-103在卵巢癌A2780细胞中可有效抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关磷酸化蛋白质的表达(p-Akt、p-rpS6)，而非磷酸化状态的Akt、rpS6的表达无明显影响;同时显著抑制FASN的蛋白表达。　　***-103不仅对卵巢癌细胞PI3K/mTOR通路蛋白有抑制作用，同时对FASN调控的脂肪酸合成亦产生抑制作用。综合文献可知抑制FASN也可导致PI3K/mTOR通路的效应蛋白的抑制，但机制不甚明朗。本实验结果为深入了解FASN与PI3K/mTOR通路之间的关联提供了理论依据，也为临床上进一步研究卵巢癌的靶向治疗提供了实验依据。

摘要： Optical tweezers and laser scissors are invaluable tools to manipulate cells on the micro and nano scale level. By integrating laser technologies with imaging and biochemical techniques, robust systems can be created to study various biological and biochemical processes. The purpose of this thesis is to describe two different optical methods used to study two cell-based problems. In the first experiment, optical tweezers are used to examine the effects of viscosity on sperm motility and energetics using a 1064nm Nd:YVO 4 continuous laser. In the second experiment, laser scissors are used to study growth cone response from laser induced damage using a Vanguard Nd: YVO4 second harmonic generator (SHG) 532 nm picosecond green laser. The proceeding sections describe the optical systems for each experiment as well as the methods used. Results of both studies are presented and discussed in detail.

关键词： 医学细胞生物学   实验教学   教学改革  

摘要： 针对临床专业医学细胞生物学实验课教学改革提出了几点建议,并通过具体的实验课教学实践证明:教学改革后的教学模式能极大地提升学生学习的积极性,激发学生的科研潜能,是医学细胞生物学实验课教学改革的一次有益尝试。

关键词： 胶原Ⅰ型   胶原Ⅱ型   软骨细胞   生物材料   软骨生物材料   Ⅰ型胶原蛋白培养板   Ⅱ型胶原蛋白培养板   人软骨细胞   体外培养  

摘要： 背景:实验证明胶原蛋白底物具有刺激成软骨的作用,但关于不同类型胶原蛋白刺激成软骨作用的能力仍存在争议。目的:观察Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白对体外培养人软骨细胞生物学特性的影响。方法:将P3代人软骨细胞分别加入普通培养板、Ⅰ型胶原蛋白包被培养板、Ⅱ型胶原蛋白包被培养板继续培养。培养10 d内,MTT法绘制细胞生长曲线;培养28 d后,采用ELISA法、聚合酶链反应、二甲基亚甲基蓝比色等方法检测3种培养板中软骨细胞分泌Ⅰ胶原蛋白、Ⅱ型胶原蛋白及糖胺多糖的量。结果与结论:Ⅱ型胶原蛋白包被培养板中软骨细胞数量最多,增殖速度为Ⅰ型胶原蛋白包被培养板的2倍、普通培养板的5倍。Ⅱ型胶原蛋白包被培养板中软骨细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白最少,与普通培养板板检测结果差异有显著性意义(P<0.01),与Ⅰ型胶原蛋白包被培养板检测结果差异无显著性意义;Ⅱ型胶原蛋白包被培养板中软骨细胞分泌Ⅱ型胶原蛋白、糖胺多糖最多,与其他两种培养板检测结果差异有显著性意义(P<0.01)。表明胶原蛋白包被培养板培养软骨细胞优于普通培养板,其中Ⅱ型胶原蛋白包被培养板在培养软骨细胞时更能维持细胞形态,延长去分化现象出现的时间,更利于细胞再分化。

关键词： 干细胞   内皮细胞   缺氧   新生血管化   生理性   细胞凋亡   大鼠   骨髓来源内皮祖细胞  

摘要： 目的 本研究通过体外模拟缺氧微环境,旨在研究缺氧条件对骨髓来源内皮祖细胞(BM-EPCs)形态学、抗凋亡能力、体外血管形成能力等生物学功能的影响. 方法 1、无菌条件下分离6-8周龄(180-220g)雄性Wistar大鼠四肢长骨,PBSE冲洗骨髓腔至白色透亮,经密度梯度离心法获得大鼠骨髓来源单核细胞,接种在包被有大鼠玻连蛋白的10cm培养皿中,加入特定内皮细胞生长培养基-2。 2、随机分为常规培养组和缺氧培养组,常规培养组于常规(37℃、5%CO2)条件下培养7d；缺氧培养72h、48h、24h组分别于常规(37℃、5%CO2)条件下培养4d、5d、6d后,缺氧(1%O2+5%CO2+94%N2)条件下继续培养72h、48h、24h。 3、细胞形态观察、细胞表面标志物CD34+/CD133+双阳性标记检测、Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素-1共同染色,三种方法共同鉴定常规培养至第7天的BM-EPCs细胞。 4、分别观察常规培养组、缺氧72h组、缺氧48h组、缺氧24h组细胞形态学变化,并对以上各组细胞进行内皮分化功能检测(Matrigel Assay)-.抗凋亡检测(Annexin V/PI),比较各组细胞生物学功能变化差异,明确缺氧条件对BM-EPCs的功能影响。 结果 1、成功分离并获得各组培养至第7天的大鼠骨髓来源内皮祖细胞,BM-EPCs细胞吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素-1,双荧光染色细胞阳性率为(90%±4%),细胞表面标志物CD34+/CD133+双阳性率为(86%±2%)。 2、随着缺氧处理时间的延长,BM-EPCs早期凋亡率明显增加。与常规培养组(0.89±0.20)%相比,缺氧培养24h组早期凋亡率(1.33±0.07)%改变不明显(P>0.05),缺氧培养48h组(3.25±0.12)%、72h组(7.48±1.53)%,早期凋亡率明显增加(P<0.05)。 3、随着缺氧处理时间的延长,BM-EPCs体外血管形成能力变化明显。与常规培养组比较,缺氧培养24h组的体外血管形成能力增强(P<0.01),缺氧培养48h、72h组体外血管形成能力明显下降(P<0.01)；与缺氧培养24h组比较,缺氧培养48h、72h组体外血管形成能力明显下降(P<0.05)。 结论 缺氧预处理BM-EPCs24h, BM-EPCs早期凋亡率增加不明显,细胞体外血管形成能力明显增强。

关键词： 肾细胞癌   LATS1基因   去甲基化   生物学功能   Hippo-YAP信号通路  

摘要： 目的：探讨LATS1基因去甲基化对人肾癌细胞生物学功能及其Hippo-YAP信号通路的影响。　　方法：利用RT-PCR检测人透明细胞肾癌细胞系786-O和人胚肾细胞系HEK-293中Hippo-YAP信号通路大肿瘤抑制基因-1(Largetumor suppressor gene1，LATS1)mRNA和下游癌基因Yes-相关蛋白(Yes-associated protein，YAP) mRNA表达水平，用亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequence-PCR, BSP)对LATS1低表达细胞786-O进行甲基化分析，5-氮杂-2脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine，DAC)处理786-O和HEK-293后，用RT-PCR和Western Blot检测各组细胞LATS1和YAP的mRNA和蛋白表达水平，流式细胞术(Flow cytometry，FCM)检测各组细胞凋亡和周期，细胞增殖/毒性试剂（Cell counting kit-8，CCK-8）检测各组细胞增殖抑制情况。　　结果：786-O较HEK-293 LATS1 mRNA表达水平显著降低(P＜0.05)，YAP mRNA表达水平显著升高(P＜0.05)，BSP显示LATS1在人肾癌细胞系786-O中高度甲基化;DAC处理786-O后，LATS1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P＜0.05)，YAP mRNA和蛋白表达水平显著降低（P＜0.05），周期停滞在G1期（P＜0.05）、细胞增殖受到明显抑制（P＜0.05）、细胞凋亡显著增加（P＜0.05），而HEK-293组均无明显变化(P＞0.05)。　　结论：LATS1基因去甲基化后下调YAP基因表达，抑制786-O细胞增殖并诱导其凋亡。LATS1基因甲基化可能在肾癌发生中起重要作用。

关键词： 脂多糖   牙髓干细胞   p16INK4A   衰老   TNF-α   牙髓干细胞(DPSCs)   成骨分化   NF-κB  

摘要： 目的研究脂多糖(LPS)对牙髓干细胞(DPSCs)进行反复刺激后其衰老程度。方法分离、培养DPSCs后进行形态观察。甲苯胺蓝染色检测DPSCs成软骨分化,油红O染色检测DPSCs成脂肪分化,DPSCs成骨分化液,茜素红染色检测钙结节形成。LPS刺激0、1、3和6次,观察细胞形态,细胞计数、流式细胞仪检测LPS对DPSCs增殖的影响,检测β-gal的表达情况,检测LPS对DPSCs免疫荧光检测LPS对DPSCs细胞骨架的影响、ROS、γ-H2A.X、p16INK4A表达。运用Western blot测定TLR4、p16INK4A、cyclinD1、Rb、p-Rb、γ-H2A.X蛋白表达,RT-PCR测定p16INK4A、γ-H2A.X基因水平表达。结果DPSCs呈成纤维细胞样梭形外观,具有向成软骨分化、成脂肪、成骨分化的特征。LPS反复刺激后,细胞体积增大、β-gal染色加深、细胞增殖能力降低、G1/G0期细胞比例增加,随着LPS刺激数目增多,LPS衰老增强。在此过程中,ROS、TLR4表达增高,DNA损伤标志γ-H2A.X表达上调,p16INK4A信号通路被激活,抑制p16INK4A信号通路可以逆转LPS诱导的DPSCs衰老。结论我们的研究表明LPS反复刺激DPSCs,诱导DPSCs衰老,为DPSCs的自体移植提供了理论基础。目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对牙髓干细胞(DPSCs)成骨分化、增殖的影响及其机制的研究。方法分离、培养DPSCs后进行形态观察。甲苯胺蓝染色检测DPSCs成软骨分化,油红O染色检测DPSCs成脂肪分化。DPSCs成骨分化液中加入10 ng/ml TNF-α,分化3、5、7、14天,茜素红染色检测钙结节形成,ALP染色检测ALP活性,运用Western blot分析BMP2蛋白表达情况,RT-PCR测定BMP2、ALP、RUNX2、COL I等成骨标志物m RNA的表达情况。通过细胞计数和MTT法分析TNF-α对DPSCs增殖的影响。运用Western blot和免疫荧光检测NF-κB信号通路中p65、IκBα、p-p65和p-IκBα表达情况。结果DPSCs呈成纤维细胞样梭形外观,具有向成软骨分化、成脂肪分化的特征。TNF-α促进DPSCs钙结节形成、ALP活性高表达及BMP2、ALP、RUNX2、COL I成骨标志物的表达。在此过程中NF-κB信号通路p-p65、p-IκBα表达增高,p65入核,IκBα降解,加入NF-κB信号通路抑制剂PDTC后,TNF-α促进DPSCs成骨分化作用可以被有效逆转。细胞计数及MTT方法检测结果显示TNF-α不影响DPSCs的增殖。结论我们的研究表明TNF-α促进DPSCs成骨分化,并诱导DPSCs矿化相关标志物的表达,为DPSCs的自体移植提供了理论基础。

关键词： NOB1   前列腺癌   PC-3细胞   DU145细胞   慢病毒载体  

摘要： 一、研究目的： 前列腺癌是全球中老年的常见恶性肿瘤，占全球范围男性癌症发病率的第二位，病死率则位居全球肿瘤的第六位。据报道，在欧洲每年有超过30万的男性确诊为前列腺癌。在美国，男性好发的恶性肿瘤中，前列腺癌稳居第一位，病死率占男性癌症死亡率的第二位。我国前列腺癌的发病率和死亡率较低，但近年来前列腺癌的发病率明显上升，近年的一些研究报道提示，上海地区前列腺癌以7.7/10万的高发病率位居我国男性泌尿系肿瘤第一位。为此，前列腺癌已然成为当今人们密切关注的疾病，同时也成为泌尿外科研究领域的一大热点。 当今，去势治疗仍是治疗前列腺癌的标尺。无论手术去势还是药物去势均能达到大量杀死肿瘤细胞的效果，延缓前列腺癌的进展。但一项研究表明，进过治疗后18～24个月，几乎所有前列腺癌病人将由雄激素依赖型转变为高侵袭性的去势抵抗型前列腺癌（androgen-independent prostate cancer, AIPC）。而其中很大一部分患者是在进行二线激素治疗的过程中逐渐发展为高侵袭激素抵抗型前列腺癌的，对于该种病人，目前仍缺少有效可行的治疗方案。 NOB1蛋白（Nin one binding-1protein）是一种核糖体装配蛋白，亦可以称为鋅带蛋白，最早利用酵母双杂交的方法发现于酿酒酵母菌26S蛋白酶体中。NOB1在真核生物的溶酶体合成以及核糖体形成过程中发挥着重要的作用。人类的NOB1基因包含9个外显子和8个内含子，位于16号染色体长臂22.1位点上；它的cDNA长约1749bp，其开放阅读框（open reading frame, ORF）位于33nt～1271nt。NOB1蛋白由总分子量约为46KDa的412个氨基酸组成。其N端存在一个由100个氨基酸构成PIN（PiLT amino terminus）结构，C端的第208～296位氨基酸则形成一个锌带结构域（zinc ribbon domain）。两种结构域各司其职，他们分别在细胞内核糖体蛋白形成、分解以及基因转录过程中发挥不可小觑的作用。 NOB1蛋白在人类多种器官组织中均可见表达，但表达量各异，例如其在成人脾脏、肝和肺中含量最高，而在肾脏、前列腺、卵巢以及结肠中则表达较少。近年的一些研究提示，NOB1参与很多恶性肿瘤的发生发展，人为的敲除NOB1基因后能够阻碍一些肿瘤细胞的增殖生长，如肝细胞癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌肿瘤、甲状腺乳头状癌、人胶质瘤和非小细胞肺癌等，但有关NOB1对前列腺癌细胞，尤其对高侵袭性前列腺癌细胞（如PC-3和DU145）生长及相关调控机制的研究至今少之又少。鉴于慢病毒载体的种种优点，我们前期成功构建了靶向敲减NOB1基因的shRNA慢病毒载体。并通过该载体研究NOB1表达水平的变化对高侵袭性前列腺癌细胞生物学行为的影响，并为将来从NOB1靶向分子方向入手治疗前列腺癌奠定了结实的基础。 二、研究内容及结果： （一）前列腺癌组织的各细胞系中NOB1的表达情况 为研究NOB1基因在前列腺癌中的功能，我们将抗-NOB1的抗体注入前列腺癌组织和邻近正常组织中。与正常组织相比较，前列腺癌组织有着强烈的NOB1抗体的着色现象。q-PCR技术检测7对前列腺癌组织中NOB1的水平，结果显示，前列腺癌组织中NOB1的水平较正常组织有着显著的增高现象。之后，我们对前列腺癌的各细胞系进行了分析。DU145、PC-3和22RV1细胞系中NOB1的表达水平明显高于雄激素敏感型的LNCap细胞系，其中LNCap侵略性和恶性程度较其他三种细胞系低。这些结果提示我们，NOB1基因与前列腺癌细胞的发生发展存在一定的联系，为后续进一步研究NOB1对高侵袭性前列腺癌细胞（PC-3和DU145）的影响奠定基础。 （二）NOB1基因在高侵袭性前列腺癌细胞中的敲减效率 前期工作中，我们成功构建了靶向沉默NOB1基因的shRNA慢病毒，然后我们挑选上述NOB1表达水平相对高的PC-3和UD145细胞，用已经构建好的慢病毒对两种前列腺癌细胞进行感染。转染72小时后，我们通过绿色荧光蛋白（GFP）将慢病毒对两种细胞的感染效率形象的表达出来。另外，我们分别利用蛋白印记（western blot）和qPCR技术对NOB1基因的敲减效率进行蛋白水平和mRNA水平的分析，结果显示shRNA慢病毒载体明显下调了PC-3和DU145细胞中NOB1的表达。 （三）敲减NOB1基因对前列腺癌细胞PC-3和DU145的生长增殖、 克隆形成能力、细胞周期及细胞迁移能力的影响 在我们主要的实验部分，我们通过慢病毒载体下调NOB1基因，来研究NOB1基因对高侵袭性前列腺癌肿瘤细胞生物学方面的影响。首先我们选择PC-3和DU145前列腺癌细胞株，对经Lv-sh