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关键词： 剪切应力   内皮祖细胞   细胞黏附   再内皮化  

摘要： 目的研究流体剪切应力处理对晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)体外及体内生物学功能的影响。方法密度梯度离心法分离大鼠骨髓单核细胞,应用EGM-2MV进行体外培养。以3~4代的EPCs,即晚期EPCs为靶细胞,对其施以1.2 Pa剪切应力处理。采用EdU标记技术、黏附能力测定实验、改良的Boyden小室、Annexin V/PI、β-半乳糖苷酶检测法、Matrigel法、荧光定量RT-PCR等方法分别检测剪切应力对晚期EPCs增殖、黏附、迁移、凋亡、衰老、体外成血管及VEGF mRNA表达等生物学功能的影响。应用大鼠颈动脉损伤模型及细胞原位移植等实验手段检测剪切应力预处理对晚期EPCs修复受损内皮的影响。结果 1.2 Pa剪切应力处理可不同程度提高晚期EPCs的增殖、黏附、迁移及成血管能力(P<0.01),上调VEGF的基因表达,抑制晚期EPCs的衰老及凋亡(P<0.01);移植经剪切应力预处理的晚期EPCs可加速损伤内皮的修复,减缓内膜的增生。结论流体剪切应力可改善晚期EPCs的功能活性,提高晚期EPCs修复损伤血管内皮的能力,这为EPCs的临床应用及剪切应力介导的细胞疗法提供了实验依据。

关键词： 妊娠免疫   树突状细胞   同种淋巴细胞刺激反应   白细胞介素-12   白细胞介素-10  

摘要： 目的通过研究妊娠小鼠子宫蜕膜DC生物学特征的改变，探讨妊娠免疫抑制机制。方法无菌分离妊娠第10天Balb／c小鼠子宫蜕膜组织的单个核细胞、rmGM—CSF、rmIL4诱导分化为DC，未妊娠小鼠的子宫内膜组织作为对照。流式细胞仪检测DC表面标志，MTT法检测其同种异基因淋巴细胞刺激能力，ELISA法测定细胞因子的分泌水平。结果与对照组相比，妊娠小鼠子宫蜕膜组织CD11b^＋树突状细胞百分率降低，CD8a^＋DC百分率升高（t=3．12，t=2．54，P均〈0．01），同种细胞的刺激能力明显降低，刺激细胞：反应细胞为1：10、1：20、1：50和1：100的P值均小于0．01（t值分别为3．36、2．53、2．42和2．12）。妊娠小鼠子宫蜕膜DC产生较高水平的IL-10和较低水平的IL-12（t=2．84，t=2．46，P均〈0．01）。结论妊娠小鼠子宫蜕膜DC具有不同于正常小鼠子宫内膜树突状细胞的生物学特征，这可能是妊娠免疫抑制机制之一。

关键词： 瑞典皇家科学院   感触   见闻   英国皇家学会   细胞生物学   中国科学院   党的领导   出国旅游  

摘要： 1979年冬我有幸参加中国科学院细胞生物学考察小组，和姚鑫、陈瑞明、王亚辉共四人，作为英国皇家学会和瑞典皇家科学院的客人赴英、瑞两国考察。转眼28年过去了，我们国家在党的领导下，真正发生了翻天覆地的伟大变化。许许多多的事是当年做梦也想象不到的，例如如今不仅普通老百姓能够出国旅游，

关键词： 上海   肿瘤   抑制剂   多肽类   治疗   细胞生物学   科学中心   生物化学  

摘要： 中科院上海生命科学院生物化学与细胞生物学所／国家蛋白质科学中心·上海（筹）周兆才、张雷、季红斌研究组通过对胃癌病人样本的分析发现，VGLL4在胃癌组织中呈现明显下调趋势，且与肿瘤的发展及恶化程度明显负相关。进一步研究显示，VGLL4通过位于它C端的TDU结构域和YAP竞争性结合TEAD4，从而抑制YAP的活性。

关键词： 前列腺肿瘤   PC-3M-2B4   LASS2   TMSG-1   siRNA  

摘要： 目的探讨LASS2/TMSG-1基因沉默对PC-3M-2B4细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法将实验分为3组:空白对照组(仅转染PBS的PC-3M-2B4细胞)、无关阴性对照siRNA组及LASS2/TMSG-1 siRNA转染组。首先针对LASS2/TMSG-1基因,设计并合成siRNA;在脂质体介导下瞬时转染人前列腺癌PC-3M-2B4细胞24 h后分别采用Western blot和RT-PCR技术检测细胞内LASS2/TMSG-1蛋白及ATP6L mRNA表达水平;使用BCECF AM H+敏感荧光探针检测转染24、36、48、96 h后3组细胞的细胞内H+浓度;用MTT法检测细胞增殖;划痕修复实验和Transwell体外侵袭实验分别检测PC-3M-2B4细胞的迁移和侵袭能力。结果转染LASS2/TMSG-1 siRNA 24 h后,LASS2/TMSG-1 siRNA组LASS2/TMSG-1蛋白表达与对照组相比下降65%,ATP6L mRNA表达水平与对照组比较提高75%。通过BCECF AM荧光探针检测LASS2/TMSG-1 siRNA转染组细胞内H+浓度明显下降,且与空白对照组及无关阴性对照siRNA组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测显示,PC-3M-2B4细胞在转染24、48 h后,3组细胞生长速度无明显差异(P>0.05);转染72 h后LASS2/TMSG-1 siRNA转染组细胞生长速度明显升高,与空白对照组、无关阴性对照siRNA组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。划痕修复试验和Transwell体外侵袭实验显示,转染LASS2/TMSG-1 siRNA 24 h后,与空白对照组及无关阴性对照siRNA组相比,能显著促进细胞迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论体外合成的siRNA能有效沉默LASS2/TMSG-1基因表达,同时上调V-ATPase质子泵中关键性亚基—ATP6L mRNA的表达水平,且基因沉默后其细胞内H+浓度下降,提示LASS2/TMSG-1基因可能与ATP6L相互作用、共同参与对细胞内pH值的影响,导致肿瘤细胞内外微环境的改变并影响肿瘤细胞的生物学行为,如增殖、迁移及侵袭能力。

关键词： 脂肪组织来源间充质干细胞(ADSCs)   血管周膜细胞   免疫表型   肥胖因子   肥胖  

摘要： 脂肪组织来源间充质干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)因储量丰富、获取简便、扩增迅速、可被诱导多向分化、免疫原性低等诸多优点受到广泛关注,为多种疾病的治疗提供了新思路。肥胖及其相关疾病的发生率日益上升,严重影响人类的生存质量。ADSCs在肥胖的发生和发展过程中起着不可忽视的作用。该文着重对近十年ADSCs的生物学特性研究进展及其在肥胖发生与发展中的作用进行综述,为其早日应用于临床实践提供参考。

关键词： 急性冠脉综合征   乙醛脱氢酶   机制   分子细胞生物学   ALDH2   遗传相关性   应用   动脉粥样硬化  

摘要： 急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）是目前威胁人们生命的主要杀手。筛查ACS的易感基因并开展功能学研究，对于早期识别ACS高危人群、促进个体化防治以及寻找新的干预靶点均具有重要临床意义。本项目围绕乙醛脱氢酶2（aldehyde dehydrogenase 2， ALDH2）及其功能性突变位点--rs671（东亚人群黄种人突变率30%～50%，而白种人罕见突变），结合临床遗传流行病学、分子细胞生物学、动脉粥样硬化小鼠等研究策略，系统地揭示了ALDH2基因rs671突变与ACS的遗传相关性、在ACS发生发展中的作用及其机制，取得了一系列具有国际影响力的研究成果，促进了ACS高危人群的早期识别，推动了ACS的临床防治。

关键词： 脐带间充质干细胞   生物学特性   冻存  

摘要： 目的比较冻存对脐带间充质干细胞生物学特性的影响,为其更广泛的应用提供基础。方法实验于2009年至2010年在南昌大学第二附属医院分子医学实验室、血液病研究所完成。(1)实验材料:剖宫产胎儿脐带取自自愿捐献者,实验经医学伦理委员会批准。(2)采用胶原酶消化法从脐带中分离培养间充质干细胞。(3)将传至第3代的细胞冻存半年后复苏。(4)通过显微镜观察细胞形态,通过流式细胞仪检测细胞的表面标志,体外诱导分化为软骨及脂肪细胞检测其多向分化能力,比较复苏前后上述指标的差异。结果脐带经胶原酶消化法所获得的细胞培养至第3代细胞呈长梭形,排列有明显方向性,细胞排列成网状、辐射状,冻存复苏后期形态学无明显改变。培养至第3代的细胞高表达CD29、CD54、CD166,不表达CD13、CD34、CD45、CD31、HLA-DR,冻存复苏后的细胞表达与未冻存的细胞无统计学差异。MSC在体外分别向脂肪细胞及软骨细胞诱导分化,以油红O染色后可见染为红色的阳性细胞为脂肪细胞,经阿新兰染色后可见为蓝色的阳性细胞为软骨细胞,冻存复苏后的脐带间充质干细胞细胞也可向脂肪及软骨细胞分化。结论脐带作为一种新的MSC来源,可成为脐血和骨髓MSC的替代来源,并且冻存对MSC的生物学特性无明显改变,使其能更广泛地用于科研和临床前试验。

关键词： HNF4α基因   肝星状细胞  

摘要： 目的:通过干扰RNA技术静息HNF4α基因表达以了解其对肝星状细胞生物学表型的影响。方法:设计合成一对能稳定表达针对HNF4αmRNA起始编码区寡核苷酸,其两端带有限制性酶切位点,表达后可形成发夹结构,然后将这一双链寡核苷酸与重组腺相关病毒载体(rAAV)连接,构建重组体rAAV-siRNA。将重组体rAAV-siRNA加入培养增殖良好的HSC细胞中孵育,然后分别检测基因和蛋白水平HNF4α的表达,并测定其上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物Vimentin的变化;同时观察HSC的表型变化。结果:重组体rAAV-siRNA实验组HSCHNF4α表达明显下调,Vimentin表达增加,E-cadherin减少,细胞表型成梭型改变。结论:HNF4α基因的下调可导致HSC向间质细胞发展,说明HNF4α在肝纤维化复杂的EMT基因调控网络中起重要的作用。

关键词： 精原干细胞   起源   表面标记   分离   纯化   移植   体外培养  

摘要： 雄性生殖干细胞,即精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs),能够自我更新,在体外一定条件下可以分化为精子,在精子发生过程中具有重要作用。SSCs是生殖细胞中唯一的干细胞,能够将遗传信息传递给下一代。文章就SSCs的起源、表面标记、分离、纯化和体外培养展开论述,并探讨了SSCs在人类医学上的应用前景和面临的问题。