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关键词： 肺腺癌   人着丝粒蛋白Ⅰ   上皮-间质转化   PI3K/AKT/mTOR信号通路  

摘要： 目的探讨人着丝粒蛋白Ⅰ(CENPⅠ)在肺腺癌中的表达及其对肺腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡和上皮-间质转化(EMT)等生物学功能的影响,并研究相关作用机制。方法用Western blotting和实时定量PCR检测4种肺腺癌细胞及人正常肺泡上皮细胞中CENPⅠ的表达水平。用siRNA技术敲低H1650细胞中CENPⅠ的表达,检测转染效率。用CCK-8实验、流式细胞术、Transwell实验检测敲低CENPⅠ对H1650细胞周期、增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。用Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Ki-67、cyclin D1、Bcl-2、PI3K、AKT、mTOR、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达水平。结果CENPⅠ在肺腺癌细胞中高表达。敲低CENPⅠ后,H1650细胞增殖能力下降,凋亡细胞数增加,细胞侵袭及迁移能力下降(P<0.01);与NC组相比,E-cadherin表达上调,N-cadherin、vinmentin、Ki-67、cyclin D1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达下调(P<0.05);加入通路激活剂IGF-1后,与si-CENPⅠ组相比,si-CENPⅠ+IGF-1组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达上调(P<0.05)。结论CENPⅠ在肺腺癌中高表达,可促进肺腺癌H1650细胞增殖、侵袭、迁移及EMT过程,抑制凋亡,其机制可能与PI3K/AKT/mTOR信号通路激活有关。

关键词： 牙周炎   干细胞   牙周膜干细胞   外泌体   细胞增殖   成骨分化   组织工程  

摘要： 背景:近年来牙周膜干细胞外泌体在牙周组织再生工程中的应用得到了广泛研究,但其对于炎症环境来源牙周膜干细胞的影响尚不清楚。目的:探讨健康和炎症环境来源牙周膜干细胞所分泌的外泌体对炎症环境来源牙周膜干细胞增殖及分化能力的影响。方法:采用酶消化法分离培养健康牙周组织与牙周炎组织来源的人牙周膜干细胞,采用超速离心法提取两种来源人牙周膜干细胞的外泌体。选取生长状态良好的第3代炎症组织来源牙周膜干细胞,分3组培养:空白组常规培养,健康外泌体组加入健康组织来源外周膜干细胞分泌的外泌体,炎症外泌体组加入炎症组织来源人牙周膜干细胞分泌的外泌体,检测细胞增殖与克隆形成;在成骨诱导分化条件下,检测细胞碱性磷酸酶表达与矿化结节形成、成骨相关基因mRNA与蛋白的表达。结果与结论:①CCK-8检测与克隆形成实验显示,与空白组相比,两种来源外泌体均可促进炎症组织来源牙周膜干细胞的增殖与细胞集落形成(P<0.05),并且健康外泌体组的作用强于炎症外泌体组(P<0.05);②碱性磷酸酶与茜素红染色显示,与空白组相比,两种来源外泌体均可促进炎症组织来源牙周膜干细胞碱性磷酸酶的表达与矿化结节形成,并且健康外泌体组的促进作用强于炎症外泌体组;RT-PCR与Western Blot检测显示,与空白组相比,两种来源外泌体均可促进炎症组织来源牙周膜干细胞碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原mRNA与蛋白的表达(P<0.05),并且健康外泌体组的促进作用强于炎症外泌体组(P<0.05);③结果表明,人牙周膜干细胞分泌的外泌体能够促进炎症环境来源牙周膜干细胞的增殖及成骨分化能力,并且健康组织来源人牙周膜干细胞分泌外泌体的促进作用优于炎症组织来源人牙周膜干细胞分泌的外泌体。

关键词： 线上线下混合式教学   医学细胞生物学   MOOC   SPOC  

摘要： “医学细胞生物学”作为医学类相关专业的基础专业课程,在专业构成中具有重要地位。但由于课程自身的特点,传统教学往往难以达到理想的教学效果。随着“互联网+教育”的飞速发展,线上线下混合式教学成为目前高校备受青睐的一种新型教育模式。以医学细胞生物学为例,介绍了如何将MOOC和SPOC与翻转课堂教学相融合,实现线上线下结合、课内课外互补的混合教学模式,最终达到引导学生自主学习、提升教学质量的目的。

关键词： 细胞生物学   知识图谱   个性化学习   超星学习通   教学实践  

摘要： 知识图谱在医学教育领域的应用倍受关注。文章聚焦细胞生物学课程知识图谱的建设与实践,以细胞分化、细胞衰老章节为例,通过提炼章节知识点,优化教学设计,整合教材、多媒体视频、教学PPT、科研文献等多元教学资源,设计有效的测评方式,基于超星学习通完成细胞生物学知识图谱的构建,实现个性化学习路径。这有利于医学新生建立扎实的理论知识基础,为后续学习提供有力支撑,更好地满足中国特色社会主义建设对医学人才的培养要求。

关键词： 食管肿瘤   癌   鳞状细胞   细胞增殖   肿瘤侵润   SAPCD2  

摘要： 目的探讨SAPCD2在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其体外对ESCC细胞生物学功能的影响和可能的分子机制。方法利用基因表达谱交互分析(GEPIA)平台,分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因型-组织表达(GTEx)数据库中182例ESCC样本和286例正常食管组织样本SAPCD2转录水平表达情况。对ESCC患者临床组织芯片进行免疫组织化学(IHC)染色并进行染色评分,比较临床资料完整的61例癌组织及配对癌旁组织SAPCD2蛋白表达差异以及各临床病理特征分层中癌组织SAPCD2高表达患者分布。向ESCC细胞株KYSE-150中分别转染载有SAPCD2序列质粒和载有靶向SAPCD2的短发夹RNA序列的质粒,分别为SAPCD2过表达组和SAPCD2敲减组,并相应以转染空载质粒和转染载有阴性RNA序列质粒的细胞分别为过表达对照组和敲减对照组;CCK-8法(以吸光度值表示)和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;采用反转录-实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测各组细胞SAPCD2及基质金属蛋白酶9(MMP9)、增殖细胞核抗原(PCNA)、波形蛋白(Vimentin)mRNA水平;采用蛋白质印迹法检测SAPCD2蛋白和与细胞增殖、侵袭、转移相关及与AKT信号通路相关蛋白的表达水平。结果通过GEPIA平台分析显示,ESCC组织SAPCD2转录水平表达量高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01)。IHC染色显示,癌组织SAPCD2蛋白染色评分高于癌旁组织[(8.2±2.8)分比(2.2±1.7)分],癌组织中SAPCD2蛋白阳性(染色评分>0分)患者比例高于癌旁组织[95.1%(58/61)比57.4%(35/61)],差异均有统计学意义(均P<0.001),但在性别、年龄、肿瘤大小、病理分级、T分期、N分期、M分期分层间癌组织SAPCD2蛋白高表达(染色评分>3分)患者分布差异均无统计学意义(均P>0.05)。CCK-8法检测显示,SAPCD2过表达组KYSE-150细胞培养96 h吸光度值高于过表达对照组,SAPCD2敲减组培养72、96 h吸光度值均低于敲减对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。平板克隆形成实验显示,SAPCD2过表达组KYSE-150细胞培养14 d集落数多于过表达对照组[(800±30)个比(458±47)个],SAPCD2敲减组少于敲减对照组[(52±7)个比(81±2)个],差异均有统计学意义(均P<0.05)。细胞划痕实验显示,SAPCD2过表达组KYSE-150细胞培养24 h后划痕宽度较过表达对照组窄[(51±9)μm比(89±7)μm],而SAPCD2敲减组较敲减对照组宽[(120±22)μm比(37±10)μm],差异均有统计学意义(均P<0.01)。Transwell细胞迁移实验显示,SAPCD2过表达组KYSE-150细胞迁移数多于过表达对照组[(202±18)个比(50±14)个],SAPCD2敲减组少于敲减对照组[(227±27)个比(483±16)个],差异均有统计学意义(均P<0.01)。qPCR法检测显示,SAPCD2过表达组KYSE-150细胞MMP9、PCNA和Vimentin的mRNA相对表达量均高于过表达对照组,而SAPCD2敲减组三者均低于敲减对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。蛋白质印迹法检测显示,SAPCD2过表达组KYSE-150细胞PCNA和Vimentin蛋白相对表达量均高于过表达对照组,上皮型钙黏蛋白(E-cad)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)蛋白相对表达量均低于过表达对照组,而SAPCD2敲减组则均相反,差异均有统计学意义(均P<0.05);SAPCD2过表达组磷酸化AKT(p-AKT)蛋白相对表达量高于过表达对照组,而SAPCD2敲减组低于敲减对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论ESCC组织中SAPCD2在转录水平和蛋白水平均高表达。SAPCD2体外可促进ESCC细胞增殖和迁移,可能与AKT信号通路相关。

关键词： 细胞生物学   混合式教学模式   课程思政  

摘要： “立德树人”是教育的核心目标,课程思政是落实“立德树人”的基本途径之一,对教育学生树立正确“三观”、坚定“四个自信”具有其他教育方式不可替代的优势。细胞生物学是生命科学的基础、核心、枢纽和前沿学科,课程含有丰富的“组织纪律性”、“合作性”、“奉献性”、“努力进取精神”和“家国情怀”等相关思政知识点。思政融入点多、引导功能强是该课程最大的特点,但知识点多难串联且抽象、线下课时少、教师思政知识点挖掘和融入教学能力不同这三个因素对课程思政目标达成度影响明显。教学实践显示,混合式教学模式通过“优势互补、弥补不足”克服了影响该课程思政教学目标达成的“三因素”,是提升思政质量的重要途径之一。该文从思政元素挖掘融入、思政实施过程、教学反馈等方面探索实践了课程思政的深化发展,以期使专业知识传授与“立德树人”相辅相成,并为提高课程思政教学质量提供参考。

关键词： 肺肿瘤   蛋白酪氨酸激酶2β   自然杀伤细胞   杀伤作用   增殖   侵袭  

摘要： [目的]探究蛋白酪氨酸激酶2β(protein tyrosine kinase 2 beta,PTK2B)介导自然杀伤细胞的杀伤作用及影响肺癌细胞恶性生物学行为的作用机制。[方法]收集2022年1月至12月于南通市第一人民医院就诊的35例肺癌患者和35人健康志愿者的外周血,采用密度梯度离心对外周血单核细胞进行分离,使用磁性活化细胞分选人细胞分离试剂盒从外周血单核细胞中分离选择细胞。应用RT-PCR技术及Western blot检测细胞中PTK2B表达水平。流式细胞术检测外周血中NKG2D、NKp30和NKp46水平;ELISA法检测外周血中干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平。体外培养NK-92细胞并敲低PTK2B表达,RT-qPCR和Western blot检测NK-92细胞中PTK2B的表达。白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)刺激NK-92细胞,ELISA检测TNF-α和IFN-γ表达。随后,IL-2刺激的NK-92细胞与A549细胞以不同的比例(10∶1,5∶1,2.5∶1)共培养,流式细胞术和乳酸脱氢酶法评估NK-92细胞对A549细胞的毒性,CCK-8检测细胞活力,细胞克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell检测细胞侵袭。[结果]与对照组相比,肺癌患者中PTK2B mRNA和蛋白水平升高(1.15±0.51 vs 3.51±1.25,0.40±0.10 vs 0.82±0.15)(P均<0.001),NKG2D(48.86±8.03 vs 27.26±11.56,P<0.001)、NKp30(23.77±7.9 vs 16.10±7.03,P<0.001)、IFN-γ[(14.25±2.29)ng/mL vs(4.17±0.87)ng/mL,P<0.001]和TNF-α[(212.50±22.57)pg/mL vs(59.19±17.94)pg/mL,P<0.001]水平降低,但细胞活化受体NKp46表达无显著性差异(16.96±4.88 vs 18.20±6.73,P>0.05)。敲低PTK2B上调NKG2D和NKp30、NKp46表达水平,以及增加NK细胞产生IFN-γ、颗粒酶B和穿孔素水平。敲低PTK2B表达增强细胞对A549细胞的细胞毒性、细胞活力、增殖和侵袭降低,并能抑制A549细胞恶性生物学行为。[结论]PTK2B通过抑制自然杀伤细胞的杀伤作用,从而促进肺癌细胞的增殖和侵袭。

关键词： PHF5A   宫颈癌   增殖   侵袭   凋亡   HPV16 E6   HeLa   免疫组化  

摘要： [目的]探究PHF5A介导HPV16 E6对宫颈癌细胞生物学特性的影响。[方法]将宫颈癌HeLa细胞随机分为4组:空白组、siRNA NC组、siRNA PHF5A组和si RNA HPV16 E6组。通过免疫组化分析宫颈癌组织和癌旁的组织PHF5A的表达水平;通过蛋白免疫印迹分析正常宫颈上皮细胞及人宫颈癌细胞中PHF5A的表达差异;通过CCK-8实验分析各组HeLa细胞的增殖能力;通过Transwell实验分析各组HeLa细胞的侵袭能力;通过流式细胞术分析各组HeLa细胞凋亡率;通过蛋白免疫印迹分析HeLa细胞中PHF5A和HPV-16 E6蛋白的表达。[结果]相较于癌旁组织及正常宫颈上皮细胞,宫颈癌组织及宫颈癌细胞中PHF5A表达增加(0.11±0.02vs0.37±0.03vs0.41±0.05 0.43±0.01;P<0.05)。与空白组及si RNA NC组比较,si PHF5A组、siRNA HPV16 E6组的HeLa细胞增殖、侵袭能力降低,凋亡率增加(5.52±0.17vs6.23±0.37vs17.18±1.53vs15.32±1.81;P<0.05);si PHF5A组、siRNA HPV16 E6组的HeLa细胞的HPV-16 E6蛋白表达均降低(0.88±0.05vs0.85±0.08vs0.13±0.06vs0.22±0.03;P<0.05)。[结论] PHF5A在宫颈癌组织及癌细胞中高表达(0.11±0.02vs0.37±0.03vs0.41±0.05vs0.43±0.01;P<0.05),下调PHF5A表达后能够抑制HeLa细胞的增殖和侵袭,促进HeLa细胞凋亡(5.52±0.17vs6.23±0.37vs17.18±1.53vs15.32±1.81;P<0.05)。此过程与PHF5A调控HPV16 E6的表达相关。

关键词： 医学细胞生物学   SQ3R策略   多元化教学  

摘要： 目的 探讨基于SQ3R（survey、question、read、recite、revise，SQ3R）策略的多元化教学模式在医学细胞生物学教学中的应用效果。方法 选取佳木斯大学2023级临床医学专业4个班级共120名本科生为研究对象，随机分为试验组（n=60）和对照组（n=60）。试验组采用基于SQ3R策略的多元化教学模式，对照组采用传统教学模式。通过课堂观察、期末考试成绩及问卷调查，比较两组学生在学习兴趣、课堂参与度、学习成绩、自主学习能力和创新思维能力等方面的差异。结果 试验组学生的基础知识题、综合分析题、创新设计题及总成绩[分别为（53.11±3.57）、（26.38±2.86）、（8.73±1.02）和（88.23±5.00）分]均高于对照组[分别为（47.82±4.49）、（22.61±3.07）、（6.46±1.36）和（76.90±5.50）分，均P＜0.05]，差异具有统计学意义。此外，试验组学生在学习兴趣[（4.71±0.38）分vs.（3.86±0.41）分]、课堂参与度[（4.69±0.47）分vs.（3.71±0.60）分]、教学模式接受程度[（4.58±0.49）分vs.（3.95±0.46）分]及主动学习能力[（4.77±0.41）分vs.（3.87±0.54）分]评分上均高于对照组（均P＜0.05），差异具有统计学意义。课堂观察显示，试验组学生的发言频率、发言内容的逻辑性和创新性均优于对照组。结论 基于SQ3R策略的多元化教学模式能够显著提升学生的学习兴趣、课堂参与度、学习成绩，并有效促进学生的自主学习能力和创新思维能力提升，适用于医学细胞生物学教学。

关键词： 水产养殖专业   细胞生物学   课程思政   教学改革   复合型人才  

摘要： 细胞生物学在水产养殖专业中具有极其重要的地位,它不仅是理解水产动物生命活动的基础,也是推动水产养殖技术创新和发展的重要动力.文章聚焦于水产养殖专业的细胞生物学课程在高等教育体系中的课程思政教学改革实践,通过深入挖掘该门课程中的思政元素,创新教学方法,实现专业知识传授与价值引导的有机统一,为培育具备深厚专业素养、高尚道德情操及强烈社会责任感的复合型人才提供理论支撑与实践路径.