关键词:
SAPCD2
肺腺癌
增殖
迁移
侵袭
Hippo信号通路
摘要:
目的探讨SAPCD2在肺腺癌细胞中的表达情况,研究SAPCD2调控Hippo信号通路影响肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及其机制研究。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)分别检测4种肺癌细胞(HCC827、H1650、SK-MES-1、A549)及人正常肺上皮细胞(BESA-2B)中SAPCD2 mRNA和蛋白质表达水平,然后从中选取SAPCD2表达量相对较高的肺癌细胞来进行后续实验。实验分为正常对照组(NC组)、si-SAPCD2组和通路抑制剂组(si-SAPCD2+XMU-MP-1组)。通过干扰小RNA(small interfering RNA,siRNA)技术沉默SAPCD2 mRNA,采用qRT-PCR法检测转染后肺癌细胞SAPCD2的表达,采用克隆平板实验检测沉默后肺癌细胞的增殖情况,采用流式细胞术检测沉默后的肺癌细胞的凋亡情况,再通过细胞周期实验观察肺癌细胞在不同时期细胞数量,采用Transwell实验分析沉默SAPCD2对肺癌细胞迁移及侵袭的影响,采用Western blot检测ki-67、Bcl-2、Caspase-3、NF2、P-MST1、P-LATS1、P-YAP、YAP、TAZ蛋白表达。结果SAPCD2在肺腺癌A549细胞中表达水平最高(P<0.01)。沉默SAPCD2后A549细胞的增殖能力明显下降(P<0.01),抑制了A549细胞的迁移(P<0.05)及侵袭(P<0.01),促进A549细胞凋亡(P<0.01);超过半数的细胞停留在G0/G1期,与NC组相比,A549细胞在G0/G1期的细胞明显增多(P<0.01),G2/M期及S期的细胞明显减少(P<0.01),早期凋亡的细胞比例明显增加(P<0.01)。Western blot结果显示沉默SAPCD2后与NC组相比会下调ki-67、Bcl-2、YAP、TAZ蛋白的表达(P<0.01),上调Caspase-3、NF2、P-MST1、P-LATS1、P-YAP蛋白的表达(P<0.01)。结论SAPCD2在肺腺癌A549细胞的表达较正常肺上皮细胞BESA-2B明显升高,促进A549细胞增殖、迁移及侵袭,抑制细胞凋亡,其机制可能与Hippo信号通路被抑制有关。