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关键词： 乳腺炎   乳腺上皮细胞   基质成纤维细胞   脂多糖   脂磷壁酸   奶牛  

摘要： 奶牛乳腺炎是由于乳房损伤或病原微生物入侵所引起的机体代谢和生理状态改变的炎症反应,是严重影响奶牛业发展的最常见的疾病之一。在奶牛乳腺发生炎症的早期,乳腺导管中的病原菌会首先侵入腺泡表层的乳腺上皮细胞,进而影响乳腺上皮细胞的生理特性,导致上皮细胞的炎性细胞因子异常分泌。乳腺上皮细胞异常分泌的炎性细胞因子通过内环境影响周围组织中基质细胞的生理特性,使基质细胞初步表现出炎症反应特征。成纤维细胞是构成乳腺组织重要的基质细胞,其生长状态的改变会直接影响乳腺组织正常的结构和功能,因此研究奶牛乳腺上皮细胞在炎性状态下对基质成纤维细胞生物特性和功能的功能影响对于奶牛乳腺炎的防治具有重要的意义。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是引起奶牛乳腺炎主要的两种细菌,脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)和脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)分别是这两种导致奶牛乳腺炎的细菌主要毒力成分。本试验以荷斯坦奶牛乳腺组织分离的原代乳腺上皮细胞作为研究对象,首先利用LPS和LTA对乳腺上皮细胞进行炎症诱导,确定了LPS和LTA炎症诱导的最适浓度和最适时间,建立了体外诱导的炎性奶牛乳腺上皮细胞模型;然后通过体外间接共培养模式,以LPS和LTA体外诱导的炎性乳腺上皮细胞与正常基质成纤维细胞共培养的方法模拟炎性上皮细胞影响成纤维细胞过程,研究炎性乳腺上皮细胞对基质成纤维细胞活性、增殖、迁移、凋亡、炎性细胞因子分泌等生物学特性的影响,同时对导致这些特性发生变化的分子机制进行探究。结果表明,LPS和LTA诱导的炎性上皮细胞均可促进了基质成纤维细胞的激活,通过MAPK信号通路抑制成纤维细胞的增殖,通过WNT/β-catenin信号通路促进了成纤维细胞的迁移、同时增强成纤维细胞对TNF-α,CCL5,CXCL2,IL6,IL8等炎性相关因子的表达和分泌,诱导细胞外基质蛋白Fibronection和Collagen I的沉积。这些结果表明奶牛乳腺上皮细胞在炎性状态下,通过内环境对基质成纤维细胞生炎症响应。这一结果为进一步研究乳腺基质成纤维细胞在奶牛乳腺炎反应中的作用及奶牛乳腺炎的防治提供了一定的理论依据。

关键词： ARID1A   胃癌   shRNA   基因沉默   奥沙利铂  

摘要： 【背景】胃癌(Gastric Cancer,GC)是全世界最常见恶性肿瘤之一,常表现为发病率高、死亡率高。GC是个异质性较高的疾病,目前用传统组织病理学对胃癌进行分类已不能完全满足临床需要,2014年癌症基因图谱计划组(TCGA),将GC划分为4个亚型,其中AT丰富结合域1A基因(the AT-rich interactive domain 1A,ARID1A)在2组亚型(EB病毒相关型GC、微卫星不稳定型GC)中高频突变,且学者研究提出将ARID1A突变作为GC发生的因素之一。ARID1A作为染色质重塑复合物重要一员,在胚胎发育、组织生长、细胞增殖、分化、凋亡及起重要作用,可调控DNA合成、基因转录及DNA损伤后修复。研究表明,ARID1A在多种肿瘤中存在突变,其中胃癌的突变率是8-27%,该基因突变常可导致蛋白表达缺失或下降,与肿瘤进展、血管浸润、淋巴结转移相关,也是预测该类型肿瘤预后不良的因素之一。目前对胃癌的综合治疗仍以化疗为主,但不少患者在治疗过程中常因药物敏感性下降或耐药,导致疾病进展、转移。Lyu等研究发现,沉默ARID1A后卵巢透明细胞癌对顺铂的敏感性下降。而目前在胃癌的一线化疗方案中,以铂类为基础的联合方案是胃癌辅助化疗、姑息化疗的优选方案之一。故本研究拟通过sh RNA慢病毒转染胃癌细胞,沉默ARID1A基因,探讨ARID1A对胃癌细胞生物学及对奥沙利铂敏感性的影响。【目的】通过慢病毒转染胃癌细胞株,构建稳转ARID1A基因沉默的胃癌细胞株模型,探讨ARID1A基因沉默对胃癌细胞生物学行为,以及对胃癌细胞奥沙利铂敏感性的影响,并初步探讨导致胃癌细胞对奥沙利铂抵抗的可能机制。【方法】1.通过q PCR及Western blot法检测胃癌细胞中ARID1A的表达。2.通过慢病毒(载有特定靶向于人ARID1A基因的sh RNA及绿色荧光蛋白基因),转染胃癌细胞株MGC803、AGS,并用嘌呤霉素进行筛选,筛选出基因沉默的稳转胃癌细胞株。经由荧光显微镜和Western blot法从荧光表达量及蛋白表达水平验证ARID1A基因沉默效果。3.应用CCK8法、流式细胞仪及Transwell法,检测沉默ARID1A基因后,胃癌细胞株增殖活性、细胞凋亡、细胞周期分布及细胞侵袭能力等生物学行为的变化。4.采用CCK8法,检测ARID1A基因沉默组和阴性空载体胃癌细胞对奥沙利铂敏感性;采用流式细胞仪检测,同一奥沙利铂浓度下,ARID1A基因沉默组和阴性空载体胃癌细胞凋亡率。5.应用Western blot法检测,加入奥沙利铂前后,胃癌细胞AKt蛋白表达以及同一奥沙利铂浓度作用48h后,阴性对照组及ARID1A基因沉默组胃癌细胞AKt蛋白表达。【结果】***1A在胃癌细胞株MGC803,AGS中均有表达。2.成功构建的ARID1A沉默的稳转胃癌细胞株,荧光显微镜结果显示,在转染72h后,ARID1A沉默组胃癌细胞株MGC803、AGS的细胞荧光表达在80%以上;Western blot结果显示:与阴性空载体组相比,基因沉默组胃癌细胞ARID1A蛋白表达下调(AGS胃癌细胞蛋白表达下调65%,MGC803胃癌细胞蛋白表达下调40%),(P<0.01)。***8法结果显示:在细胞种板后早期(24h内),ARID1A基因沉默组与阴性空载体组之间的胃癌细胞增殖活性有增高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);在细胞种板后的24h-72h间,ARID1A基因沉默组胃癌细胞的增殖活性高于阴性空载体对照组(P<0.05)。流式细胞仪结果显示,ARID1A基因沉默组胃癌细胞较阴性空载体组细胞凋亡率下降(5.12±1.09 VS 8.76±1.02)(P<0.05);细胞周期结果显示:与阴性空载体组相比,ARID1A基因沉默组胃癌细胞周期分布表现为更多的细胞进入S期,G1期细胞减少(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,与阴性空载体组相比,ARID1A基因沉默组细胞侵袭能力明显增加(P<0.01)。***8法结果显示:在奥沙利铂浓度为(4μg/ml,8μg/ml,12μg/ml,16μg/ml)时,与阴性空载体组相比,ARID1A基因沉默组胃癌细胞的抑制率下降,(P<0.01);在奥沙利铂浓度为(1μg/ml,2μg/ml)时,与阴性空载体组相比,ARID1A基因沉默组胃癌细胞的抑制率变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。流式结果显示:在同一奥沙利铂浓度作用下,ARID1A基因沉默组胃癌细胞的凋亡率低于阴性空载组(10.63±1.15 VS 19.05±2.45)(P<0.05)。*** blot结果显示,在AGS、MGC803细胞株中,在加入奥沙利铂作用48h后,奥沙利铂组胃癌细胞较不加药组Akt

关键词： 巨指症   分子生物学   细胞生物学   ADSCs   神经  

摘要： 目的巨指症是以多种组织过度生长而导致肥大畸形为特征的先天性疾病,严重影响外形和功能,是困扰整形外科与手外科的难题。由于对巨指症伴随的病理性脂肪浸润的分子机制、细胞学和病理学特征缺乏研究,临床减容手术的范围、方法和时机存在巨大争议。为此,本研究将从巨指症脂肪组织的基因表达谱、脂肪干细胞的细胞学特性及神经组织脂肪浸润的病理学特征三个方面来展开研究。方法利用全外显子测序、一代测序、基因芯片等技术,通过生物信息学分析,鉴定巨指症的脂肪组织的突变型,差异化表达基因和富集情况;以正常脂肪间充质干细胞(Sat-ADSCs)为对照,对巨指症病理性脂肪间充质干细胞(Mac-ADSCs)的增殖能力、细胞周期、凋亡以及三相诱导分化进行检测;分析2型巨指患者的肌电图(EMG)特点,检测脂肪浸润神经与正常神经功能蛋白表达差异,观察超微结构改变。结果发现了巨指脂肪组织中PIK3CA-C420R、E81K新的突变位点,EGFL6、ANGPTL7、PTN、FGF1、SFRP4等基因的表达显著上调;Mac-ADSCs表现为增殖活性和成骨、成软骨分化潜能增强,成脂能力下降;2型巨指症患者神经中存在髓鞘损伤、神经再生和功能代偿的共存现象。结论巨指脂肪组织中发生PIK3CA-AKT通路激活,细胞分泌功能及ECM受体基因表达上调,是药物开发的潜在靶点;巨指脂肪干细胞成骨、成软骨潜能增强,故早期减脂将有利于控制疾病进程;对于2型巨指症患者,应根据神经损伤和代偿情况确定增粗神经的去留。

关键词： 黏菌   荧光染色   显型原质团   细胞核   微纤丝  

摘要： 非细胞黏菌的原质团是黏菌生活周期中的营养生长阶段。本实验采用的材料包括有:绒泡菌目、绒泡菌科、绒泡菌属的多头绒泡菌(***)、绒泡菌目、绒泡菌科、煤绒菌属的煤绒菌(Fuligo septica)、绒泡菌目、绒泡菌科、针箍菌属的针箍(Physarella oblonga)。绒泡菌目这三种黏菌的原质团均为显型原质团,显型原质团是属于肉眼可见的原质团,便于实验室培养观察研究。对三种原质团进行了长期的喂饲培养,针箍和煤绒菌采用水琼脂培养基培养,喂饲无菌水和燕麦粉;多头绒泡菌采用MSD培养基培养,通过显微摄影摄像技术和组织切片技术对三种黏菌原质团进行研究观察。1观察发现成熟的长势良好的多头绒泡菌原质团的菌脉结构较为粗壮,扇面结构浓密较厚,分枝不明显,颜色为黄色。2针箍菌原质团长势良好时比较粗壮,扇面结构粗厚,分枝明显,颜色黄,较煤绒菌黄色加深,偏橘黄。3观察长势良好的煤绒菌原质团,扇面结构清晰,菌脉与针箍菌相比较细弱,分支明显,颜色鲜黄。针箍菌和煤绒菌原质团的生长条件比较宽泛,多头绒泡菌原质团生长条件较严格。本实验通过对针箍菌和煤绒菌的原质团分别进行普通制片、Leica CM1950冰冻切片和石蜡切片,应用常规染色、Hoechst33258细胞核荧光染料染色及细胞骨架绿色荧光探针ActinRed染色观察。结果表明:原质团内存在大量的细胞核,可根据核在特定大小范围内的原质团中的分布情况,可以为精确计算细胞核数量打下基础,探究细胞核对细胞质作用的功能体积。显型原质团中的原生质流是研究胞质环流的模式材料,黏菌显型原质团菌脉由外层的凝胶部分及内层的溶胶部分组成,荧光探针表明,肌动蛋白存在于凝胶及溶胶交界处,大量微纤丝聚合在一起形成微丝束,说明肌动蛋白和原生质流的运动相关,并对菌脉有支撑作用。对煤绒菌和针箍菌新鲜原质团每隔20分钟取样一次,观察同步有丝分裂的细胞核周期,可以看到细胞核呈现周期变化,细胞核内染色体的聚缩,离散等现象。通过观察可以推断出,煤绒菌细胞核有丝分裂的周期约为9小时一循环;针箍菌细胞核有丝分裂的周期约为7小时一循环。黏菌其独特的生物学特性及原质团中细胞核存在的特点,使其成为细胞生物学研究的良好的模式材料,也是研究黏菌这一有趣物种的意义所在。

关键词： KCTD12   OCM-1   葡萄膜黑色素瘤   增殖  

摘要： 人类钾离子通道四聚体结构域蛋白12(KCTD12,也称为Pfetin)是KCTD家族26个成员之一。KCTD12调节GABAB受体信号的激动剂效力和动力学效应。蛋白质组学分析表明KCTD12可能是判断胃肠道间质瘤预后潜在的生物标志物。然而,很少有报道关于KCTD12对其他肿瘤类型的作用。葡萄膜黑色素瘤通常指发生在脉络膜,睫状体或虹膜上的黑色素瘤。葡萄膜黑色素瘤是最常见的成人原发性眼内恶性肿瘤。在美国,这些癌症的发生率是5%,其中85%是葡萄膜原发。葡萄膜黑色素瘤患者早期表现为无痛性视力下降,后期则可导致视网膜脱离。此外,葡萄膜黑色素瘤具有高度转移性,患者黑色素瘤可能转移到肝脏,肺或者皮肤。因此,葡萄膜黑色素瘤患者有高达一半的死亡率。葡萄膜黑色素瘤肿瘤的发生和转移是复杂过程。到目前为止,尚无研究KCTD12对葡萄膜黑素瘤影响的相关研究。本课题研究旨在探讨过表达KCTD12基因对脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1的生物学功能的影响。本研究设计并亚克隆KCTD12全长和部分片段基因。构建了真核过表达载体PC3.1-KCTD12,瞬转人类脉络膜黑素瘤细胞系(OCM-1),发现过表达KCTD12可以上调肿瘤上皮组织标志蛋白E-cad的表达及降低肿瘤上皮组织间质化(EMT)标志蛋白Vimitin的表达。构建慢病毒核心质粒p LVX-Puro-KCTD12,筛选出稳定表达KCTD12的OCM-1细胞系。我们将得到的细胞系进行RNA-Sequencing检测,并对数据进行生物信息学分析。发现基因表达水平变化主要包括增殖,细胞黏附,细胞凋亡,血管生成等方面。我们也针对以上结果进行实验验证。通过MTS实验、平板克隆实验及软琼脂克隆实验,结果表明KCTD12可有效抑制OCM-1细胞的增殖。通过划痕实验、transwell侵袭迁移实验及相关蛋白的表达情况的检测,发现上皮化标志物E-cadherin,β-Catenin表达量上调,而间质化标志物Vimentin的表达量则下降,Snail及slug作为E-cadherin的调节因素,表达量也有所下降。实验结果说明过表达KCTD12可以限制OCM-1细胞的侵袭及迁移。通过流式细胞仪对细胞周期及凋亡进行检测,并对细胞周期相关的关健蛋白进行检测。蛋白检查结果发现cyclin B表达量明显下降。结果表明过表达KCTD12的OCM-1细胞中G2/M到G1期的过程时间延长。另外,KCTD12过表达OCM-1细胞抑制了裸鼠体内异种移植物的生长。最后,实验还构建了PGEX-4T-KCTD12全长和部分片段的载体,进行原核表达,并纯化了带GST及HIS标签的KCTD12全长及部分片段的融合蛋白。用全长部分蛋白验证对OCM-1细胞的生物学作用,并用部分片段蛋白免疫小鼠制备了鼠源性抗体。总的来说,过表达KCTD12具有抑制OCM-1细胞生长的作用,未来有可能作为治疗脉络膜黑色素瘤的新型治疗靶标。

关键词： 细胞生物学   理论课程   实践教学  

摘要： 细胞生物学理论课程的学习是本科生了解这门学科的主要手段。为了让本科生尽早了解真实的细胞生物学相关科研工作,本文提出了三个关于理论课程如何适应实践教学的建议,包括外文文献的简化阅读、科研案例的课堂应用以及分组报告。这三项措施具有在理论课堂实现的可行性,能够充分发挥教师在课堂教学中的引导作用。

关键词： DEC1   胶质瘤   替莫唑胺   shRNA   化疗耐受   MGMT  

摘要： 人胚胎软骨发育基因1(DEC1)是由Shen等1997年首次从人类胚胎软骨组织分离得到,它是碱性螺旋-环-螺旋转录因子家族成员。DEC1参与软骨形成、免疫反应、生物节律、脂肪形成等重要生理过程。且研究发现,在结肠癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中DEC1显著高表达,与部分肿瘤的恶性级别呈正相关。特定肿瘤组织中DEC1的表达可被多种有害刺激所诱导,还与肿瘤的缺氧状态关系密切。所有这些提示:DEC1的表达与肿瘤的恶性表型紧密相关,且在肿瘤发展进程中发挥着重要作用。但DEC1在胶质瘤中的作用尚未见报道。本研究成功构建了DEC1基因慢病毒干扰质粒载体psi-LVRU6MP-DEC1-shRNA,与辅助质粒共转染293T细胞获得病毒液。病毒液感染T98G、U87胶质瘤细胞,经嘌呤霉素筛选,并经Western blot检验,成功构建T98G、U87胶质瘤细胞各自DEC1基因短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰及对照的DEC1-shRNA-1组和DEC1-shRNA-2组以及Negative-shRNA的稳转胶质瘤细胞系。在此基础之上,通过MTT实验、平板克隆形成实验、Transwell小室实验、划痕实验、裸鼠成瘤实验以及CCK-8细胞毒性实验检测DEC1基因shRNA干扰后对胶质瘤细胞体内、外生物学行为及对替莫唑胺化疗反应性的影响。结果显示,DEC1基因shRNA干扰后抑制胶质瘤细胞在体内及体外的增殖,体外克隆形成能力降低、侵袭及迁移能力也降低。CCK-8细胞毒性实验显示DEC1基因敲减后胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性提高。多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是中枢神经系统恶性度最高的肿瘤(WHO IV级),虽经标准综合治疗,即手术切除、放、化疗等,患者的中位生存期仍只有12～15个月。新一代烷化剂替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)是目前化疗治疗GBM最有效的药物,其细胞毒性作用的原理主要是对多重DNA位点的甲基化。替莫唑胺辅助化疗能够较明显延长多形性胶质母细胞瘤患者的生存期,但这种效果有限,仅能提高约3个月左右,其原因主要是多形性胶质母细胞瘤细胞对替莫唑胺存在某种化疗抵抗。其中一个重要机制是固有性耐药的产生,其主要是由O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-Methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)的异常高表达所引起。所以,为了对抗多形性胶质母细胞瘤的耐药性,并提高替莫唑胺的化疗效果,延长GBM患者的生存期,寻找一种能影响耐药的关键分子并且比较具体的阐明其作用的机制,对多形性胶质母细胞瘤患者的治疗及预后都具有非常重要的价值。碱基切除修复(Base excision repair,BER)也是引起替莫唑胺化疗耐受的原因之一。BER修复系统中DNA双链断裂(DNA double strand break,DSB)优先通过同源重组(Homologous recombination,HR)系统修复。HR系统缺陷的细胞对TMZ诱导的损伤高度敏感。RAD51是HR途径的关键组分,并且与HR的完整性高度一致。RAD51基因敲低与增强的TMZ化疗反应相关联。本研究通过免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)的方法,评估80例初次手术切除的原发性多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者的肿瘤石蜡病理切片组织中DEC1及MGMT在胶质瘤组织中的表达相关性,发现二者在胶质母细胞瘤中的表达存在正相关性。通过Western blot的方法检测发现DEC1基因敲减后胶质瘤细胞中MGMT及RAD51蛋白的表达也降低。说明DEC1基因shRNA干扰后,胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性的提高可能是DEC1与MGMT或RAD51发生作用的结果。综上所述,DEC1可能成为胶质细胞瘤患者,尤其是对替莫唑胺化疗存在耐受的胶质瘤患者基因治疗的一个潜在候选靶点。

关键词： 细胞生物学   教学   科研  

摘要： 为了满足应用型和创新型生命科学人才的培养要求,提高细胞生物学的教学质量,本文针对细胞生物学教学过程中存在的问题并结合教学实践,从教学设计、教学内容、教研结合方面展开讨论,以期探索适应新时代背景的教学模式,综合提高学生的创新能力和科研能力。

关键词： AML1   ZFP36L2   转录调控   细胞增殖   细胞周期   细胞凋亡  

摘要： 研究目的:染色体t(8;21)(q22;q22)异位形成AML1-ETO融合基因,AML1-ETO融合蛋白能异常募集组蛋白脱乙酰化酶(Histone Deacetylase,HDAC)进而抑制AML1靶基因的正常转录。HDAC抑制剂(HDACi)苯丁酸钠(phenylbutyrate,PB)在处理AML1-ETO+ Kasumi-1细胞时能够诱导凋亡分化,并伴随AML1、PIG7等多种基因表达上调。通过生物信息学分析发现,表达上调的ZFP36L2基因启动子区有AML1的潜在结合位点。ZFP36L2是含CCCH锌指结构的RNA结合蛋白,通过加快mRNA的降解或抑制蛋白翻译从而调控特异mRNA的表达。本研究旨在探讨AML1对ZFP36L2是否具有转录调控作用,以及ZFP36L2蛋白在AML细胞系Kasumi-1和HL-60中的生物学功能,并探讨其作用机制。研究方法:实时定量PCR(qRT-PCR)检测ZFP36L2在AML1-ETO+患者细胞和细胞系中的表达。应用qRT-PCR和Western blot技术,检测PB处理Kasumi-1细胞后ZFP36L2mRNA和蛋白表达变化。构建包含AML1结合位点的ZFP36L2启动子报告质粒,应用双荧光素酶报告基因系统,检测转录因子AML1、AML1-ETO对ZFP36L2的转录调控作用,并在CV-1细胞中分别转入外源AML1和AML1-ETO,应用qRT-PCR和Western blot检测内源ZFP36L2 mRNA和蛋白水平变化。利用四环素可诱导表达体系Tet-On系统,构建慢病毒表达载体pLVX-Tight-Puro-ZFP36L2,通过PEI转染方法,转染HEK293T细胞,收获病毒,对Kasumi-1细胞和HL-60细胞进行感染,筛选稳定克隆。在强力霉素(doxycycline,Dox)诱导时,外源ZFP36L2基因可以表达,而未经Dox诱导,外源导入的ZFP36L2基因不表达,即可以通过Dox来控制该基因的表达与否。应用qRT-PCR和Western blot,检测ZFP36L2在mRNA和蛋白水平的可诱导表达。诱导ZFP36L2过表达时,检测Kasumi-1和HL-60细胞的增殖、凋亡、周期和分化等细胞生物学功能的改变,通过Western blot检测凋亡蛋白和周期蛋白的改变。研究结果:ZFP36L2在白血病患者中低表达,且ZFP36L2在M2b患者中的表达水平低于在非M2b患者中中表达水平,在AML1-ETO+细胞系Kasumi-1细胞中表达水平相对较低。PB处理诱导Kasumi-1细胞凋亡时,qRT-PCR和Western blot检测显示ZFP36L2在mRNA和蛋白水平表达均上升。AML1激活ZFP36L2启动子报告质粒,且激活作用呈剂量依赖性,而AML1-ETO对ZFP36L2启动子报告质粒的转录激活没有明显作用。在CV-1细胞中过表达AML1可以上调内源ZFP36L2的蛋白表达;而过表达AML1-ETO对ZFP36L2的蛋白表达无明显影响。当ZFP36L2基因在Kasumi-1细胞和HL-60细胞中诱导表达时,细胞均表现增殖能力受抑制,细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加,未检测到细胞分化。相关凋亡蛋白和周期蛋白,出现相应改变。研究结论:本研究发现了 AML1新的靶基因—ZFP36L2。AML1转录调控激活ZFP36L2表达,过表达ZFP36L2抑制细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,是肿瘤抑制因子。当发生t(8;21)染色体异位形成AML1-ETO融合蛋白,上述作用减弱或消失,促进白血病发生。本研究阐明了 AML1对ZFP36L2的调控作用,以及ZFP36L2在白血病细胞中的生物学作用。

关键词： 类风湿性关节炎   病理机制   胰岛素样生长因子结合蛋白2   成纤维样滑膜细胞   生物学行为  

摘要： 目的：探讨胰岛素样生长因子结合蛋白2（Insulinlike growth factor binding protein2，IGFBP2）对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）生物学行为的作用，以及IGFBP2对细胞外调节蛋白激酶（Extracellular regulated protein kinases1/2，ERK1/2）的作用。　　方法：首先，原代培养类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）和正常成纤维样滑膜细胞（FLS），并采用qRT-PCR、Western blot及免疫荧光技术检测IGFBP2mRNA和蛋白在FLS和RA-FLS中的表达水平。其次，RA-FLS细胞被转染siRNA-IGFBP2和siRNA-NC，qRT-PCR检测IGFBP2在RA-FLS细胞中的干扰效果;CCK-8实验检测IGFBP2敲低后对RA-FLS细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测IGFBP2敲低后对RA-FLS细胞凋亡的影响;Transwell检测IGFBP2敲低对RA-FLS细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测IGFBP2敲低对RA-FLS细胞迁移能力的影响。此外，RA-FLS细胞转染IGFBP2siRNAs48小时后，提取总蛋白质，Western blot检测RA-FLS中IGFBP2、ERK和p-ERK蛋白的表达水平。　　结果：IGFBP2在FLS细胞与RA-FLS细胞中表达情况：qRT-PCR和western blot分别在mRNA和蛋白表达水平检测显示IGFBP2在RA-FLS细胞中表达明显高于FLS细胞。敲低RA-FLS细胞中IGFBP2后会抑制RA-FLS细胞增殖、迁移和侵袭能力，RA-FLS细胞凋亡率增加。此外，敲低IGFBP2也会下调p-ERK1/2蛋白表达，但ERK1/2表达无明显变化。　　结论：IGFBP2在RA-FLS细胞中高表达;IGFBP2可通过ERK1/2信号通路调控RA-FLS增殖、迁移、侵袭和凋亡;敲低IGFBP2表达能够抑制RA-FLS细胞增殖、迁移和侵袭，促进RA-FLS细胞凋亡，说明可以将IGFBP2作为治疗RA的一个潜在靶点进行研究。