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关键词： MicroRNA-155   IRF2BP2-KLF2-NF-κB通路   HaCaT细胞   炎症   银屑病  

摘要： 研究背景:银屑病是一种由遗传、免疫、感染等因素引起的慢性炎症性皮肤病。该病进展时间长,易复发,发病机制尚不完全清楚。已有相关研究表明,miR-155的异常表达与银屑病的进展密切相关。 目的:本研究旨在利用生物信息学方法筛选银屑病的差异表达基因和差异表达微小核糖核酸(micro RNA,miRNA),探讨miR-155在银屑病发生发展中的作用及其分子机制。 方法:采用GEO2R工具分别筛选银屑病患者数据集GSE166388和GSE153007中皮肤组织差异表达基因,和银屑病患者数据集GSE115293和GSE145305中皮肤组织差异表达miRNAs;采用VENNY工具分别筛选银屑病患者数据集GSE166388和GSE153007中皮肤组织共表达差异基因,和银屑病患者数据集GSE115293和GSE145305中皮肤组织共表达差异miRNAs。基于Metascape数据库同时利用R软件对银屑病患者皮肤共表达差异基因、共表达上调差异基因、共表达下调差异基因分别进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;利用CIBERSORT工具分析银屑病患者数据集GSE166388皮肤组织免疫细胞浸润情况;基于String数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作网络(PPI)和miRNA-m RNA网络,基于Cyto Hubba插件Degree算法获得核心网络和关键元素。miR-155转染HaCaT细胞,采用CCK8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期变化;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测炎症因子IL-1β和IL-6的基因和蛋白表达水平。LPS处理HaCaT细胞构建银屑病炎症模型。q RT-PCR检测炎症下miR-155、IL-1β和IL-6的基因表达水平;ELISA检测IL-1β和IL-6的蛋白表达水平。利用GEO数据库筛选HaCaT细胞与银屑病患者皮肤组织的共表达差异基因;基于miRTarbase和Targetscan数据库预测获得miR-155的靶基因。利用q RT-PCR、蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测转染miR-155 mimics/miR-155 mimics NC、inhibitor/inhibitor NC后IRF2BP2的基因和蛋白表达水平,并通过免疫荧光检测IRF2BP2的细胞定位和表达水平。通过双荧光素酶基因报告实验验证miR-155和IRF2BP2的结合。设计IRF2BP2的siRNA,q RT-PCR检测敲低IRF2BP2对IRF2BP2-KLF2-NF-κB通路基因表达水平的影响。q RT-PCR和Western blot检测LPS刺激下IRF2BP2-KLF2-NF-κB通路基因表达水平;q RT-PCR和Western blot检测LPS刺激下转染miR-155对IRF2BP2-KLF2-NF-κB通路基因和蛋白表达水平影响。 结果:筛选出660个共表达差异基因,其中397个上调基因和263个下调基因;筛选出9个共表达差异miRNA,其中5个上调miRNA和4个下调miRNA。660个共表达差异基因分析获得了前20条GO功能注释和前20条KEGG富集通路。397个共表达上调基因从生物过程(BP)、细胞成分(CC)、分子功能(MF)分别富集到5条GO注释并获得前10条富集通路,共表达上调基因主要与炎症反应、炎症信号转导通路相关。263个共表达下调基因从生物过程(BP)、细胞成分(CC)、分子功能(MF)分别富集到5条GO注释并获得前10条富集通路,共表达下调基因主要与紧密连接、表皮屏障功能障碍、转录因子调节通路相关。免疫浸润结果显示在银屑病患者皮肤中,CD8+T细胞、辅助T细胞和活化树突状细胞的浸润水平较高,而静息肥大细胞和Tregs的浸润程度较低。构建的miRNA-m RNA核心网络显示,miR-155为得分最高的关键元素。转染miR-155:CCK8结果显示,miR-155可明显抑制HaCaT细胞增殖;流式细胞术结果显示,miR-155可促使S期细胞数量显著增多、G2期细胞数量显著减少;q RTPCR和ELISA结果分别显示,miR-155提升IL-1β和IL-6的基因表达水平和蛋白分泌水平。在LPS诱导的炎症细胞模型中:q RT-PCR结果显示,在LPS刺激下miR-155、IL-1β和IL-6的基因表达水平明显升高;q RT-PCR和ELISA结果分别显示,LPS刺激下过表达miR-155,明显提升IL-1β和IL-6的基因和蛋白表达水平;LPS刺激下抑制miR-155,明显降低IL-1β和IL-6的基因和蛋白表达水平。基于miRTarbase和T

关键词： 基本科学指标数据库(Essential Science Indicators,ESI)   Web of Science(WoS)学科分类   细胞生物学   InCites数据库   引文主题(Citation Topics,CT)分析  

摘要： 本文从宏观至微观对比中国与美国特定学科领域JCR期刊对本国科研成果的覆盖情况，分析我国与美国之间的差距或异同，以期为我国学术期刊的发展提供参考意见。基于ESI学科分类或WebofScience(WoS)学科分类，运用WoS和InCites数据库检索并统计2003—2022年美中两国作者及期刊的发文情况。使用InCites数据库中的引文主题（Citation Topics,CT）分析功能分析2003—2022年美中两国作者及期刊的热点研究主题。结果发现，在22个ESI学科分类下，2021年以前我国各学科的作者/期刊发文量和发文质量都与美国存在较大差距，我国期刊与美国期刊的差距则更大。在WoS学科分类下的细胞生物学（CellBiology）领域中，我国期刊近年来发展迅速，发文质量也逐年变好，但发文量仍与美国存在巨大差距，美国期刊对美国作者发文的覆盖度远远优于我国期刊对我国作者发文的覆盖度，这也从侧面证实我国优质论文绝大部分流向了海外期刊。从微观层次的发文主题覆盖度来看，细胞生物学领域的美国期刊较好地覆盖了美国作者的各相关研究主题，而我国期刊对我国作者发文主题的匹配度则弱于美国期刊。可见，我国各学科领域期刊不论是发文量还是发文质量都与美国期刊存在巨大差距，我国还有多个学科存在英文期刊缺口问题；另外，我国细胞生物学领域期刊近年来发展势头较好，但与美国期刊相比发文量还存在巨大差距。因此，我们建议，在宏观上，我国应当根据需求适时创办更多英文新刊或是扩大现有期刊的发文量以适配某些学科的发展需求；在微观上，我国细胞生物学领域期刊应灵活地调整发文范围及选题，以更好地匹配我国学者的发文需求，以助力我国一流学科建设及一流期刊建设。

关键词： 结直肠癌   微小核糖核酸-153-3p   信号通路   细胞生物学  

摘要： 背景和目的　　结直肠癌（Colorectal cancer ,CRC）是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率都在逐年上升，严重威胁着人类的身体健康，是现在迫切需要解决的一大热点难题。因为结直肠癌的发病机制复杂，需要进行更加深入的研究。此外，有研究发现miRNA可作为早期检测和治疗不同类型癌症,如乳腺癌、膀胱癌、肺癌的生物标志物。同时也有研究发现miR-153-3p在不同肿瘤中的作用，例如过表达的miR-153-3p通过下调靶向基因ATG5抑制非小细胞肺癌自噬，从而提高化疗药物的敏感性。已证实miRNA的异常表达在结直肠癌的发生和发展中起着关键作用。我们发现miR-153-3p在CRC中表达偏高，但是miR-153-3p在CRC中的具体作用和潜在机制仍可深入研究。另有研究发现JAK2/STAT3信号通路可在结直肠癌细胞中被激活，从而抑制细胞凋亡和增强克隆形成能力，在促进肿瘤发生方面发挥重要作用。因此本研究拟探讨miR-153-3p是否能够通过参与JAK/STAT信号通路影响结直肠癌的发生进展，为结直肠癌的诊断和治疗提供新的生物学靶点。　　方法　　1.明确miR-153-3p在结直肠癌组织和细胞系中的表达情况　　通过RT-qPCR实验检测在结直肠癌组织和细胞系中miR-153-3p的表达水平。并筛选出后续实验所用细胞，以及验证了转染效率。　　2.明确miR-153-3p对结直肠癌细胞的功能学作用　　通过CCK-8、克隆形成、Transwell和划痕实验检测miR-153-3p对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。通过流式细胞仪检测miR-153-3p对结直肠癌细胞凋亡的影响。　　3.推测miR-153-3p可能调控JAK/STAT信号通路对结直肠癌发挥作用　　通过Western blot实验检测miR-153-3p不同表达水平对JAK/STAT信号通路的影响。　　***-153-3p可能与PRDM2基因共同影响结直肠癌细胞的功能学作用　　通过 RT-qPCR 实验检测在结直肠癌组织中 PRDM2 的表达水平，RT-qPCR 和Western blot实验检测转染miR-153-3p后PRDM2的表达水平。通过CCK-8、克隆形成、Transwell和Western blot实验检测miR-153-3p和PRDM2组对结直肠癌细胞功能学作用。　　结果　　1.实验发现miR-153-3p在结直肠癌组织中高表达，在癌旁组织中低表达。提示miR-153-3p 可能是促进结直肠癌的相关基因之一，并根据在不同结直肠癌细胞中miR-153-3p的表达结果，选择HT-29进行后续实验。　　2.实验结果发现miR-153-3p能够促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭以及迁移能力，抑制结直肠癌细胞的凋亡率。　　3.实验结果显示，与对照组相比，过表达miR-153-3p后细胞中p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达水平升高，说明miR-153-3p促进了JAK2和STAT3的磷酸化，而敲低则抑制了蛋白的磷酸化，表明miR-153-3p 可能调控JAK/STAT 信号通路，从而影响结直肠癌的发展进程。　　4.实验结果显示PRDM2可能对结直肠癌细胞起到促进作用，并与miR-153-3p可能存在正向调控关系，促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，抑制细胞的凋亡能力。　　结论　　***-153-3p与癌旁组织相比，在结直肠癌组织中表达升高。　　***-153-3p 能够促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，降低结直肠癌细胞的凋亡能力。　　***-153-3p可能调控JAK/STAT信号通路，从而影响结直肠癌的发展进程。　　***-153-3p 可能与 PRDM2 基因相互作用，从而影响结直肠癌的增殖、侵袭、迁移以及凋亡。

关键词： Circ＿0022382   乳腺癌   增殖   迁移  

摘要： 目的: 尽管内分泌治疗、靶向治疗、化疗等方式可以有效提高乳腺癌患者的生存率,但是在治疗的过程中,患者对治疗决策的反应不一,根本原因为乳腺癌细胞的异质性。Circ RNA具有高度的稳定性,并且许多研究报道circ RNA和肿瘤进展密切相关。因此,我们从GEO数据库中筛选出一个在乳腺癌中差异表达的circ RNA,并探索该circ RNA对乳腺癌细胞生物学特性的影响以及具体的作用机制,为乳腺癌的诊断和治疗的靶点选择提供理论依据。 方法: 1.通过GEO数据库、RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳实验、RT-qPCR实验筛选差异表达的circ RNA以及检测circ RNA的环形结构和circ RNA在乳腺癌组织和乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7中的表达情况; 2.通过转染实验、RT-qPCR实验、CCK8实验、克隆形成实验、Transwell实验、划痕实验、流式细胞术检测敲低circ RNA对乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7增殖、迁移和凋亡能力的影响; 3.通过RT-qPCR实验、双荧光素酶报告实验、克隆形成实验、划痕实验筛选和验证敲低circ RNA后引起乳腺癌细胞增殖、迁移能力改变的mi RNA; 4.通过KEGG信号通路富集分析、Western-blot实验、细胞免疫荧光实验筛选并验证mi RNA所调节的信号通路和下游靶基因; 5.通过加入铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)和胱氨酸抑制剂(dithiothreitol)、克隆形成实验、划痕实验、化学分光光度法检测敲低circ RNA后SLC7A11蛋白改变的作用机制; 6.借助Circ Interactome数据库、RNA免疫共沉淀实验、RT-qPCR实验、Western-blot实验分析乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中circ RNA高表达的机制; 7.通过慢病毒转染实验、皮下荷瘤实验、免疫组化实验检测circ RNA对裸鼠体内乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的影响以及对circ RNA所调控的靶蛋白表达的影响。 结果: 1.从GEO数据库中筛选而来的circ＿0022382在乳腺癌组织和乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7中高表达; 2.体外敲低circ＿0022382会抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的增殖能力和迁移能力,同时也会促进乳腺癌细胞凋亡的发生; ***＿0022382通过海绵化let-7a-5p来促进乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的增殖、迁移; ***＿0022382通过海绵化let-7a-5p来激活PI3K/AKT/m TOR信号通路; ***＿0022382通过海绵化let-7a-5p来促进SLC7A11蛋白的表达,且铁死亡抑制剂Ferrostatin-1无法挽救敲低circ＿0022382导致乳腺癌细胞增殖、迁移的下降,而胱氨酸抑制剂dithiothreitol能够挽救敲低circ＿0022382导致乳腺癌细胞增殖、迁移的下降; ***4A3在乳腺癌细胞中高表达,并且EIF4A3会促进乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中circ＿0022382的生成; 7.慢病毒敲低circ＿0022382会抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231在裸鼠体内的生长和circ＿0022382下游靶蛋白的表达。 结论: 乳腺癌细胞中,EIF4A3诱导的circ＿0022382通过靶向let-7a-5p/PI3K/AKT/m TOR信号通路或SLC7A11轴影响乳腺癌细胞的增殖、迁移能力。此外,circ＿0022382调控SLC7A11蛋白的过程可能和双硫死亡相关。

关键词： 细胞生物学   综合素质   课程建设   教学实践  

摘要： 全面提高学生综合素质是深入推进“双一流”建设的核心任务和高等教育的关键目标。如何将以提高学生综合素质为导向的培养目标落实到具体的教学实践,是高校人才培养亟须解决的重要问题。江西师范大学生命科学学院细胞生物学课程组以提高学生综合素质为导向,针对传统教学模式存在的突出问题,采用BOPPPS教学模式,开发多样化的课程资源和多元化的学习活动,融入思政元素,构建综合评价体系,形成了从教学目标、教学活动到教学考核的课程教学闭环设计,经过实践检验,取得了显著效果。该文对课程组的教学探索与实践进行研究和反思,旨在为课程理论研究和教学实践提供参考。