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关键词： 盐霉素   三氧化二砷   生物学   肾肿瘤  

摘要： 目的研究盐霉素(Sal)与三氧化二砷(As_2O_3)体外对人肾癌KCC853细胞生物学行为的影响。方法采用MTT法检测单药及联合用药对KCC853细胞株的抑制效应;运用集落实验检测两种药物对细胞菌落增殖的影响;利用细胞划痕试验观察两种药物对细胞迁移的影响;利用Hoechst33258染色法观察单药及联合用药对KCC853细胞凋亡的形态变化。采用方差分析及F检验进行统计学分析。结果 Sal与As_2O_3在体外对KCC853细胞的增殖具有抑制作用,不同浓度(0.16、0.8、4、20、100μg/ml)的Sal对KCC853细胞的抑制率分别为:6.9﹪、10.8﹪、19.4﹪、58.5﹪、96.0﹪;不同浓度(0.008、0.04、0.2、1、5μg/ml)的As_2O_3对KCC853细胞的抑制率分别为:7.0﹪、7.7﹪、15.0﹪、48.4﹪、86.6﹪;联合用药组对KCC853细胞的抑制率分别为:18.9﹪、21.4﹪、40.4﹪、54.7﹪、95.8﹪。表现出一定的浓度依赖性,P<0.05。在细胞集落抑制实验中,Sal对KCC853细胞集落的制率为:37.23﹪;As_2O_3对KCC853细胞集落的制率为:43.83﹪;联合用药组与Sal、As_2O_3单药组相比效果更显著,其抑制率达到57.5﹪,P<0.01。进一步研究发现:Sal与As_2O_3能有效抑制KCC853细胞的迁移能力。结论低剂量的盐霉素与As_2O_3能有效地抑制KCC853细胞的生长和迁移,并能促进其凋亡。

关键词： 胆酸   代谢病   机制   炎症   细胞生物学   综合运用   浙江大学   疾病模型  

摘要： 浙江大学医学院王迪教授等人综合运用免疫学、细胞生物学、生物化学以及动物疾病模型等开展研究，发现胆酸可以抑制NLRP3炎性小体，从而减缓脓毒症、腹膜炎和二型糖尿病的症状表现。相关成果发表于Immunity，2016．45：802—816。

关键词： 组织工程   细胞凋亡   碱性磷酸酶   组织构建   高糖   人牙周膜细胞   代谢记忆   增殖   凋亡   流式细胞术   总蛋白合成   细胞生物学活性  

摘要： 背景:目前高糖影响人牙周膜细胞相关研究多集中在细胞生物学行为、相关通路、因子分泌研究等方面,但对于人牙周膜细胞对高糖影响是否存在"代谢记忆"效应的报道较少。目的:观察人牙周膜细胞对高糖损伤是否存在记忆效应。方法:原代培养并鉴定人牙周膜细胞,实验采用5-8代细胞,划分为对照组、5 d记忆组、3 d记忆组、8 d高糖组:对照组葡萄糖浓度为5.5 mmol/L DMEM培养液培养8 d;5 d记忆组用35 mmol/L DMEM培养液刺激3 d后5.5 mmol/L DMEM培养液培养5 d;3 d记忆组35 mmol/L DMEM培养液刺激5 d后5.5 mmol/L DMEM培养液培养3 d;8 d高糖组葡萄糖浓度35 mmol/L DMEM培养液进行8 d的刺激。细胞增殖通过CCK-8法进行测定,细胞凋亡通过流式细胞仪进行检测,采用酶标仪检测总蛋白的合成及碱性磷酸酶水平变化。结果与结论:与对照组比较,其他3组中的细胞增殖速度明显降低(P<0.05)。细胞凋亡明显升高,总蛋白合成以及碱性磷酸酶分泌水平,所有高糖组总蛋白合成以及碱性磷酸酶分泌水平则明显下降(P<0.05)。结果说明,人牙周膜细胞在高糖环境中产生的损伤具有记忆效应,以细胞活力长时间下降、凋亡增加、总蛋白合成、碱性磷酸酶水平持续下调为主要表现。

关键词： 腺病毒载体   Cadherin-11   免疫细胞化学   RT—PCR   生长曲线  

摘要： 目的:构建表达钙黏蛋白-11(Cadherin-11)的重组腺病毒载体,并观察其对大鼠牙髓细胞生物学特性的影响。方法 :PCR扩增Cadherin-11,在引物中引入NheⅠ和HindⅢ酶切位点,构建pDC316-mCMV-EGFP-Cadherin-11重组腺病毒穿梭载体。用含目的基因的重组质粒转染293T细胞,获得含目的基因的高滴度腺病毒。原代培养大鼠牙髓细胞,并用pDC316-mCMVEGFP-Cadherin-11重组腺病毒进行转染。采用免疫细胞化学法和RT-PCR法分别检测目的基因Cadherin-11的表达。结果:以pDC316-mCMV-EGFP-Cadherin-11转染大鼠牙髓细胞后,Cadherin-11mRNA和蛋白均为阳性表达(均P<0.05),且感染复数(MOI)为50时病毒转染效率最高。携带Cadherin-11目的基因的大鼠牙髓细胞生长速度明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论:构建重组腺病毒载体pDC316-mCMV-EGFP-Cadherin-11可高效转染大鼠牙髓细胞,并稳定表达Cadherin-11基因;过表达Cadherin-11对大鼠牙髓细胞生长具有一定的促进作用。

关键词： 甲氨蝶呤   牙髓间充质干细胞   细胞增殖   成骨分化  

摘要： 目的:探讨不同浓度甲氨蝶呤(MTX)对人牙髓间充质干细胞(h DPSCs)生物学特性的影响。方法:从新鲜拔除的健康年轻恒牙中分离培养并鉴定h DPSCs;然后将细胞分为4组,分别用含0、0.1、1.0、10.0μmol/L的MTX进行培养,检测不同浓度MTX对h DPSCs的集落形成、增殖(CCK-8法)、迁移(划痕法)、成骨分化能力(茜素红染色及Western blot实验)以及细胞周期(流式细胞术分析)影响。结果:随着MTX浓度增加,h DPSCs的细胞集落形成能力及迁移速度逐渐降低,呈浓度依赖性;1.0、10.0μmol/L组较0.1μmol/L组对细胞增殖的抑制更显著(P<0.05),但1.0、10.0μmol/L组间相比无统计学差异(P>0.05);细胞周期分析显示,加入MTX后细胞被阻滞于S期,S相细胞从35.4%增加到60.3%~64.5%(P<0.05),但3个实验组S相细胞百分数相比P>0.05;茜红素染色显示,1.0、10.0μmol/L组明显抑制矿化结节的形成;Western blot结果显示,各组间RUNX2、OSX、ALP的表达水平相比P>0.05。结论:MTX对h DPSCs的各项生物学特性均会产生不利作用,但影响程度会受药物浓度、作用时间的影响。

关键词： 医学细胞生物学   模块化教学   教学效果  

摘要： 目的探讨医学细胞生物学教学整合至细胞与分子基础模块中后,对五年制临床医学专业学员教学效果的影响和评价。方法分别选择模块化教学改革之前和之后的五年制临床医学专业学员的课堂教学效果调查问卷及考试试卷,分析2组学员课堂教学效果和考试成绩的差异。结果医学细胞生物学整合至细胞与分子基础模块中后,能提高学员的课程学习兴趣、综合运用知识点的能力、综合文献讨论课效果及早期接触科研的兴趣,并且理论课、实验课和综合文献讨论课的成绩均有显著提升。结论医学细胞生物学的模块化教学,有利于激发学员的学习兴趣、提高学习效果和学习成绩,值得推广运用。

关键词： 数字化显微网络互动系统   医学细胞生物学   实验教学  

摘要： 数字化显微网络互动系统就是把现代的信息技术聚集在一起,并且应用到高等教育课堂中,让师生可以共享资源,更可运用语音系统进行交流,把存储的图像利用网络系统进行传送,达到图像和资讯可在异地共享的目的。在细胞生物学实验课堂中运用数字化显微网络互动系统,可以解决师生之间沟通障碍,产生良好的师生互动,提高学生的学习的积极性;有助于教师对全体或者成绩较差的学生进行辅导;可以把计算机的图像处理功能和保存功能优势发挥出来,提高了医学细胞生物学实验教学中的效率和沟通能力。

关键词： 细胞生物学   教学改革   探索  

摘要： 细胞生物学是高等院校生物类和医学类专业一门重要的基础专业课程。根据目前郑州轻工业学院细胞生物学课程的教学特点及现状,分析该课程在教学中存在的部分问题,并通过实践探讨相应的教学改革措施。

关键词： 流感病毒   人体免疫   蛋白表达   细胞生物学  

摘要： 背景：Tim-3属于T细胞免疫球蛋白及黏蛋白家族（T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein Tims），2002年Tim-3首次发现于活化的Th1细胞表面。半乳凝素-9（Galectin-9,Gal-9）是Tim-3的配体，广泛表达于多种细胞，Tim-3与其配体结合可显著抑制T细胞的活化和增殖，维持体内免疫耐受。近年来发现Tim-3也表达于天然免疫细胞如巨噬细胞、单核细胞、NK细胞、DC细胞等。各类感染性疾病严重危害患者的生命健康。病毒在感染过程中演化出了一系列的机制抵抗宿主的免疫应答，例如流感病毒能够通过抑制抗病毒免疫效应分子Ⅰ型干扰素（TypeⅠInterferon）的产生而拮抗宿主的抗病毒反应，从而对人畜共患极具危险性。临床研究表明，H7N9感染患者T细胞表面Tim-3表达上调，并且伴有干扰素表达水平的下调[1]；动物实验表明，小鼠感染流感病毒后，肺部的Tim-3表达明显升高。鉴于Tim-3与免疫耐受的关系，阻断Tim-3通路是否增强免疫细胞的抗病毒免疫反应等目前尚不清楚，且是非常值得探讨的课题。Tim-3在免疫相关性疾病临床治疗中的应用前景越来越受到人们的重视，但目前尚没有成熟的干预药物问世。我们实验室在前期制备了能阻断Tim-3与其配体结合的制剂重组人Tim-3-Fc融合蛋白的基础上（已经申请获得国家发明专利），对该融合蛋白的功能进行了进一步的评价，同时本研究还制备了抗人Tim-3抗体，期望能为研发以Tim-3为靶点的生物药物奠定基础。\n 目的：在前期制备重组人Tim-3-Fc融合蛋白的基础上，评价其生物学活性，并进一步制备抗人Tim-3抗体，利用细胞及体外感染模型系统评价Tim-3-Fc融合蛋白及Tim-3抗体在阻断Tim-3生物学功能中的作用，并初步探究其作用的机制，明确将其用作Tim-3干预药物的可行性。\n 方法：⑴基于Tim-3融合蛋白可以竞争性阻断Tim-3与其配体的结合，以表达Tim-3的巨噬细胞系、淋巴细胞系以及人外周血细胞为模型，利用ELISA以及Real-time PCR的方法观察其中炎性因子水平的变化（包括IL-8、IL-2和IFN-γ）以及Ⅰ型干扰素的表达，验证其体外活性。⑵运用制备的人重组Tim-3蛋白，按照常规方法免疫BALB/c小鼠，筛选出阳性克隆，并将阳性杂交瘤细胞打回小鼠体内，抽取腹水并进行纯化制备抗体；⑶鉴定制备的Tim-3单抗的结合特异性；⑷对所制备的单克隆抗体的中和活性进行验证：基于Tim-3抗体可以竞争性结合Tim-3从而阻断其与配体的结合，以表达Tim-3的巨噬细胞系以及人外周血细胞为模型利用ELISA和Real-time PCR的方法检测其中炎性因子及Ⅰ型干扰素的变化；⑸利用人PBMC建立H1N1病毒感染的体外模型，使用Real-time PCR方法测定Tim-3表达量的变化，然后使用Tim-3单抗进行干预，检测病毒载量及Ⅰ型干扰素变化情况，初步探讨其在抗病毒免疫中的作用机制。\n 结果：①鉴定了实验室前期制备的重组人Tim-3-Fc融合蛋白的结合活性，发现其能竞争性的阻断巨噬细胞等细胞表面Tim-3与其配体的结合，增加炎性因子IL-8、IL-2、IFN-γ以及Ⅰ型干扰素的分泌。②抗人Tim-3单克隆抗体制备及鉴定：获得了一株能够分泌具有较好活性的抗人Tim-3单克隆抗体细胞株（克隆号L3G)，其分泌的免疫球蛋白亚型为IgG2a；流式结果表明，该抗体能够结合人巨噬细胞系U937和Jurkat细胞表面的Tim-3分子以及外源转入细胞的Tim-3分子，ELISA结果也表明其可与人Tim-3融合蛋白特异性结合，但流式结果表明，L3G抗体不与小鼠来源的巨噬细胞系（RAW264.7）表面的Tim-3结合，说明其结合活性具有种属特异性；该抗体能够阻断人巨噬细胞系以及外周血细胞中Tim-3的信号，增加炎性因子以及Ⅰ型干扰素的分泌；在H1N1病毒感染的体外模型中，发现随着感染时间的延长Tim-3表达也呈上升趋势，当加入L3G抗体进行阻断后，病毒载量有所下降，并且Ⅰ型干扰素的表达上调，提示其具有一定的增强病毒免疫的作用。\n 结论：⑴重组人Tim-3-Fc融合蛋白在体外细胞模型中具有阻断Tim-3功能的作用；⑵成功制备了一株分泌抗人Tim-3抗体的杂交瘤细胞株，并纯化制备了鼠抗人的单克隆抗体L3G，其与Tim-3的结合具有种属特异性；⑶L3G能阻断Tim-3与其配体的结合从而抑制Tim-3的信号，在体外H1N1病毒感染模型中L3G能增强抗病毒免疫，其作用的机制可能是通过影响Ⅰ型干扰素的表达来调控抗病毒免疫的。

关键词： 皮肤创伤   细胞迁移   蛋白表达   细胞生物学  

摘要： 目的：探讨Hedgehog通路在bFGF促成纤维细胞迁移过程中的重要作用及潜在的分子机制。\n 方法：采用细胞划痕实验，3D球状体侵袭实验，大鼠皮肤创伤模型来检测成纤维细胞迁移，侵袭和皮肤创伤愈合的速度。通过Western blot实验检测受bFGF和Hh通路调控的相关蛋白的表达水平。运用siRNA实验抑制内源性的Smo， Gli1和β-catenin转录表达，同时进一步采用RNA深度测序、转录组学和qRT-PCR分析技术检测在β-catenin干扰后，总转录组的变化情况及对Hh通路相关基因表达的影响。\n 结果：提取bFGF处理后的成纤维细胞中的RNA进行RNA测序。测序实验结果显示，在bFGF处理后，Hh通路关键基因（包括SMO，Patch1，Gli1，Gli2， Gli3）的表达水平都发生了改变。并且发现用 SAG（Smo的激动剂，激活 Hh通路）能促进成纤维细胞的迁移，侵袭和皮肤的创伤愈合，而Cyc（Cyclopamine， Smo的抑制剂，抑制 Hh通路）使成纤维细胞的迁移，侵袭和皮肤创伤愈合的速度都明显减缓。GANT61（Gli1/Gli2的选择性抑制剂）也能明显抑制细胞的迁移，侵袭和皮肤的创伤愈合的速度。Western blot和siRNA转染实验结果显示， SAG能上调AKT和JNK的磷酸化水平及β-catenin在细胞核内的积累量，证明Smo位于PI3K-JNK-β-catenin的上游，进而促进成纤维细胞的迁移。此外，RNA测序和qRT-PCR分析结果显示，β-catenin调控Hh通路关键基因的转录表达（包括SMO，Patch1，Gli1，Gli2，Gli3），进而影响成纤维细胞的迁移。\n 结论：结果显示，Hh通路参与bFGF促成纤维细胞迁移的调控过程，bFGF下游的β-catenin通过调控Smo和Gli1的转录，反馈调节成纤维细胞的迁移。