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关键词： 羊膜   上皮细胞   细胞培养技术   组织工程   干细胞   培养   人羊膜上皮细胞   正交法   生物学特性   冻存工艺  

摘要： 背景:目前人羊膜上皮细胞分离、培养及冻存的研究较为分散,难以形成全面有效的方案以满足未来对移植用干细胞的临床需求。目的:建立人羊膜上皮细胞优化的分离、培养与冻存工艺,并对其生物学特性进行研究。方法:运用正交法研究各因素对人羊膜上皮细胞分离、培养及冻存指标的影响,极差法分析数据得到优化的分离、培养与冻存工艺条件。对人羊膜上皮细胞进行原代与传代培养,通过镜下形态学观察,绘制细胞生长曲线,进行流式细胞术检测、免疫荧光染色及向肝样细胞分化等实验,观察人羊膜上皮细胞的生物学特性。结果与结论:(1)获得优化的人羊膜上皮细胞分离条件为:胰酶浓度0.25%,分4次消化,每次消化时间20 min;优化培养条件为:细胞接种浓度为4×108 L-1,表皮生长因子质量浓度为10μg/L,血清体积分数为5%;优化冻存条件为:细胞冻存浓度为1×1010 L-1,二甲基亚砜浓度为10%,血清体积分数为80%;(2)原代细胞在接种二三天内贴壁生长,贴壁后细胞呈不规则多角形,以铺路石样生长,传代后细胞贴壁与生长速度加快,冻存复苏的传代第2代细胞生长与扩增能力无明显下降;(3)免疫荧光染色显示,原代人羊膜上皮细胞强表达CK19、SSEA-4,不表达Vimentin、CD45和HLA-DR;原代与传代第4代免疫表型检测显示,人羊膜上皮细胞在培养传代过程中有上皮间充质转化现象发生;(4)向肝样细胞分化实验中,免疫荧光染色显示,诱导后的人羊膜上皮细胞肝细胞标志物白蛋白、CK18表达量明显上升,糖原染色显示诱导3周后的人羊膜上皮细胞有糖原合成;(5)结果表明,人羊膜上皮细胞易于获得且体外增殖能力强,表达胚胎干细胞保持未分化状态的表面标志物。

关键词： 桃褐腐病原菌   生物学特性   细胞壁降解酶活力   培养条件  

摘要： 由桃褐腐病原菌(Monilinia fructicola)引起的蟠桃褐腐病是蟠桃采后主要的病害,造成水果采后损失严重。同时,***引起果实采后疾病的发生,因宿主不同,其致病性也不尽相同。以***为对象,研究其在不同环境条件(温度、pH值、光照条件)下的生物学特性和不同培养条件(温度、pH值、培养时间)对***自身产生的细胞壁降解酶活性的影响。结果表明:***孢子萌发和芽管延长的最适pH值为5.0,且偏弱酸性环境更适宜其生长,但是过酸环境其孢子萌发率明显降低;菌落生长的最适温度范围为20~28℃,高于36℃,则菌不能正常生长;温度会影响菌落形态,温度不同,则菌落形态不同;光照对菌落生长影响甚微;内切葡聚糖酶(endoglucanase,EG)、β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(polymethylgalacturonase,PMG)、多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)活力均在28℃条件下最高;pH 6.0时EG、BG酶活力均达到最高;PMG、PG酶活力在pH 7.0时达到最高;EG、BG、PMG、PG在培养5 d时的酶活力最高;在各pH值、温度、培养时间条件下,BG酶活力高于EG酶活力,PG酶活力高于PMG酶活力。

关键词： 替莫唑胺   丙戊酸钠   人脑胶质瘤  

摘要： 目的观察替莫唑胺(TMZ)与丙戊酸钠(VPA)联用对人脑胶质瘤细胞SHG-44和U251生物学行为的影响。方法将细胞分为对照组、VPA单用组、TMZ单用组和VPA-TMZ联用组。分别采用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术AnnexinV-FLUOS染色法检测细胞凋亡;DAPI染色法观察凋亡细胞形态学变化;Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果 VPA-TMZ联用较TMZ/VPA单独用药,能有效抑制人胶质瘤细胞SHG-44和U251的增殖,促进其凋亡且减弱其侵袭能力。结论 VPA可提高人脑胶质瘤细胞对TMZ的敏感性,为临床合理用药提供参考。

关键词： 人肠癌细胞   小干扰RNA   LoVo   Lipofectamine   迁移能力   反转录-聚合酶链反应   Transwell   细胞生物学功能  

摘要： 我们探讨TUG1在多株人肠癌细胞中表达情况及其与肠癌细胞生物学功能的关系。一、材料与方法1．材料：肠癌细胞株HCT116、HCT8、HT29、LS174T、LoVo和SW620购自美国典型菌种保藏中心（ATCC）。Lipofectamine 2000购自Invitrogene公司；针对TUGl的小干扰RNA（siRNA）及无关序列由深圳吉玛公司合成；反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）仪购自美国ABI公司；细胞计数试剂盒（CCK-8）购自上海碧云天生物技术公司；Transwell试剂盒购自B＆D公司。

关键词： MCF-7乳腺癌细胞   OTUD7B   慢病毒感染   增殖   迁移  

摘要： 目的去泛素化酶OTUD7B与肿瘤的发生、发展密切相关。为了明确OTUD7B在乳腺癌中所发挥的作用,实验利用慢病毒构建高表达OTUD7B载体感染MCF-7乳腺癌细胞后对其生物学行为的影响。方法构建带有绿色荧光蛋白标签的人OTUD7B表达质粒的慢病毒(pEGFP-hOTUD7B)及对照(pEGFP-CI)感染MCF-7乳腺癌细胞;于荧光倒置显微镜下观察病毒转染效果及应用蛋白质印迹法及免疫组化法检测OTUD7B的表达水平;MTS法检测实验组(pEGFP-hOTUD7B)、阴性对照组(pEGFP-CI)和正常对照组对MCF-7乳腺癌细胞增殖能力的影响;应用细胞划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果感染病毒后于荧光倒置显微镜下观察病毒感染效率,可见病毒感染成功。应用蛋白质印迹法检测病毒感染率并找出最适病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI),当MOI=30时,实验组、阴性对照组和正常对照组灰度值分别为3.81±0.08、2.12±0.078和2.05±0.15,差异有统计学意义,F=402.03,P<0.001。应用免疫组化法可见感染OTUD7B表达水平。MTS法结果显示,实验组、阴性对照组和正常对照组细胞24hA值分别为0.36±0.08、0.56±0.25和0.69±0.17,F=11.819,P<0.001;48hA值分别为0.65±0.17、1.45±0.48和1.82±0.63,F=23.752,P<0.001;在72hA值分别为0.73±0.21、1.58±0.63和1.99±0.27,F=35.563,P<0.001。细胞划痕试验显示,24h后实验组组迁移率为(7.7±0.91)%,阴性对照组和正常对照组迁移率分别为(13.4±1.52)%和(12.1±1.32)%,F=49.36,P<0.001,48h后实验组迁移率为(12.4±1.29)%,阴性对照组及正常对照组迁移率分别为(32.9±1.71)%和(31.8±1.59)%,F=504.50,P<0.001。流式细胞仪检测细胞凋亡结果提示,实验组与阴性对照组及正常对照组相比明显使细胞阻滞在G_0/G_1期,促进其凋亡,F_(G_0/G_1)期=425.102,F_S期=135.063,均P<0.001。结论成功构建了能够高表达OTUD7B的慢病毒载体,明显抑制了MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移,并促进了其凋亡。

关键词： 细胞生物学   细胞形状   组织工程   生物材料   细胞排列   微接触印刷技术   干剥离技术   沟槽阵列   微柱阵列   微孔阵列   微波阵列   纤维支架   国家自然科学基金  

摘要： 背景:精确控制细胞形状、实现细胞体外排列对细胞生物学、组织工程和再生医学研究及应用均有极其重要的意义,而目前对控制细胞几何形状和诱导体外排列的方法缺乏系统性的研究和表述。目的:总结并讨论表面化学修饰技术、表面拓扑学改造技术加工制备细胞生长基底的方法,以及实现细胞形状和排列控制的可行性和最新进展。方法:作者检索1995至2017年百链云数据库和Pub Med数据库中与微加工方法对细胞形状和体外排列影响相关的文献,并进行系统整理、归纳总结和分析。结果与结论:随着微纳米加工技术的发展和对细胞生物学行为的深入研究,表面化学修饰、表面拓扑学改造、纤维支架等方法逐步被建立,以实现细胞形状的精确控制和体外排列。表面微图案化、微柱、微孔阵列等拓扑结构能够精确控制细胞几何形状,而基底表面拓扑形貌对细胞排列占据更重要的支配作用,可将基底表面化学修饰作用和拓扑形貌作用相结合更好地实现细胞体外排列。合适的基底结构可用于精确控制细胞的形状、调控干细胞的分化抑或诱导细胞的定向排列、促进细胞融合和分化等。

关键词： Lemur酪氨酸激酶3   A549   增殖   迁移   周期  

摘要： 目的探讨Lemur酪氨酸激酶3(LMTK3)在人肺腺癌细胞系A549中表达下调后对细胞生物学功能的影响。方法采用shRNA(small hairpin RNA)技术干扰A549细胞中LMTK3的表达并用RT-PCR对其进行鉴定,采用细胞增殖实验、划痕实验、Transwell实验及流式细胞术检测LMTK3对肺癌细胞增殖、迁移、细胞周期及凋亡等生物学行为的影响。结果通过shRNA技术成功构建LMTK3表达下调的肺癌细胞系shLMTK3及对照组Scramble。细胞增殖实验结果显示,在培养24、48、72h后,shLMTK3组细胞的增殖水平(0.305±0.018,0.461±0.044,0.74±0.029)明显低于Scramble组(0.354±0.011,0.551±0.027,0.881±0.028),差异均有统计学意义(t分别为5.24,3.91,7.70,P均<0.01);划痕试验结果表明,划痕24 h后的shLMTK3组细胞相对倍数(0.51±0.096)明显低于Scramble组(1.00±0.029),差异有统计学意义(t=4.81,P<0.01);Transwell迁移实验结果表明,shLMTK3组迁移到膜下的细胞数[(161±9.29)个]明显低于Scramble组[(308.66±17.60)个],差异有统计学意义(t=7.42,P<0.01);细胞周期检测结果显示,抑制LMTK3的表达可将细胞阻滞于G1期(t=4.35,P<0.05);细胞凋亡试验显示,抑制LMTK3的表达对A549细胞的凋亡率无影响。结论下调A549细胞中LMTK3的表达可明显抑制细胞的增殖及迁移能力,提示肺癌细胞异常表达LMTK3参与调节其肿瘤生物学行为。

关键词： 骨骼肌卫星细胞   鉴定   成神经细胞诱导   成骨诱导   成肌诱导  

摘要： 该文探讨了5、10、15、21、42日龄大鼠骨骼肌卫星细胞(muscle-derived satellite cells,MDSCs)生物学特性。利用二次酶消化法提取MDSCs原代细胞。利用不同的诱导培养液使MDSCs定向分化为神经细胞、成骨细胞和肌细胞,并通过特异性染色和免疫组化法对其进行鉴定。结果显示,5、10、15、21日鼠龄大鼠骨骼肌中均可高效分离出原代MDSCs且细胞活力旺盛,42日大鼠MDSCs原代分离困难。以上结果一定程度上拓展了MDSCs的取材范围。第5、10、15、21日大鼠来源MDSCs经成神经细胞诱导后呈多角形、有明显的树突结构且表达神经特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE),证明MDSCs可以分化为神经细胞;经成骨诱导后细胞形成明显的骨节结,茜素红及骨钙蛋白(osteocalcin)染色均呈阳性;经成肌诱导后细胞发生融合形成成熟肌管细胞且表达快肌肌球蛋白。出生后5、10、15、21日大鼠来源MDSCs取材范围广,易于体外分离培养,增殖能力强且具有一定的多能性,适合作为再生医学的种子细胞。

关键词： 学者论坛   开始日期   结束日期   生物物理学   中国科学院   植物生理生态   细胞生物学   上海交通大学   生物学专业   会议网站  

摘要： 所属学科：生物物理学、生物化学及分子生物学,细胞生物学,生物技术与生物工程开始日期：2017-07-01 结束日期：2017-07-02所在城市：上海市 徐汇区 具体地点：中国科学院植物生理生态研究所主办单位：中国科学院植物生理生态研究所。

关键词： 星形胶质细胞   小分子化合物   神经细胞   成人   科学家   上海生命科学研究院   细胞生物学   中国科学院  

摘要： 《干细胞报道》（Stem Cell Reports）在线发表了中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所裴钢研究组利用小分子化合物组合实现将成人星形胶质细胞直接转变为神经细胞的研究成果。