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关键词： 植物血凝素-L   细胞因子诱导的杀伤细胞   苦参碱   胃癌   MGC-803细胞   杀伤活性  

摘要： 目的探讨植物血凝素-L(PHA-L)共诱导制备细胞因子活化的杀伤细胞(CIK)的方法,同时探究新型PHA-CIK细胞联合苦参碱体外对胃癌MGC-803细胞的杀瘤活性效应。方法通过PHA-L共诱导制备新型CIK细胞即PHA-CIK细胞,并比较分析新型CIK细胞与普通CIK细胞的生物学特性;同时采用CCK-8法分别检测普通CIK细胞组、PHA-CIK细胞组、苦参碱组以及PHA-CIK细胞联合苦参碱组(联合组)体外对胃癌MGC-803细胞的杀瘤活性。结果制备新型CIK的方法更能促进细胞增殖(P<0.05),且细胞活率保持在90%以上。与普通方法相比,新方法在CD3^+CD8^+比例方面存在显著差异(P<0.05),且杀伤活性增强(P<0.05)。联合组对胃癌MGC-803细胞的杀伤率明显高于PHA-CIK组和苦参碱组,分别是1.6倍和2.3倍,联合组与PHA-CIK组及苦参碱组相比差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论新型PHA-CIK联合苦参碱可显著提高对胃癌细胞的杀伤活性,为中药联合过继性细胞免疫治疗综合治疗肿瘤提供一种新方法。

关键词： 神经胶质瘤   成纤维细胞生长因子受体   BGJ398   酪氨酸激酶抑制剂  

摘要： 目的探究成纤维细胞生长因子受体（FGVR）抑制剂BGJ398对胶质瘤细胞生长、迁移和侵袭的抑制作用。方法（1）将体外常规培养的U87和U251细胞分为BGJ398组和对照组．分别加入含10μmol／LBGJ398的完全培养基和单纯的完全培养基处理，用CCK-8和克隆形成实验检测2组细胞的增殖能力；处理2d后用划痕实验、Transwell迁移实验分别检测2组13251细胞、U87细胞的迁移能力；Transwell侵袭实验检测2组细胞的侵袭能力，Westernblotting检测2组细胞磷酸化（p）FGFR和Vimentin蛋白的表达；（2）将200μLU87细胞（1×10^7个）注入8只BALB／c裸鼠腹部两侧皮下并将裸鼠按随机数字表法分为BGJ398组（n=4）和对照组（n=4）。BGJ398组裸鼠每天口服BGJ398生理盐水溶液（20mg／kg），对照组裸鼠口服等量生理盐水。连续服用15d后比较2组小鼠移植瘤的质量；免疫组化染色检测移植瘤组织Vimentin的表达。结果（1）培养3、4、5d时BGJ398组U87细胞的吸光度值低于对照组：培养2、3、4、5d时BGJ398组U251细胞的吸光度值低于对照组；培养10d后BGJ398组U87细胞和U251细胞形成克隆的数量明显少于对照组；划痕后48hBGJ398组U251细胞的迁移距离比对照组明显减少；培养24h后BGJ398组迁移的U87细胞数较对照组明显减少；培养48h后BGJ398组穿过孔膜的U87细胞和U251细胞较对照组明显减少：BGJ398组U87细胞和U251细胞中pFGFR和Vimentin蛋白的含量明显少于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）BGJ398组裸鼠皮下肿瘤的质量[（0，186±0．064）鲥较对照组[（0．450±0．106）g]明显减轻；BGJ398组裸鼠皮下移植瘤Vimentin的表达（2．503±0．359）较对照组（4．125±1．155）明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论体内外实验均证实BGJ398可以抑制胶质瘤细胞的生长、迁移和侵袭，提示FGFR是治疗胶质瘤的有效靶点之一。

关键词： 胶质瘤   U87   传代次数   侵袭能力  

摘要： 目的探索不同传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响及其分子机制。方法以两种不同传代次数的U87(I)、U87(II)为研究对象,使用MTT细胞增殖实验、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验分别检测U87细胞的增殖、迁移和侵袭能力;使用Western Blot技术检测U87(Ⅰ)及U87(Ⅱ)的CTHRC1,FOXM1,PLOD2,MMP9,TGF-β,E-cadherin,Slug,Snail,Vimentin,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt的表达量差异。结果 U87(Ⅰ)较U87(Ⅱ)更容易形成网状结构,有更强的侵袭能力,但在增殖和迁移能力上二者无明显差异。在EMT相关蛋白表达水平上,U87(Ⅰ)中的Snail、Vimentin的表达量较U87(Ⅱ)的高,而E-Cadherin、Slug则较低;在PI3K/Akt通路蛋白表达水平上,U87(Ⅰ)的p-Akt,Akt的表达量均低于U87(II),而p-PI3K的表达量却高于U87(II),两者在PI3K的表达量上无明显差异;除此之外,U87(I)中PLOD2、CTHRC1及MMP9的表达量也明显高于U87(II),而TGF-β的表达量则低于后者。结论随着传代次数的增加,U87细胞在侵袭能力以及多个促癌基因表达上发生了变化,这可能造成分子机制研究的前后结果不一致,降低结果的可信程度,因此研究人员在进行细胞系实验时,应尽可能在短时间内,使用同一批次细胞完成生物学特性、分子机制研究,以减少传代次数对肿瘤细胞系生物学特性以及基因表达的影响。

关键词： 外周血造血干细胞   微泡   免疫调节   造血  

摘要： 目的:探讨正常人外周血造血干细胞(PB-HSC)分泌的微泡(microvesicle,MV)的免疫调节功能及对造血集落形成的影响。方法:采用密度梯度离心法分离PB-HSC并培养,收集第48 h上清液,使用超速离心法分离提取MV。通过电子显微镜观察MV形态;采用BCA法定量检测MV蛋白分泌量;采用流式细胞术检测其表面标志物。将MV与正常人外周血单个核细胞(PB-MNC)共培养,共培养12 h后通过共聚焦扫描电子显微镜观察MV与PBMNC的作用方式;共培养48 h后采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)法检测上清中IL-2,IL-6,IL-8,IL-10,IFN-γ及TNF-α的分泌量;采用流式细胞仪检测T细胞亚群、T细胞激活变化及不同亚群细胞胞内细胞因子染色情况。用甲基纤维素半固体培养基检测MV及MV与PB-MNC共培养48 h后上清液对外周血造血干细胞集落形成的影响。结果:电子显微镜观察分离得到的MV为卵圆形膜性小囊泡,BCA法检测MV蛋白分泌量为29-110μg。流式细胞术测得MV带有混合标志,其中高表达特异性标志CD63(85.86%)与干细胞标志CD34(33.52%)。共培养12 h后共聚焦扫描电子显微镜显示,MV与PB-MNC二者相融合。共培养48 h后,ELISA法检测结果表明,MV可促进PB-MNC分泌IL-6,IL-8,IL-10与TNF-α,而IL-2和IFN-γ水平均无变化明显。流式细胞术结果显示,T细胞亚群及T细胞的激活无明显改变。胞内因子染色结果表明,CD11c+细胞内IL-8因子显著增多。集落培养实验表明,MV及MV与PB-MNC共培养48 h后上清液可促进造血集落形成。结论:PB-HSC来源的MV具有免疫调节及促进造血集落形成的作用。

关键词： 宫颈癌   hsa-miR-214-3p   增殖   凋亡   迁移  

摘要： 目的:探讨hsa-miR-214-3p对宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响以及可能的作用机制。方法:将hsamiR-214-3p mimics/inhibitor转染SiHa细胞,分析过表达和下调内源性hsa-miR-214-3p的表达对SiHa细胞增殖、迁移、凋亡的影响。用TargetScanHuman7.1、Pictar、miRanda、miRTarBase以及DAVID数据库进行靶基因预测和富集通路分析。结果:hsa-miR-214-3p在宫颈癌细胞中呈高表达;过表达hsa-miR-214-3p后,细胞的增殖和克隆形成能力明显增强(P<0.05);而当抑制内源性hsa-miR-214-3p的表达后,细胞的增殖能力则明显减弱(P<0.001),流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示SiHa细胞的凋亡比例明显上升(P<0.05),Western Blot的结果显示Bcl2蛋白的表达显著下降(P<0.05);过表达hsa-miR-214-3p和抑制内源性hsa-miR-214-3p表达对SiHa细胞的迁移均没有显著的影响(P>0.05);生物信息学分析结果显示,hsa-miR-214-3p的靶基因主要富集在磷脂酰肌醇信号系统以及Wnt信号通路等。结论:过表达hsa-miR-214-3p可以促进宫颈癌细胞的增殖;抑制内源性hsa-miR-214-3p的表达可以抑制SiHa细胞的增殖并促进细胞凋亡;hsa-miR-214-3p可能通过调节Bcl2基因的表达来调控SiHa细胞的凋亡进程。上述结果为宫颈癌分子机制的研究提供了新线索,同时也为宫颈癌的临床诊断与治疗提供潜在靶点。

关键词： 肽基脯氨酰同分异构酶(Pin1)   SiHa细胞   宫颈癌   侵袭   转移  

摘要： 目的探讨肽基脯氨酰同分异构酶(peptidyl-prolylcis/trans isomerase,Pin1)基因对子宫颈癌SiHa细胞生物学性能的影响。方法实验设立4组:空白对照组(正常培养的SiHa细胞)、阴性对照组(SiHa细胞转染随机序列)和Pin1siRNA1组、Pin1siRNA2组(转染siRNA序列1、2),采用基因RNA干扰技术下调子宫颈癌SiHa细胞中Pin1的表达;qRT-PCR和Western blot法检测Pin1 mRNA和Pin1蛋白水平的变化。Transwell小室体外实验检测Pin1基因对SiHa细胞侵袭、迁移能力的影响;应用流式细胞术分析其对SiHa细胞周期及凋亡的影响。结果 SiHa细胞转染基因Pin1siRNA干扰SiHa细胞后Pin1mRNA和Pin1蛋白表达水平明显降低;Transwell小室体外实验表明,Pin1siRNA1、Pin1siRNA2组蛋白表达下调后细胞侵袭、迁移能力降低;流式细胞术结果提示,与空白对照组、阴性对照组相比,Pin1基因被干扰后细胞阻滞在G0/G期,细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。结论降低Pin1表达能明显抑制宫颈癌细胞的侵袭、迁移能力。Pin1参与了SiHa细胞的凋亡过程,并且随Pin1表达量的高低来调控肿瘤细胞的周期和凋亡程度。

关键词： 前列腺癌   盘状结构域蛋白1   凋亡   增殖  

摘要： 目的观察下调盘状结构域蛋白1(DDR1)对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响并探讨其可能的机制。方法采用免疫组织化学法检测前列腺组织中DDR1的表达情况。将PC-3细胞分为3组,实验组转染DDR1-shRNA重组质粒,对照组转染小干扰RNA,未转染组为正常细胞,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增值能力,TUNEL法检测细胞的凋亡,Transwell小室检测细胞的侵袭能力变化,Western blot法检测细胞内DDR1、AKT、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及bcl-2蛋白表达的变化。结果 DDR1蛋白的表达与前列腺癌患者的年龄、前列腺体积及总前列腺特异抗原(TPSA)无关(P>0.05),与Gleason评分、淋巴结转移及分期有关(P<0.05)。与未转染组及对照组相比,实验组的细胞凋亡率增高、增殖受到抑制、侵袭能力减弱,细胞内DDR1、AKT、MMP-2及bcl-2蛋白表达水平均降低。结论 DDR1蛋白表达与前列腺癌的进展相关,下调其表达可抑制前列腺癌PC-3细胞的恶性生物学行为,这可能与AKT、MMP-2及bcl-2蛋白表达的变化相关。

关键词： 卵巢上皮性癌   细胞生物学特性   基因表达   生殖系统恶性肿瘤   妇科恶性肿瘤   5年生存率   死亡原因   发达国家  

摘要： 卵巢上皮性癌（卵巢癌）是常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一，其病死率在妇科恶性肿瘤中位于首位，在发达国家女性死亡原因中排名第5位，严重威胁女性的生命及健康。卵巢位于盆腔深部，卵巢癌早期常无明显的临床症状，不易发现；晚期发现时常伴有转移，5年生存率低，仅为25％～30％。

关键词： 畸胎瘤细胞源性生长因子   喉鳞癌  

摘要： 目的研究RNAi沉默畸胎瘤细胞源性生长因子(PCDGF)表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法 RT-PCR检测喉鳞癌组织中PCDGF的mRNA表达水平;Hep-2细胞分为空白对照组、阴性对照组和PCDGF-siRNA组,Western blot检测转染效果及Bcl-2、Bax、E-cadherin和MUC1蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果喉鳞癌组织中的PCDGF mRNA表达水平显著高于声带息肉组织(t=6.88,P=0.005)。PCDGF在喉鳞癌组织中高表达。PCDGF-siRNA组喉鳞癌Hep-2细胞中PCDGF、Bcl-2、MUCI蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05),Bax、E-cadherin蛋白表达显著高于空白对照组(P<0.05),细胞增殖率显著低于空白对照组(P<0.05),细胞侵袭数显著低与空白对照组(P<0.05),细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05)。结论抑制PCDGF的表达能够抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞发生凋亡。

关键词： 胃癌   细胞学   类载脂蛋白C—I  

摘要： 目的观察类载脂蛋白C—I对胃癌细胞株的生长抑制作用。方法使用荧光素标记的类载脂蛋白C—I与HGC-27、MGC-803细胞悬浮液混合进行孵育，于荧光显微镜下观察目标蛋白的摄取。5组加入含不同浓度类载脂蛋白C-I（0．1、0．5、1．0、1．5、2．0μg/μl）的培养基，另设对照组与空白组。取3个不同时间点（24、48、72h），细胞计数试剂盒（CCK-8）试剂孵育1．5h，采用450nm波长处检测吸光度值。结果随浓度增加（0．1、0．5、1．0、1．5、2．0μg／μl）类载脂蛋白C-I对胃癌细胞株HGC27的抑制率（24h：5．29％、15．11％、53．40％、82．12％、90．43％，P=0．002；48h：8．82％、21．91％、58．94％、86．45％、94．46％，P=0．002；72h：11．08％、29．72％、68．51％、87．91％、95．72％，P=0．003）和MGC803的抑制率（24h：4．03％、13．35％、43．32％、78．84％、91．44％，P=0．001；48h：7．56％、29．72％、63．22％、86．62％、93．45％，P=0．001；72h：9．32％、35．77％、74．81％、86．90％、98．74％，P=0．004）差异有统计学意义。结论类载脂蛋白C—I对胃癌细胞株具有杀伤作用，可能作为一种新型的蛋白类抗肿瘤药，成为胃癌治疗的新型药物，也可能在其他类型肿瘤的治疗中发挥重要作用。