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关键词： 皮肤鳞状细胞癌   小干扰RNA   小发夹RNA   NET-1  

摘要： 目的:比较小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)和小发夹RNA(small hairpin RNA,sh RNA)敲降皮肤鳞癌细胞株(A431)中NET-1基因的表达,及其对癌细胞增殖、浸润的影响。方法:分别构建针对人NET-1基因的si RNA NET-1真核表达载体(p U6H1-GFP-si RNA NET-1,si RNA NET-1)和sh RNA真核细胞表达质粒(psilencer4.1-sh RNA NET-1,sh RNA NET-1),同时构建相应载体的随机序列(target-off)的对照质粒(sh RNA target-off和si RNA targetoff)。体外瞬时转染A431细胞,通过实时定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)、Western Blot分别检测癌细胞内NET-1 m RNA和蛋白的表达,免疫荧光染色在镜下观察NET-1蛋白在细胞内的表达;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法和流式细胞术检测细胞增殖;划痕试验和Transwell试验分别检测A431细胞的迁移和侵袭能力,比较si RNA和sh RNA对NET-1基因的抑制效果。结果:测序证实编码NET-1序列的si RNA和sh RNA已经分别插入载体p U6H1-GFP和psilencer4.1的启动子之间,测序结果符合设计要求。转染si RNA NET-1和sh RNA NET-1后,均能显著下调A431细胞NET-1 m RNA和蛋白的表达水平,显著抑制A431细胞的增殖、迁移和浸润,与对照组(target-off)比较差异均有统计学意义(均P<0.005)。在细胞生长曲线分析中显示转染sh RNA NET-1组在72 h后抑制细胞增殖的效果强于si RNA NET-1组。结论:NET-1基因的功能与A431细胞增殖、迁移、浸润有关。靶向NET-1的si RNA和sh RNA真核表达载体均能特异、有效地下调NET-1基因的功能。sh RNA介导的RNAi作用能更长期、稳定的抑制目的基因的表达,更适合于对目的基因功能进行长期研究。

关键词： 骨形态发生蛋白2   骨质疏松   骨髓间充质干细胞   成脂分化   动物实验,大鼠  

摘要： 目的探讨骨形态发生蛋白2(BMP-2)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导成脂分化后BMSCs细胞形态学的影响,确定BMP-2抑制BMSCs成脂分化的优选浓度。方法抽取大鼠的骨髓,体外用贴壁培养法获得原代BMSCs,流式细胞仪检测P2细胞表面抗原标志物;实验取第二、三代细胞,设计5个实验组及1个对照组:实验组第一阶段用成脂诱导液诱导3d,第二阶段在成脂诱导液中分别添加BMP-2 0.5、5.0、50.0、100.0、200.0ng·mL^(-1)继续诱导14d;而对照组始终用BMSCs培养基培养。各组经诱导后第17天用油红O染色,观察细胞脂滴染色情况及检测细胞成脂OD值,显微镜下观察细胞形态的变化。结果流式细胞术结果显示P2细胞表达CD44、HLA-ABC、CD105分别为95.5%、96.8%和92.0%,而阴性抗原CD34、CD45表达分别为0.683%和0.377%。油红O染色图片显示:BMP-2在0.5~50.0ng·mL^(-1)的质量浓度下脂滴数呈现增多趋势,而在100.0~200.0ng·mL^(-1)的质量浓度下脂滴数呈下降趋势。实验组BMP-2 50.0ng·mL^(-1)的脂肪定量OD值>BMP-2 0.5ng·mL^(-1)的脂肪定量OD值,而BMP-2 200.0ng·mL^(-1)的脂肪定量OD值0.05)。结论通过贴壁培养可获得高纯度BMSCs。BMP-2质量浓度低于100ng·mL^(-1)时,具有诱导BMSCs成脂分化的能力;BMP-2质量浓度超过100ng·mL^(-1),则可以抑制BMSCs成脂分化,从而减少大鼠脂肪细胞的形成。

关键词： 椎间盘退变   髓核间充质细胞   氧浓度   生物学特性  

摘要： 目的 :分离培养髓核来源的间充质干细胞(MSCs),比较不同氧浓度下细胞的生物学特性,探讨氧浓度对椎间盘退变机制的影响。方法:用胶原酶消化法从手术摘除的4个腰椎间盘(椎间盘Pfirrmann分级为Ⅰ级或Ⅱ级)髓核组织中分离MSCs,体外培养、传代,观察记录细胞形态。取P3代细胞,用流式细胞仪对分离得到的细胞表面抗原CD90、CD73、CD105、CD44和CD31、CD34、CD45的表达情况进行检测;用成骨、成脂、成软骨培养液诱导培养细胞,分别在21d、28d、21d时用茜素红、油红O、甲苯胺蓝对细胞进行染色,观察其成骨、成脂、成软骨能力。在三气培养箱的低氧条件(2%O_2、5%CO_2、37℃)和常规细胞培养箱的常氧条件(20%O_2、5%CO_2、37℃)下分别培养P3代细胞。通过细胞计数统计培养1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、8d时的细胞数量,比较不同氧浓度下细胞的生长曲线;使用Architect c8000自动生化检测仪检测培养1d、2d、3d、4d、5d时培养基的pH值和渗透压。实时荧光定量(q RT-PCR)检测不同氧浓度培养下细胞的干性基因POU家族类别5同位序列1(POU5F1,OCT4)、NANOG同位序列(NANOG)、性别决定区Y盒2(SOX2)及扩增基因细胞周期蛋白D1(Cyclin D1,CCND1)、MYC(c-Myc)、低氧诱导基因低氧诱导因子2α(HIF2α,EPAS1)、能量基因三磷酸腺苷合成酶(ATP5A1)、线粒体相关基因细胞色素c氧化酶Ⅳ亚基1型同工酶(COX4I1)、线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体编码细胞色素c氧化酶Ⅰ(MT-CO1)、MT-CO_2的mRNA表达情况。结果:分离培养的细胞呈典型的单层贴壁生长,纺锤样;P3代细胞免疫表型鉴定显示MSCs表面分子标记高表达CD90(80.4%)、CD73(99.9%)、CD105(99.8%)、CD44(95.9%),低表达CD31(5.3%)、CD34(4.4%)、CD45(6.8%);茜素红、油红O染色、甲苯胺蓝染色证实细胞可向骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞分化。根据国际干细胞治疗协会(ISCT)有关MSCs的判定标准,分离培养的细胞为髓核MSCs(NPMSCs)。低氧环境下培养的细胞形态更小,更接近原始MSCs,细胞增殖更快,低氧时倍增期为31.22±1.98h,常氧时倍增期为39.56±2.02h,差异有统计学意义(P<0.05)。不同氧浓度各时间点培养基的pH值、渗透压差异无统计学意义(P>0.05),且皆在适合细胞生存的范围。低氧培养下POU5F1(OCT4)、NANOG、SOX2、CCND1、MYC(c-Myc)、EPAS1、ATP5A1较常氧培养时显著性升高(P<0.05);COX4I1、TFAM、MT-CO1、MT-CO_2较常氧培养时显著性降低(P<0.05)。结论 :低氧条件下培养有利于人NPMSCs的细胞形态、干性基因、增殖能力等生物学活性的维持。

关键词： 唾液腺   腺样囊性癌   Maraviroc   趋化因子受体CCR5   嗜神经侵袭  

摘要： 目的探讨CCR5拮抗剂Maraviroc对人唾液腺腺样囊性癌(SACC)细胞运动、趋化、侵袭及增殖的影响。方法采用体外划痕、趋化、侵袭及增殖实验,观察Maraviroc对SACC-83和SACC-LM细胞的运动、趋化、侵袭及增殖能力的影响。结果与对照组比较,加入Maraviroc预处理的实验组细胞划痕模型愈合速度明显降低;趋化和侵袭实验中,穿越多聚碳酸酯膜的细胞数明显减少;增殖实验结果显示可明显抑制SACC-83和SACC-LM细胞增殖。结论 Maraviroc可能是一种新的靶向抗肿瘤药物,小分子剂量的临床应用可能会抑制SACC的发展。

关键词： 细胞生物学教学   诺贝尔奖解读   双语教学   教学会议  

摘要： 细胞生物学是生命科学的基础学科和前沿学科,细胞生物学教学在生命科学本科教学中占有非常重要的地位。目前国内很多高校多采用翟中和等主编的《细胞生物学》为教学参考资料,在生命科学领域的本科教育中,相关领域的诺贝尔奖成果和英文文献已经成了非常重要的教学资源,而全国性细胞生物学学术和教学会议,不仅推动了科研的发展,而且对教学起到了重要的促进作用。本文从以上几个方面,总结了将主教材、诺奖解析、英文文献、学术会议与教学会议相关资源的相结合,开展地方性本科细胞生物学教学改革工作。

关键词： 锁骨颅骨发育不全综合征   上海交通大学   课题组   医学院   重建   合作   医院   细胞生物学  

摘要： 上海交通大学医学院附属第九人民医院儿童口腔科汪俊课题组和中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所邹卫国课题组共同合作发现骨发育与重建及锁骨颅骨发育不全综合征的新机制，即雷帕霉素靶蛋白复合物（mTORCl）可通过调节成骨细胞中Runx2的表达影响骨骼系统的发育。

关键词： Z38   人乳腺癌   细胞增殖   CD44^+/CD24^-  

摘要： 为探讨稳定干扰长非编码RNA基因Z38对乳腺癌细胞BT549的影响,向BT549细胞转染干扰Z38表达的慢病毒,经嘌呤霉素筛选获得稳定干扰的细胞,采用RT-PCR检测Z38的表达水平、MTT法检测细胞增殖及耐药性、克隆法检测细胞集落形成能力、碘化丙啶染色方法分析细胞周期、流式细胞术分析肿瘤干细胞标志物CD44和CD24的表达.结果表明,特异性的慢病毒能显著降低Z38表达水平,使细胞增殖能力、抗化疗药物能力及细胞集落形成能力显著降低,导致G_2/M期细胞数目显著减少,细胞周期受阻,并且显著降低了CD44^+/CD24^-细胞群百分比而导致细胞的肿瘤干细胞特性降低.

关键词： 牙髓干细胞   再生医学   组织工程   高龄老年人   高龄老年人牙髓干细胞  

摘要： 目的:对高龄老年人牙髓干细胞进行分离培养,探讨其生物学特性。方法:应用联合酶消化法,分离培养一例88岁老年男性患者右上第三磨牙的牙髓细胞,进行原代培养并传代,流式分析鉴定,体外培养观察细胞的形态、增殖、分化能力。结果:首次成功分离培养高龄老年人牙髓干细胞;倒置相差显微镜下可见细胞透亮,呈长梭形;流式细胞学分析显示,体外培养的老年人牙髓干细胞阳性表达间充质干细胞标记CD73、CD90、CD105,不表达造血干细胞和内皮细胞标记CD14、CD19、CD34、CD45及H LA-DR;细胞活力良好,可成骨向分化。结论:高龄老年人牙髓组织中存在牙髓干细胞,活力良好,具有一定的分化潜能。

关键词： 细胞生物学   PI3K/AKT   AKT抑制剂   骨髓增殖性肿瘤  

摘要： 目的:研究AKT抑制剂对骨髓增殖性肿瘤(MPN)的治疗效果及其意义。方法:逆转录病毒感染介导MPL W515L过表达,构建M PN细胞模型。蛋白印迹实验检测信号通路的组成型活化。AKT信号通路抑制剂处理细胞并行细胞计数法,应用克隆形成单位试验检测MPN细胞的增殖。Annexin V染色检测细胞凋亡,Brd U法检测细胞周期。应用动物生存实验分析AKT信号通路抑制剂对MPN小鼠模型存活率的影响。结果:MPL W515L过表达可以显著活化PI3K/AKT、JAK/STAT等信号通路。阻滞上述信号通路能够抑制MPN细胞模型的增殖、促进凋亡,其中以PI3K/AKT抑制剂效果最显著,并使G1ME细胞处于有丝分裂S期的比例减少、处于G_1/G_0期的比例升高,显示出细胞周期阻滞功能。同时,在MPN病人的血液样本中,阻滞PI3K/AKT也能够抑制骨髓祖细胞的克隆形成单位,并显著增加动物模型的存活率。结论:AKT是骨髓增殖性肿瘤的治疗靶点。

关键词： 学会秘书长   细胞生物学   直辖市   论坛   医科大学   贵州省   实验中心   组织工程  

摘要： 7月13日，2017年全国各省、直辖市细胞生物学学会秘书长论坛在贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心召开。本期论坛由中国细胞生物学学会主办，贵州省细胞生物学学会和贵州医科大学共同承办。