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关键词： 胃癌干细胞   CD44   自我更新   侵袭   耐药  

摘要： [目的]探讨胃癌干细胞中差异表达microRNA及其对胃癌干细胞生物学特性(自我更新、侵袭、耐药能力)的调控作用。[方法]采用无血清悬浮培养法和干细胞标志物流式分选术分离人胃癌干细胞;分别采用胃癌细胞球形成实验、体外侵袭、耐药实验鉴定胃癌干细胞的生物学特性;microRNA表达谱芯片检测人胃癌干细胞中差异表达microRNA;采用定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测相关差异表达microRNA的表达情况,验证microRNA芯片结果;相关microRNA抑制剂干扰后,分别进行胃癌细胞球形成实验、体外侵袭与耐药实验检测microRNA对人胃癌干细胞自我更新、侵袭、耐药能力的影响。[结果 ]成功分离得到人胃癌干细胞CD44(+)亚群,其具有典型的肿瘤干细胞生物学特性:较强的自我更新能力、侵袭和耐药能力。与CD44(-)细胞亚群相比,人胃癌干细胞CD44(+)细胞亚群高表达miRNAs共有17个;低表达miRNAs共有33个。采用q PCR技术验证microRNA表达谱芯片相关结果,得到:CD44(+)亚群中miR-196a-5p、miR-155-5p、miR-30a、miR-30b、miR-30c表达上调,miR-1246、miR-195-5b表达下调。抑制相关高表达microRNA(miR-196a-5p、miR-155-5p、miR-30a、miR-30b、miR-30c)表达后,肿瘤干细胞的自我更新能力、侵袭和耐药能力均下降。[结论 ]胃癌干细胞中具有多种差异表达microRNA,microRNA对胃癌干细胞生物学特性具有调控作用。

关键词： 前列腺癌   雌激素受体β   RNA干扰   生物学行为  

摘要： 目的探讨雌激素受体β(ERβ)干扰质粒对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响,以及ERK1/2信号通路在其中的作用。方法针对ERβ特定靶定位置,构建干扰质粒psilencer-2.1-U6-neo-sh ERβ(sh ERβ),利用Lipofectemine2000作为载体将sh ERβ转染PC3细胞,采用G418筛选稳定低表达ERβ的PC3细胞。Real-time PCR及Western blot检测ERβ的表达。实验分为空白对照组、阴性对照组、sh ERβ组,将3组细胞注射在裸鼠皮下建立移植瘤模型,空白对照组未加入任何处理因素;阴性对照组转染空质粒psilencer-2.1-U6-neo;sh ERβ组转染重组质粒psilencer-2.1-U6-neo-sh ERβ。绘制肿瘤生长曲线和称取瘤重;应用免疫组织化学检测肿瘤组织ERβ的表达及ERK1/2活化;应用Western blot检测肿瘤组织VEGF的表达。结果测序比对分析表明成功完成了干扰质粒psilencer-2.1-U6-neo-sh ERβ的构建,Real-time PCR及Western blot结果显示成功转染并筛选出稳定低表达ERβ的PC3细胞。体内成功建立PC3细胞裸鼠移植瘤模型,移植瘤生长曲线显示sh ERβ组移植瘤生长速度明显快于其他两组。免疫组化结果显示ERβ阳性表达sh ERβ组最低;ERK1/2阳性表达在3组之间无明显差异,p-ERK1/2阳性表达sh ERβ组最高(P<0.05)。Western blot结果显示sh ERβ组VEGF蛋白表达明显高于其他两组(P<0.05)。结论 ERβ可通过抑制ERK1/2信号通路活化来抑制前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为。

关键词： 细胞生物学   实验教学   医学实验技术专业   有丝分裂  

摘要： 在医学实验技术专业本科生中,以日用化学品对蚕豆等植物的根尖细胞有丝分裂的影响为题,进行细胞生物学开放性实验的教学实践。探讨实验选题与课程的相关性,统筹安排实验实施,课程教师和导师双身份带教,科研和教学实验室共开放。细化教学环节,分析教学效果,提出教学反思,为该专业开放性实验教学模式的建立进行有益探索,推动实验教学改革的发展。

关键词： NOTCH1   RNA干扰   多发性骨髓瘤   RP-MI   8226细胞  

摘要： 目的:探讨沉默NOTCH1基因对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226增殖和凋亡的影响。方法:针对人NOTCH1基因序列构建NOTCH1 shRNA真核表达载体,用LipofectamineTM2000脂质体转染RPMI 8226细胞,筛选出最佳干扰表达载体。观察NOTCH1 shRNA表达载体对RPMI 8226细胞增殖的影响;使用流式细胞仪分析细胞的周期分布;Western blot法检测NOTCH1 shRNA转染RPMI 8226细胞后NOTCH1蛋白及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P27、P21的表达含量变化,ELISA法检测NOTCH1 shRNA转染RPMI 8226细胞后对IL-6分泌量的影响。结果:沉默NOTCH1基因抑制细胞增殖,阻滞RPMI 8226细胞于G0/G1期,转染组、阴性对照组及空白组增殖率分别为(49.09±2.31)%、(91.73±2.67)%、(98.10±0.41)%,差异具有统计学意义(P<0.05);三组的G0/G1期细胞分别为(66.23±3.71)%、(42.27±3.65)%、(40.70±0.92)%(P<0.05);三组S期细胞分别为(31.03±1.49)%、(56.53±1.76)%、(51.83±1.45)%(P<0.05)。NOTCH1 shRNA诱导细胞凋亡,三组凋亡率分别为(46.67±1.31)%、(1.37±0.63)%、(0.85±0.43)%(P<0.05);转染组NOTCH1蛋白表达下调,P21、P27表达上调。NOTCH1 shRNA可下调与疾病相关的IL-6分泌能力。三组IL-6分泌的吸光度值分别为28.18±3.50、167.08±7.97及185.86±5.61(P<0.05)。结论:NOTCH1 shRNA能抑制RPMI 8226细胞增殖并诱导凋亡,下调与多发性骨髓瘤发病有关的IL-6,有望成为多发性骨髓瘤治疗的一个新靶点。

关键词： 病例教学法   讲授式教学法   细胞生物学  

摘要： 细胞生物学是医学教育中一门重要的基础课程,其内容繁多、琐碎且枯燥,单一的传统讲授式教学已不能满足教学需要。我们结合本校实际情况,采用病例教学与讲授教学相结合教学模式,获得很好的课堂教学效果。

关键词： 舌鳞状细胞癌   小分子RNA干扰   Tiam1   生物学特性  

摘要： 目的:探讨小分子RNA干扰(siRNA)沉默Tiam1基因对舌鳞状细胞癌细胞生物学特性的影响。方法:培养人舌癌细胞SCC-4,随机分为siRNA-Tiam1组、siRNA-对照序列组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术和Western blot法检测不同转染组细胞中Tiam1基因和蛋白表达,MTT法检测不同转染组细胞增殖情况,利用流式细胞术检测不同转染组细胞凋亡情况,Transwell法检测不同转染组细胞迁移和侵袭能力。结果:siRNATiam1组细胞中Tiam1基因和蛋白相对表达量均低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);MTT实验结果显示,与siRNA-对照序列组和空白对照组相比,siRNA-Tiam1组细胞24h、48h、72h和96h时A值均降低(P<0.05);流式细胞检测结果显示,siRNA-Tiam1组细胞凋亡率显著高于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-Tiam1组迁移细胞数和侵袭细胞数均低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05)。结论:特异性沉默Tiam1基因可有效抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖能力,加速细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭能力。

关键词： 五味子乙素   甲状腺肿瘤   微RNA-486-5p   细胞凋亡  

摘要： 目的研究五味子乙素对miR-486-5p表达及人甲状腺癌B-CPAP细胞增殖和侵袭的影响。方法实时定量PCR检测人甲状腺癌B-CPAP细胞中miR-486-5p的表达量,Western-blot法检测人甲状腺癌B-CPAP细胞中Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。脂质体转染方法构建过表达miR-486-5p的人甲状腺癌B-CPAP细胞,MTT法检测人甲状腺癌B-CPAP细胞的增殖率,流式细胞仪检测人甲状腺癌B-CPAP细胞的凋亡率。结果与空白对照组比较,随着五味子乙素浓度的增加人甲状腺癌B-CPAP细胞增殖率和Bcl-2表达呈不断降低趋势(P<0.05),miR-486-5p、Caspase-3和Bax表达呈不断增加趋势(P<0.05)。转染miR-486-5p模拟物组的细胞增殖率在转染3 h与4 h后低于转染miRNA模拟物组,细胞凋亡率显著高于转染miRNA模拟物组(P<0.05,P<0.01)。结论五味子乙素可能通过上调miR-486-5p表达,诱导人甲状腺癌B-CPAP细胞发生凋亡,miR-486-5p可作为对人甲状腺癌靶向治疗的靶点。

关键词： 外科   消化系统疾病   细胞生物学   分子生物学   生物化学   内分泌学   消化内镜   发病机制  

摘要： 近二三十年来，随着细胞生物学、分子生物学、生物化学、内分泌学、免疫学等学科的空前发展，许多高精尖技术不断涌现，尤其是消化内镜的飞速发展，使消化系统疾病的病理、病因、发病机制、诊断和防治等取得了很大成就。

关键词： RNA干扰   XBP1基因   口腔鳞状细胞癌   增殖   凋亡   Wnt/β-catenin信号通路  

摘要： 目的:检测口腔鳞状细胞癌组织中X盒结合蛋白1(XBP1)的表达及观察抑制其表达后对人口腔鳞状细胞癌Tca8113增殖凋亡的影响,并探讨其机制。方法:RT-PCR检测42例口腔鳞状细胞癌及癌旁组织中XBP1基因的mRNA表达;NC-siRNA和XBP1-siRNA转染至Tca8113细胞内,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48h后,CCK8实验、流式细胞仪分别检测XBP1基因转染对细胞增殖、凋亡的影响;Western blot检测Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达的变化。结果:口腔鳞状细胞癌中XBP1基因的mRNA表达显著高于癌旁组织(P<0.01);转染XBP1-siRNA能够显著降低XBP1的蛋白表达,降低细胞的存活率,促进细胞的凋亡,上调Cleaved caspase3蛋白表达,下调β-catenin、Cyclin D1蛋白表达(P<0.01)。结论:RNA干扰沉默XBP1基因表达可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低Tca8113增殖及诱导细胞凋亡。

关键词： 诱导性多能干细胞   大脑皮质类器官   三维细胞培养   神经再生   干细胞移植   免疫荧光   小鼠  

摘要： 目的利用小鼠诱导性多能干细胞(iPSCs)建立大脑皮质类器官并分析其生物学特性。方法首先将生长在饲养层细胞上的iPSCs克隆消化成单细胞,悬浮培养使其自发形成拟胚体。随后,对其进行神经上皮分化的诱导。在合适时间将其嵌入Matrigel基质胶做的悬滴中,摇动培养,形成大脑皮质类器官;最后利用免疫荧光、Dio示踪、透射电子显微镜等技术检测大脑皮质类器官的生物学特性。结果大脑皮质类器官有神经上皮、神经元及神经胶质细胞的分化特征;具有简单的片层化结构,如皮质板和分子层,且大脑皮质类器官具有神经再生及修复能力。结论利用iPSCs成功建立了大脑皮质类器官模型,且该模型具有与活体大脑皮质相似的特征,且具有神经再生能力。