教学课程资源库 更多>>

关键词： 应用型人才培养   实验教学体系   细胞生物学   改革   细胞培养技术   生物学实验   课程教学体系   自主设计实验  

摘要： 细胞生物学实验是应用生物学的一门必修课。然而,长期以来因其实验内容陈旧、教学模式单调、综合性实验欠缺、考核指标和体系单一、细胞培养技术训练缺失、课时少以及实验条件受限等特点,限制了其学生的思维、影响授课效果、制约了应用型人才的培养,课程教学体系的改革势在必行。本文就细胞生物学实验教学体系现状进行分析,通过走访、学习、考察、召开座谈会,制定了利于应用型人才培养的细胞生物学实验教学大纲,形成包括经典验证实验、细胞培养技术、自主设计实验及实训实习四个层次的系统性教学体系,并取得一定成效。

关键词： 鼻咽癌   瞬时受时电位   增殖   凋亡   细胞周期  

摘要： 目的探讨鼻咽癌组织中瞬时受时电位(TRPC)1的表达情况及其对鼻咽癌细胞生物学特性的影响。方法选择鼻咽癌组织标本80例和鼻咽慢性炎症标本80例;鼻咽癌C666-1细胞分为siRNA TRPC1组、阴性对照组、空白对照组。采用免疫组织化学法测定组织中TRPC1蛋白的表达,采用Western印迹检测细胞中TRPC1蛋白的表达,采用RT-PCR测定细胞中TRPC1 mRNA的表达,采用Transwell实验测定细胞的侵袭能力。结果鼻咽癌组TRPC1蛋白阳性率高于鼻咽慢性炎症组(P<0.05)。si-TRPC1组C666-1细胞中TRPC1蛋白和TRPC1 mRNA的表达量均低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。第3天和第5天si-TRPC1组C666-1细胞OD值低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。si-TRPC1组C666-1细胞G1期比例高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),S期比例低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。si-TRPC1组C666-1细胞早期凋亡比例高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),C666-1细胞侵袭力低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论鼻咽癌组织中TRPC1蛋白呈高表达,沉默TRPC1基因后鼻咽癌细胞中TRPC1水平下降,TRPC1能够促进鼻咽癌细胞的增殖和侵袭能力,抑制鼻咽癌细胞凋亡。

关键词： 医学细胞生物学   医学遗传学   评价体系  

摘要： 构建医学细胞生物学与遗传学教与学评价体系。对教师教学工作的评价包括督导评价、教研室评价、学生评价,教师自评;构建形成性考核、阶段测验(或期中考试)、终结性考核相结合的学生评价体系,学生互相评价作为有益补充。教与学评价体系的构建,使教学过程中教与学两个方面都得到了有效的监督和管理。

关键词： 长链非编码RNA   骨肉瘤   结肠癌相关转录物2   增殖   侵袭  

摘要： 目的检测长链非编码RNA（lncRNA）结肠癌相关转录物2（CCAT2）在人骨肉瘤中的表达并观察其对人骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测20例人骨肉瘤患者癌组织及癌旁组织CCAT2的表达和人骨肉瘤MG63细胞与正常成骨细胞hFOB1.19的CCAT2表达。合成针对CCAT2的特异性小干扰RNA（si-CCAT2），通过脂质体介导，将其转染入MG63细胞，实验分为空白对照组、小干扰RNA（siRNA）-NC组、siRNA-1组和siRNA-2组，后利用RT-qPCR技术检测4组细胞中CCAT2的表达量，验证siRNA沉默效果；细胞计数试剂盒（CCK-8）、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的增殖、侵袭和凋亡能力。结果CCAT2在人骨肉瘤组织和正常组织中的相对表达水平为2.448±1.013和1.551±0.769，两者差异有统计学意义（t＝3.295，P＝0.002）；在MG63细胞和hFOB1.19细胞的相对表达水平为2.357±0.157和1.329±0.498，两者差异有统计学意义（t＝2.566，P＝0.020）。沉默细胞中CCAT2后，与NC组（1.064±0.092）和空白对照组（1.076±0.135）比较，siRNA-1和siRNA-2组CCAT2表达量（0.499±0.030、0.519±0.097）明显下降（tsiRNA-1组＝7.248，PsiRNA-1组＝0.002；tsiRNA-2组＝5.814，PsiRNA-2组＝0.004）。降低CCAT2的表达后，MG63细胞增殖活性明显下降，siRNA-1组和siRNA-2组平均细胞侵袭个数为（40.00±2.00）、（38.67±2.08）个，较NC组[（65.00±3.61）个]和空白对照组[（65.33±3.51）个]明显减少（tsiRNA-1组＝10.857，PsiRNA-1组＝0.001；tsiRNA-2组＝11.314，PsiRNA-2组＝0.000）；细胞凋亡能力[（44.76±2.49）%、（46.53±2.66）%]较NC组[（5.01±0.20）%]和空白组[（5.43±0.47）%]明显增加（tsiRNA-1组＝26.832，PsiRNA-1组＝0.000；tsiRNA-2组＝26.370，PsiRNA-2组＝0.000）。结论lncRNA CCAT2在人骨肉瘤组织和细胞中表达上调，抑制CCAT2的表达可显著抑制MG63细胞的增殖和侵袭，促进细胞的凋亡。

关键词： 细胞   遗传   生物学   发育  

摘要： 著名生物学家威尔逊早在20世纪20年代就提出“一切生物学关键问题必须在细胞中找寻”。细胞是一切生命活动结构与功能的基本单位,细胞生物学是研究细胞生命活动基本规律的科学。细胞生物学的研究范围广泛,其核心可归结为遗传和发育问题。遗传是在发育中实现的,而发育又要以遗传为基础。当前细胞生物学的主要发展趋势是用分子生物学及物理、化学方法,深入研究真核细胞基因组的结构及其表达的调节和控制,以期从根本上揭示遗传和发育的关系,以及细胞衰老、死亡和癌变的原因等基本生物问题,并为把遗传工程技术应用到高等生物,改变其遗传性提供理论依据。

关键词： 细胞三维培养   自组装短肽   骨髓间充质干细胞   心肌分化  

摘要： 目的:探究短肽GFS-4自组装形成的水凝胶作为支架材料构建三维微环境对BMSCs生物学特性及向心肌细胞方向诱导分化过程的影响。方法:刚果红染色、红细胞膜裂解实验检测短肽GFS-4自组装效果及对细胞膜是否具有裂解作用;CCK8和AO/EB染色分别检测对BMSCs活性和凋亡的影响;Real-time PCR分析BMSCs诱导分化后MLC-2v、GATA-4基因表达情况。结果:GFS-4自组装后形成致密凝胶,自组装前后对细胞膜无损伤;三维培养环境细胞呈球形生长,细胞活力和凋亡速度均低于二维培养环境。三维培养组在诱导分化过程中的第5天和第7天MLC-2v、GATA-4基因表达均显著高于二维组(P<0.05)。结论:短肽GFS-4自组装水凝胶构建的三维微环境延缓了BMSCs的增殖速度和凋亡速度,并促进向心肌方向诱导分化过程中MLC-2v、GATA-4基因的表达。

关键词： 心肌细胞   姜黄素   增殖   活性氧  

摘要： 目的探讨姜黄素对高糖环境下的心肌细胞生物学特性影响。方法以心肌细胞HCM为研究对象,分别用高糖和低糖细胞生长液培养心肌细胞,同时在细胞生长液中加入姜黄素。MTT检测作用24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况。流式细胞仪检测48 h的心肌细胞凋亡情况。DCFH-DA探针检测心肌细胞内活性氧水平。Western印迹检测相关蛋白表达水平。结果高糖组心肌细胞增殖与对照组相比明显受到抑制(P<0.01)。实验组中心肌细胞增殖情况明显高于高糖组(P<0.01)。高糖组心肌细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01);实验组心肌细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.01)。高糖组心肌细胞中Bcl-2的表达水平明显低于对照组(P<0.01);高糖组心肌细胞中Bax的表达水平明显高于对照组(P<0.01);实验组心肌细胞中Bcl-2的表达水平明显高于高糖组(P<0.01);实验组心肌细胞中Bax的表达水平明显低于高糖组(P<0.01)。高糖组心肌细胞中荧光强度明显高于对照组(P<0.01);实验组心肌细胞中荧光强度明显低于高糖组(P<0.01)。对照组、高糖组和实验组心肌细胞中JAK2、STAT3表达水平没有明显变化。高糖组心肌细胞中p-JAK2、p-STAT3表达水平显著低于对照组(P<0.01)。实验组心肌细胞中p-JAK2、p-STAT3表达水平明显高于高糖组(P<0.01)。结论高糖对心肌细胞增殖具有抑制作用,对细胞凋亡具有促进作用。姜黄素可以通过作用于JAK2/STAT3信号通路改善高糖环境下的心肌细胞损伤。

关键词： BAG-1基因   肝癌   增殖   脱噬作用   Wnt/β-连环蛋白信号通路  

摘要： 目的观察RNA干扰BAG-1基因表达对肝癌细胞增殖凋亡及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。 方法以人正常肝癌细胞L02作为对照细胞，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot分别检测BAG-1在无转移能力的HepG2、Huh7人肝癌细胞株及转染潜能依次增高的MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3人肝癌细胞株中的表达；将阴性小干扰RNA（siRNA）和BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞，不转染的细胞为空白对照组，转染48 h后检测转染效果；分别于转染后的24、48、72 h通过细胞计数试剂盒（CCK-8）实验检测细胞的增殖；流式细胞仪检测转染48 h细胞的凋亡；Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、生存素（Survivin）、c-Myc的蛋白表达。 结果BAG-1在肝癌细胞中的表达均显著高于对照细胞L02（mRNA表达：PHepG2＝0.000；PHuh7＝0.000；PMHCC97L＝0.000；PMHCC97H＝0.000；PHCCLM3＝0.000；蛋白表达：PHepG2＝0.030；PHuh7＝0.001；PMHCC97L＝0.000；PMHCC97H＝0.000；PHCCLM3＝0.000）；BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞后BAG-1的蛋白表达（0.097±0.010）显著低于空白对照组（0.489±0.039）（P＝0.000）；BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞48 h（0.312±0.024）和72 h（0.398±0.036）后细胞的增殖显著低于空白对照组（0.448±0.032）、（0.673±0.051）（P48 h＝0.004；P72 h＝0.002）；与空白对照组（2.13±0.11）%、（0.512±0.048）、（0.349±0.032）、（0.166±0.015）比较，BAG-1-siRNA组细胞凋亡率[（13.47±1.05）%]显著升高，β-catenin（0.247±0.028）、Survivin（0.153±0.017）、c-Myc（0.089±0.009）蛋白显著下调表达（Pβ-catenin＝0.001；PSurvivin＝0.001；Pc-Myc＝0.002）。 结论抑制BAG-1表达可通过下调Wnt/β-catenin信号通路降低肝癌细胞增殖，促进细胞凋亡。

关键词： 荧光碳点   细胞   生物学成像  

摘要： 目的:利用碳点标记不同细胞,通过共聚焦显微镜下碳点的多色荧光特性,达到观察不同细胞的成像特点。方法:采用水热法合成色氨酸碳点,用TEM、FT-IR、荧光光谱仪对碳点进行表征。采用MTT法检测碳点对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7、小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1和小鼠成纤维细胞系L929成像效果,以确定碳点最佳成像浓度。选择最佳浓度的碳点分别与上述3种细胞共培养24h后,在共聚焦显微镜下观察细胞的成像特点。结果:TEM下观察制备的碳点为球形颗粒,粒径约为3.35nm;FT-IR显示碳点的分子结构仅由碳、氧、氢和氮元素组成。荧光光谱显示碳点在不同激发波长下可以呈现不同的颜色,具有激发依赖性。MTT结果显示当碳点浓度在400mg/L时,RAW264.7细胞活性达67%,MC3T3-E1细胞活性达79%,L929细胞活性达89%,表明碳点进入细胞内部并不会明显影响细胞活性。成像结果显示,在488nm和543nm激发波长下,3种细胞均可以呈现绿色和红色的荧光图像,RAW264.7和L929荧光区主要集中在细胞膜和细胞质,而MC3T3-E1整个细胞都具有荧光,表明碳点可能部分进入细胞核中。结论:制备的碳点对细胞成像效果好,且能够使细胞具有多色荧光,对直接观察和分析细胞的形态和生理活动具有重要的意义。

关键词： 大肠癌   miRNA-375   慢病毒  

摘要： 目的:研究构建miRNA-375慢病毒表达载体并转染结直肠癌细胞,探讨其对结直肠癌细胞生物学特性的影响。方法:采用qRT-PCR法检测结直肠癌细胞株中miRNA-375表达水平。构建FUA-ZMCSEF1-EGFP-miR-375/inhibitor慢病毒表达载体,建立稳定过表达miRNA-375及其抑制剂的HCT-116亚细胞系,体外观察细胞生长速度并绘制生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡率,划痕实验检测miRNA-375对HCT-116细胞迁移能力的影响,Western blot法检测miRNA-375对细胞内ERK磷酸化水平的影响。结果:结直肠癌细胞株中miRNA-375低表达不但能促进细胞生长、抑制细胞凋亡,而且能促进细胞内ERK磷酸化水平、增加细胞迁移力和侵袭力。结论:结直肠癌miRNA-375发挥抑癌基因的作用,为miRNA-375在结直肠癌基因诊断及治疗中的应用提供了实验依据。