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关键词： Wip1   乳腺肿瘤   细胞凋亡   基因转染  

摘要： 目的构建Wip1基因重组慢病毒表达载体,研究其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法以慢病毒感染方法将Wip 1的短发夹状RNA(shRNA)转入乳腺癌MCF-7细胞。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测转染前后细胞Wip1mRNA、蛋白的表达,MTT法、流式细胞术及Transwell侵袭实验检测Wip1-shRNA对MCF-7细胞增殖、凋亡、周期及侵袭转移的影响。筛选具有抑制p53基因表达的干扰RNA分子p53dsRNA,并分析其干扰后对乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移的影响。结果转染48h后,Wip1-shRNA组细胞荧光较强,NC-shRNA组较弱。Wip1-shRNA组细胞Wip1mRNA和蛋白的表达分别为0.291±0.025、0.203±0.021与NC-shRNA组0.954±0.090、0.963±0.092比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组各时间点细胞存活率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。NC-shRNA组早期与晚期细胞的凋亡数少于Wip1-shRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。NC-shRNA组细胞G0+G1期、S期细胞数分别为53.5±3.6、27.3±1.5,Wip1-shRNA组分别为72.3±5.2、14.6±0.8,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell侵袭转移结果表明,NC-shRNA组细胞的穿膜数均多于Wip1-shRNA组(P<0.05)。对照组细胞中p53mRNA的表达、细胞侵袭转移的穿膜数与p53dsRNA组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞Wip1表达,Wip1可能通过调控蛋白表达影响乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期与侵袭转移,p53dsRNA干扰p53基因下调后增加乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移的能力。

关键词： 细胞生物学   MiR-205   ASPP2   转移   化疗敏感性  

摘要： 为进一步了解MiR-205在宫颈癌中对上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),以及细胞增殖和药物敏感性的作用,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)对MiR-205的靶蛋白——ASPP2蛋白及EMT相关蛋白标志物的表达进行了分析。同时,研究通过噻唑蓝(MTT)实验和流式细胞技术探究了MiR-205对宫颈癌细胞的增殖和化疗敏感性的影响。结果表明,MiR-205可以通过靶向抑制ASPP2的表达,促进宫颈癌细胞的增殖和对紫杉醇的耐药性。研究发现了MiR-205/ASPP2可能是宫颈癌的治疗和潜在生物标志物。

关键词： 损伤软骨   软骨细胞   自体软骨细胞移植  

摘要： 目的对从膝关节软骨损伤区分离出的细胞进行鉴定,并对其生长活性进行研究,以解决自体软骨细胞移植中软骨细胞来源不足的问题。方法通过膝关节镜,在软骨损伤区取少量损伤软骨组织,不含正常软骨及软骨下骨为实验组;取正常软骨组织为对照组。在胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶作用下从实验组中提取细胞,对照组中提取正常软骨细胞。实验组细胞培养贴壁后在倒置相差显微镜下观察细胞的形态是否与对照组软骨细胞一致。实验组细胞行甲苯胺蓝染色鉴定,与对照组对比;噻唑蓝(MTT)法比较两组细胞生长活性;以具有专利知识产权的Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜为生长载体,培养实验组和对照组第3代软骨细胞,在电镜下观察两组生长活性。结果从少量损伤的软骨组织中提取的细胞为活性正常的软骨细胞,其特征及生长活性与对照组比较,差异无统计学意义(P<0.05)。结论软骨损伤过程中软骨细胞未发生变性,少量损伤的软骨组织仍可获得适量软骨细胞,MTT法和电镜扫描表明,其生长活性符合自体软骨细胞移植的要求,无需取正常软骨组织作为细胞来源。

关键词： 干细胞   生物学特性   尿液   源性   应用   细胞特性   分化能力   cells  

摘要： Zhang等于2008年首次从尿液中分离出一类具有祖细胞特性的细胞,随后证实这类有祖细胞特性的细胞是干细胞,并命名为尿源性干细胞（urine-derived stem cells,USCs）。USCs是一类增殖能力强,具有多向分化能力,能分化成脂细胞、成骨细胞、成软骨细胞,可取自体细胞用于治疗，无免疫原性，不受伦理限制的细胞。

关键词： 创新型人才   细胞生物学实验   创新实验教学  

摘要： 结合多年教学实践,从实验教学内容体系调整、实验教学方法改革、实验教学条件优化、实验考核制度完善等方面,介绍了淮北师范大学生命科学学院基础生物实验教学中心创新细胞生物学实验教学改革的思路、举措和成效,以期完善细胞生物学的教学环节,为教学体系建设提供借鉴和有益的参考。

关键词： 细胞生物学   消息   江苏南京   生物学领域   研究人员   中国   学术   学会  

摘要： 会议背景介绍：为促进我国细胞生物学领域研究人员的交流与合作,推动中国细胞生物学学科的发展,中国细胞生物学学会决定自2017年起将原两年-次召开的“细胞生物学全国学术大会”更改为每年举办-次.“中国细胞生物学学会2018年全国学术大会？南京”将于2018年4月10-13日在江苏南京举行.

关键词： 胃癌   RPS12基因   细胞周期   RNA干扰  

摘要： [目的]初步探讨RPS12基因对于胃癌细胞生长、增殖,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等影响。[方法]RPS12基因特异的RNA抗体(RNAi)载体通过脂质体介导法转染RPS12基因高表达MKN45细胞,后经G418压力筛选法获得稳定转染的细胞系,经过RT-PCR法及Western-blot法证实。而后使用流式细胞仪、生长曲线法、平板克隆形成实验法、细胞迁徙实验法等方法分析稳定转染株相关生物学特性的变化,每种检测实验均设立RNAi载体转染细胞实验组、点突变对照组、MKN45细胞空白对照组。[结果]稳定转染的RPS12基因RNAi细胞系经过免疫细胞化学法、RT-PCR法及Western-blot法证实,表达抑制率可达68%左右。与对照组细胞相比,实验组细胞株生长减慢,各时间点细胞计数显著低于对照组(P<0.05);各对照组之间无显著差异,流式细胞仪检测细胞周期显示实验组G2-M期比例显著低于对照组,S期比例显著高于对照组(P<0.05),实验组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。平板克隆形成实验结果显示RPS12RNA干扰组克隆形成率显著低于对照组(P<0.05);细胞迁徙实验结果提示实验组穿膜率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]RPS12基因可能具有促进细胞生长增殖作用,同时可影响细胞周期,降低RPS12基因表达可能抑制胃癌细胞的恶性生物学行为。

关键词： 舌鳞状细胞癌   YAP1   小干扰RNA   生物学特性  

摘要： 目的:探讨小分子RNA干扰(siRNA)YAP1基因对舌鳞状细胞癌生物学特性的影响。方法:培养人舌癌SCC-4细胞,根据转染物不同,分为siRNA-YAP1组、siRNA-对照序列组和空白对照组,实时荧光定量PCR技术检测各组细胞中YAP1基因表达,Western blot法检测各组细胞中YAP1蛋白表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞技术检测各组细胞凋亡情况,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell法检测各组细胞侵袭能力。结果:与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-YAP1组细胞中YAP1 mRNA和蛋白相对表达量均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-YAP1组细胞24h、48h、72h、96h时A值均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-YAP1组细胞凋亡率均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-YAP1组细胞划痕愈合率降低,差异有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-YAP1组侵袭细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性沉默人舌癌SCC-4细胞中YAP1基因可抑制细胞增殖,加速细胞凋亡,减少细胞迁移和侵袭能力。

关键词： 共刺激分子   B7-H3   食管癌   侵袭   转移  

摘要： 目的观察共刺激分子B7-H3对食管癌细胞株Eca-109增殖、迁移及侵袭等细胞生物学特性的影响。方法慢病毒感染并经过流式分选，构建B7-H3稳定下调表达的Eca-109细胞（LV-B7-H3-siRNA）及对照组Eca-109细胞（LV-NC），采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）及Western blot验证B7-H3干扰后mRNA及蛋白的表达水平，细胞增殖实验、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测并分析LV-B7-H3-siRNA组及LV-NC组Eca-109细胞的增殖、迁移及侵袭能力的差异。结果通过RNA干扰（RNAi）技术成功构建B7-H3稳定下调表达的食管癌细胞株Eca-109。细胞计数试剂盒（CCK-8）检测结果显示，细胞接种后第2天（0.31±0.03比0.36±0.02）、第4天（0.51±0.04比0.60±0.04）、第5天（0.60±0.02比0.70±0.03）、第6天（0.65±0.05比0.76±0.03），LV-B7-H3-siRNA组的增殖速率低于LV-NC组，差异有统计学意义（P＝0.011、0.024）；划痕实验结果显示，在划痕后12 h[（38.0±28.1）比（467.7±30.3）像素]、20 h[（509.7±6.2）比（403.3±16.7）像素]、24 h[（454.7±19.9）比（355.0±32.1）像素]，LV-B7-H3-siRNA组Eca-109细胞的相对迁移距离高于LV-NC组，差异有统计学意义（P＝0.042、0.001、0.010）；Transwell侵袭实验表明，细胞接种24 h后，LV-B7-H3-siRNA组侵袭细胞数量[（258.8±29.1）个]，少于LV-NC组[（474.0±85.3）个]，差异有统计学意义（P＝0.014）。 结论成功构建B7-H3稳定下调表达的食管癌细胞株Eca-109，并证实B7-H3下调表达可显著抑制Eca-109细胞的增殖、迁移及侵袭能力，提示共刺激分子B7-H3参与调节食管癌细胞的生物学功能，并与肿瘤侵袭转移有关。

关键词： 胶质瘤   microRNA-34a   细胞生物学   增殖   凋亡  

摘要： 目的研究micro RNA-34a对人脑胶质瘤细胞生物学特性的影响。方法选取南充市川北医学院附属医院2015年3月至2016年3月收治的100例胶质瘤患者为研究对象,采集胶质瘤组织样本,选取同期在我院接受减压术治疗的40例脑外伤患者为对照,术中采集正常脑组织样本。采用实时荧光定量PCR检测micro RNA-34a在胶质瘤组织与正常脑组织样本中表达水平。将转染后人脑胶质瘤细胞系U87分为空白对照组、无义序列转染组及micro RNA-34a转染组,检测micro RNA-34a对人脑胶质瘤细胞系U87增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响。结果胶质瘤组织micro RNA-34a相对表达量为(0.53±0.48),显著低于正常脑组织的(1.38±0.25),差异有统计学意义(P<0.05)。不同恶化程度胶质瘤组织micro RNA-34a相对表达量差异有统计学意义(P<0.05)。micro RNA-34a转染组转染后48 h细胞生长抑制率、转染后细胞凋亡率显著高于空白对照组与无义序列转染组,划痕24 h后细胞迁移数、细胞12 h穿膜数显著低于空白对照组与无义序列转染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 micro RNA-34a具有抑制胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭,促进肿瘤细胞凋亡等作用。