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关键词： 喉癌   PIN1   miR-200c   迁移   中心体  

摘要： 前言:喉癌是头颈部常见恶性肿瘤之一,约95%为鳞状细胞癌,主要起源于喉粘膜上皮组织,喉鳞状细胞癌具有较高的死亡率和预后不良。目前,喉癌的发生发展及预后的众多分子机制尚不完全清楚。因此,探究喉癌发生发展的分子机制,寻找其诊断及预后的生物分子标记物至关重要。miRNAs(microRNAs)是近年来发现的一类长度约为22个核苷酸的单链非编码RNA,通过特异性地结合靶基因mRNA的3'UTR而发挥作用。研究表明,mi RNA既可以作为癌基因下调抑癌基因的活性,也可以作为抑癌基因下调癌基因的活性。miR-200c是miR-200家族(miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-429和miR-141)成员之一,位于12号染色体上。研究表明,miR-200c在多种类型的癌中对上皮-间充质细胞转化、细胞侵袭、转移、增殖、凋亡、自噬和抗治疗过程都起到决定性的作用,而且在不同肿瘤中发挥不同的作用。目前,miR-200c是否参与喉癌的发生和发展尚不明确。前期工作中,我们发现过表达PIN1加剧了中心体扩增、细胞异常分裂和细胞迁移。通过Targetscan等软件预测发现,PIN1是miR-200c的潜在靶基因之一。本研究中,我们将应用相关分子生物学技术探究miR-200c对喉癌Hep-2细胞生物学行为的影响以及miR-200c是否通过PIN1在喉癌中发挥其生物学功能。材料与方法一、实验材料(一)喉鳞状细胞癌Hep-2细胞系。(二)组织标本:取自中国医科大学第一附属医院耳鼻喉科喉癌患者,全部病人术前未进行放化疗。标本保存于-80°C冰箱中,所有标本均经病理学检查确诊,并经医学伦理委员会批准及患者知情同意。(三)主要分子生物学相关试剂:RPMI1640培养基,Serana胎牛血清,RNAiso Plus RNA提取试剂,Takara定量试剂和RNA反转录试剂盒,SDS-PAGE凝胶试剂盒,兔抗PIN1单克隆抗体,鼠抗β-actin单克隆抗体,辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG,辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG,小鼠抗γ-Tubulin单克隆抗体,Dylight 488标记抗小鼠IgG,TIANGEN质粒提取试剂盒,FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I等。二、实验方法1、荧光素酶报告基因活性检测2、细胞培养3、基因瞬时转染实验4、qRT-PCR检测5、Western Blot检测6、CCK8检测7、Transwell小室检测法8、免疫荧光实验9、流式细胞术检测10、统计分析实验结果1、Real-time PCR结果显示,miR-200c在喉癌组织中的表达水平较癌旁组织增高(P<0.05),提示miR-200c参与喉癌的发生发展;此外,miR-200c在伴有淋巴结转移的喉癌组织中的表达水平显著降低(P<0.05),提示miR-200c可能在肿瘤转移过程中发挥作用。转染mi R-200c mimics和inhibitor后,Hep-2细胞中miR-200c的表达水平与对照组相比分别升高和降低(P<0.05),证明转染成功。2、CCK8检测结果显示,转染miR-200c mimics和mi R-200c inhibitor后,Hep-2细胞的生长速率无明显差异(P>0.05)。3、Transwell实验结果显示,miR-200c mimics转染组穿过小室的Hep-2细胞数显著低于对照组,而miR-200c inhibitor转染组中穿过小室的Hep-2细胞数多于对照组(P<0.05),提示miR-200c抑制Hep-2细胞的迁移。4、免疫荧光实验结果显示,miR-200c mimics转染组中心体异常扩增的细胞比例显著降低,miR-200c inhibitor转染组中心体异常扩增的细胞比例与对照组相比显著增加(P<0.05),提示miR-200c减弱细胞中心体的异常扩增。5、流式细胞术检测细胞凋亡实验结果显示,转染miR-200c mimics和miR-200c inhibitor后,Hep-2细胞的早期凋亡率无显著变化(P>0.05)。6、TargetScan等软件预测结果显示,在PIN1的3'UTR存在miR-200c的结合位点,提示PIN1是miR-200c的潜在靶基因之一。7、荧光素酶报告基因结果显示,共转染PIN1野生型报告载体和miR-200c mimics组荧光素酶活性与其他对照组相比显著降低(P<0.05),证实PIN1是miR-200c的靶基因。8、Real-time PCR和Western Blot结果显示,miR-200c mimics转染组中PIN1蛋白表达水平与对照组相比降低,miR-200c inhibitor转染组中PIN1蛋白表达水平较对照组增高(P<0.05),而

关键词： 梅花鹿   成纤维细胞   航天诱变   生长曲线   基因表达  

摘要： 本研究首次以自主研发的PVDF膜细胞培养技术进行了梅花鹿(Cervus nippon)成纤维细胞的航天诱变,并分析了航天诱变细胞的生长曲线、核型及其生长相关基因表达量等生物学特性。成纤维细胞采自耳缘皮肤组织,以贴壁培养,胰蛋白酶消化传代培养并冷冻保存用于研究;24孔板传代培养计活细胞数并绘制细胞的生长曲线,分析生长曲线的拟合度;制备常规染色体标本,检测成纤维细胞的染色体核型及G带;进一步运用实时荧光定量PCR法对成纤维细胞生长相关基因的表达量进行检测。实验结果表明,新开发的PVDF膜细胞培养技术可有效保持梅花鹿成纤维细胞在太空飞行过程中的存活、并成功回收、传代建系,但航天诱变后与同期对照的梅花鹿成纤维细胞生长相关的个别基因的表达量有所差别。通过细胞传代培养观察发现,雌、雄成纤维细胞经航天诱变后均能保持正常的成纤维细胞特征,生长曲线均呈“S”型,雌、雄航天诱变组与雌、雄对照组细胞的1～2 d对数生长期相比延长到4 d。拟合生长曲线分析表明,雌、雄航天诱变组细胞生长拟合度(degree of fitting)与对照组相似,但细胞增殖拐点时间(infiltration time)较晚、拐点细胞量(inflexion cell volume)较少。核型(karyotype)及G带分析显示,航天诱变梅花鹿成纤维细胞染色体数保持2n=66(雌、雄分别为66(XX)与66(XY)),形态正常,染色体组型为2n=31T+2M,其中1、2号为中部着丝粒,其余皆为端部着丝粒。实时定量PCR的结果显示,雌、雄梅花鹿成纤维细胞航天诱变后与对照组相比的细胞生长相关的10个基因中4个表达量明显提升,CDKN1A、BCCIP、ANAPC2、CUL1(P<0.05)。本研究建立了哺乳动物(Mammalian)在航天运行条件下的细胞培养PVDF新技术,并分析了航天诱变对于梅花鹿细胞生物学特性及其部分生长基因表达差异变化,为后续进行相关研究提供了基础信息和技术支持。

关键词： 人羊膜上皮细胞   免疫调节功能   生物学特性   组织再生   细胞治疗   Biological characteristics   Cell therapy   Human amniotic epithelial cells   Immunoregulation   Tissue regeneration   人羊膜上皮细胞   免疫调节功能   生物学特性   组织再生   细胞治疗   Language of Keywords: English   Chinese  

摘要： The human amuiotic membrane is mainly composed of epithelial layer, dense layer, fibroblast layer, spongy layer and basement membrane, which is belongs to the .appendages of fetus. The human amniotic epithelial cells are mainly derived from the epithelial layer, which is formed by the development of the cell mass in the embryo. In addition, human arrmiotic epithelial cells are a special differentiation stage of stem cells, which can be differentiated into three germ layers in a particular environment, and also shows unique immune regulation function, these results suggest that it has broad potential applications in cell therapy and tissue regeneration, and may become one of the important sources of *** the clinical research on the biological characteristics and immunological regulation of human amniotic epithelial cells, its application value in the treatment of related diseases has become increasingly prominent. In view of this, the research progress of biological characteristics and immunoregulation function of human amniotic epithelial cells in recent years is reviewed in this paper, the purpose is to provide reference for the research in related fields. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

关键词： 翻转课堂   细胞生物学   教学模式  

摘要： 科技在发展,学生在变化,如何在不同条件下调整教学方法以保证教学的效率,是对教师不变的要求。传统教学模式下,学生接收知识的有效性和自主学习能力都偏低,在现有信息化条件下,我们尝试通过"翻转课堂"来提高《细胞生物学》的教学效率。通过任务分配在学习组间形成良性竞争,提高学习积极性。同时通过有效的奖惩规则和组间人员调整,保证公平,并避免学生在学习中掉队。

关键词： 显微镜   活细胞   大学物理学   优化   生物工程学   细胞生物学   立体影像  

摘要： 香港科技大学物理学系和化学及生物工程学系教授杜胜望及物理学系荣休教授雷明德团队研发出新一代显微镜——新型线性贝塞尔光片（LBS）显微镜，能为活细胞拍摄画面质素更高的立体影像，大大扩阔了细胞生物学可研究的范围及提升准确性。

关键词： 间充质干细胞   软骨细胞   多能干细胞   基质细胞   分离培养   肌肉细胞   肝细胞   细胞治疗   生物学特性   骨髓  

摘要： 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),也被称为多能干细胞,最早于1987年被Friedenstein等人^([1])在骨髓中发现并成功分离培养.MSCs几乎存在于所有类型的组织中,是基质细胞的起源细胞.MSCs可以分化为不同的细胞类型,如脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、肝细胞等^([2]).根据国际细胞治疗协会的规定,MSCs表达CD105(SH2),CD73(SH3),

关键词： 茶氨酸   代谢   生物功能   细胞  

摘要： 茶氨酸是茶科植物中特有的酰胺类氨基酸,通常在绿茶内含量较高,其理化性质、保健作用、分子作用机理等方面被广泛研究。近年来,大量的研究发现,茶氨酸具有非常好的保健作用与医药效果,比如茶氨酸可以减轻脑组织以及肝组织的损伤,提高免疫细胞的免疫能力,降低神经细胞的凋亡率,抑制肿瘤的形成,抑制癌细胞增殖等。文章主要综述了茶氨酸的吸收与代谢、组织损伤的保护作用及其在免疫细胞、神经细胞和癌细胞的作用机制,以期为茶氨酸在细胞、组织、机体等方面的深入研究与综合应用提供科学依据。

关键词： 幽门螺杆菌   胃癌   CagA   CIP2A   B-Raf   JNK2  

摘要： 目的了解幽门螺杆菌CagA上调CIP2A表达的分子机制。方法培养AGS细胞和GES-1细胞,一部分细胞分别转染CagA阳性质粒WT-cagA和阴性对照质粒pcDNA3.1;另一部分细胞用B-Raf和JNK2信号抑制剂作用,然后分别转染质粒WT-cagA和质粒pcDNA3.1,Western blot检测CIP2A表达,细胞克隆形成试验检测细胞增殖能力,细胞迁移试验检测细胞迁移能力结果 AGS细胞和GES-1细胞转染CagA阳性质粒WT-cagA后CIP2A表达量增多;细胞经B-Raf和JNK2的信号抑制剂作用后转染CagA阳性质粒WT-cagA,其CIP2A表达量比仅转染质粒WT-cagA的细胞表达量少,细胞的克隆数减少,细胞迁移能力降低。结论幽门螺杆菌CagA进入细胞通过B-Raf和JNK2及其参与的信号途径调节原癌蛋白CIP2A的表达,进而影响细胞的克隆形成能力和迁移能力。