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关键词： 食管癌   PDL1   恶性生物学特征   预后  

摘要： 背景中国食管癌发病数约占全球食管癌发病总数的50%,是危害人民群众健康的主要恶性疾病。鳞癌是中国食管癌的主要病理分型,约占90%以上,发病呈地域性分布,主要分布在农村及贫困山区,是当地人民群众因病致贫及因病返贫的主要因素,同时也是制约当地社会经济发展的重要原因。食管癌治疗手段以手术、放疗和化疗为主,可是治疗的远期效果并不容乐观,患者生存质量极差,因为缺乏有效早期的预防及诊疗手段,多半食管癌诊断时已属于晚期,随着对肿瘤的免疫逃逸机制的研究进一步深入,免疫治疗被认为是肿瘤防治新选择。因此,寻找促进食管癌发生、发展的新靶点变得十分重要。T细胞活化过程中需“双重信号”及各种因子共同参与。T细胞表面受体(T cell receptor,TCR)可识别由抗原提呈细胞(antigen-presenting cells,APCs)提呈的抗原肽-主要组织相容性复合体,将胞外信号传递到胞内,为T细胞的活化提供第一信号,初步激活T细胞。APC表面的协同刺激分子可与T细胞表面的配体结合,提供第二活化信号,使初始T细胞完全活化为效应T细胞。协同刺激分子有3种分类:B7家族、TNF家族和细胞因子家族。而且仅B7族可通过APC传达相关信号给T细胞的协同刺激分子。目前B7家族共包括7个成员:B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、B7h(ICOS-L)、B7-H1(PD-L1)、B7-DC(PD-L2)、B7-H3和B7-H4(B7x、B7S1)。与B7族其他分子不一样,B7-H1具有负性调节免疫应答的作用。PDL1(programmed death-ligand 1程序性死亡配体1)是位于人染色体9q24的跨膜蛋白,胞外区有IgV和IgC样结构的,中间区有疏水结构,胞外区含有蛋白激酶C磷酸化位点,PDL1在多种正常组织中表达,但仅限于巨噬细胞系统中,研究发现许多恶性肿瘤中PDL1高表达,包括非小细胞肺癌、黑色素瘤、乳腺肿瘤、胶质瘤等。PD1(programmed death-1程序性死亡分子1 CD279)为CD28家族成员,由胞外段、疏水跨膜区、胞内段组成。胞内区含有2个酪氨酸残基,包括免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif,ITIM)、免疫受体酪氨酸转换基序(immunoreceptor tyrosine-based switch motif,ITSM),TISM的激活与效应T细胞的的应答活性密切相关。PD-1可在于活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞及单核细胞表面,同时也可在调节性T细胞(regulatory T cell Treg)检测到,促进Treg细胞的增殖,抑制免疫应答。PD1包括两个配体PDL1及PDL2,而PDL1是PD1的主要配体。PD1与PDL1结合后,ITSM可募集酪氨酸磷酸酶,进而去磷酸化TCR信号通路的多个关键分子,抑制T细胞的增值活化,发挥免疫负性调节功能,减少免疫反应对周边组织的损害,避免自身免疫的发生。肿瘤组织高表达PDL1,该信号通路的激活可促进肿瘤免疫逃逸。肿瘤逃逸的机制可能与以下的原因有关:(1)诱导T细胞耐受;(2)诱导T细胞凋亡;(3)诱导T细胞耗竭;(4)增强Treg细胞功能;(5)抑制T细胞的增殖。第一部分PDL1在食管鳞癌中的表达及临床意义目的研究PDL1在食管鳞癌中的表达及临床意义方法收集河南科技大学第四附属医院2014年1月-2014年6月食管鳞癌患者的癌组织及相应癌旁组织,采用免疫组化、Western blot实验方法检测PDL在癌组织及相应癌旁组织的表达,并分析PDL1的表达与食管鳞癌临床病理学特性的关系及预后的相关性。结果在食管鳞癌组织中PDL1的阳性率为42.0%高于癌旁组织的22.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。PDL1的表达水平与临床分期和肿瘤浸润深度有一定相关性(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明PDL1的阳性组较阴性组预后较差,30个月生存率分别为38.1%、86.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。多变量COX回归分析表明PDL1是食管鳞癌患者的独立预后因素。结论PDL1在食管鳞癌的发生发展过程起到重要作用,可能成为食管鳞癌评价预后指标,并为食管鳞癌的治疗提供新的靶点。第二部分PDL1对食管癌细胞生物学特性的影响目的研究PDL1的表达对食管癌细胞生物学特性的影响。方法1.应用CCK8实验和平板克隆实验,检测PDL1对人食管癌细胞株EC109体外增殖能力的影响。2.应用Wound-healing实验和Transwell小室实验,检测PDL1对人食管癌细胞株EC109细胞迁移和侵袭能力的影响。3.应用裸鼠移植瘤模型观察PDL1对人食管癌细胞株EC109细胞体内增殖的影响。结果***8

关键词： 医学细胞生物学   教研室   精品资源共享课程  

摘要： 医学细胞生物学是生命科学的重要分支,旨在阐明细胞生命活动的基本规律,并为人类的生命活动提供理论基础,是生命科学领域的新兴前沿学科,也是高等医学教育中的重要专业基础课程。医学细胞生物学的研究对象是细胞,而细胞又是组成人体的结构与功能单位,故学好本门课程,对医学生理解疾病的发生机制、诊断与治疗奠定基础。在医学教育中,通过医学细胞生物学的系统学习,将为后续课程如生物化学、组织胚胎学、医学遗传学、生理学、免疫学、分子生物学及临床各科专业

关键词： DLK1-DIO3印记簇   MEG8-DMR   Huh7细胞   CRISPR/Cas9  

摘要： DLK1-DIO3印记簇位于人类染色体14q32,包含DLK1、RTL1和DIO3这三个父源表达的蛋白质编码基因,和几个大小不一的母源表达的非编码RNA。在这些非编码RNA的基因区间内和内含子中,存在大量的C/Dsno RNAs和micro RNAs。父本甲基化的IG-DMR和Gtl2/MEG3-DMR是该印记簇内起主要调控作用的两个差异甲基化区域,先前研究显示这两个DMR区域的亲本特异性敲除会对区间内的基因表达及胚胎发育产生广泛的影响。MEG8-DMR为DLK1-DIO3印记簇内新发现的母本差异甲基化区域,位于MEG8的第二个内含子中。腺病毒载体和SB转座子系统在小鼠Meg8-DMR附近的整合插入效应,导致了上下游基因表达的异常,使小鼠肝癌的发生率增高。这暗示MEG8-DMR可能作为一种重要的DNA调控序列,对上下游基因的表达和原发性肝癌发生存在相应的调控作用。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在人源肝癌Huh7细胞系中敲除MEG8-DMR,研究MEG8-DMR对相关基因的表达变化和Huh7细胞生物学行为的影响。我们构建Cas9-MEG8-DMR重组载体并瞬时转染Huh7细胞,结果显示其可在细胞基因组水平有效敲除MEG8-DMR。敲除MEG8-DMR后在m RNA水平上,DLK1、DIO3、IGF2的表达水平下调;MEG3、MEG8的表达水平无明显变化,MEG9的表达水平上调;同样mi R-370的表达水平发生上调。MEG8-DMR的敲除使细胞增殖能力和克隆形成能力减弱,并促进了细胞凋亡;细胞形态、细胞迁移侵袭能力、细胞周期并没有发生显著性变化。综上所述,MEG8-DMR对于相关基因的表达具有调控作用,并以此影响Huh7细胞的生物学行为。这些结果对于进一步探究MEG8-DMR的调控功能和调控机制具有重要意义。

关键词： 胆囊癌   GBC-SD细胞   索拉非尼   MicroRNA-155   预后因素   化疗  

摘要： 研究背景:目前,随着人类社会的变化,恶性肿瘤的发病率日趋增加,尤其是胆道系统中的胆囊癌,对人类身体健康构成了非常大的威胁。随着近现代医学技术的不断发展,对胆囊癌症疾病的发病有了全新的认知,在早期诊断方面更及时化、规范化,为患者良好治疗及预后提供了重要的指导意义。相关的研究结果显示,在人类的调节基因中,miRNAs调节占比大约60%,其中主要的因子包括:原癌原因、肿瘤抑制因子等。上述比例,充分展示了 miRNAs和肿瘤之间的相关性。目前,微小RNA(miRNA)作为调节生物体中许多关键基因表达的基因研究越来越深入。miRNA是一种非编码单链RNA,包含20-25个核苷酸,它们通过与靶向mRNA的3'-非编码区结合,再转录,调节基因表达。在细胞中,RNA-poly II将miRNA转录成初级miRNA转录物,然后转运到细胞核中,由Drosha酶生成miRNA前体,其、后者在细胞质中被加工成成熟的miRNA。miRNA可发挥多种生理功能,可以调节细胞发育,增殖和分化,细胞凋亡,参与各种免疫应答,炎症过程,也可参与一些自身免疫系统疾病和某些癌症基因的表达。此外,在很多临床标本和癌症组织中MiRNA能够保持长期的稳定性,所以miRNA可以用作某些癌症预后的生物学标志物。miR-155位于人类第21号染色体的非编码转录区第3个外显子内,由RNA聚合酶(RNA-polymerase)转录成前体 miRNA(pre-cursor miRNA,pre-miRNA),后者具有聚腺苷酸尾和帽结构的短发夹样结构。细胞核中,Drosha复合酶将其进一步改造,使其转化为60至70nt大小的核苷酸,然后在细胞质中由DNA切割酶活化,最后产生约21-25nt大小的短miRNA。miRNA-155具有多种生物学功能,其主要功能主要体现在基因转录后和翻译前调节,进而影响各种大分子物质的表达。在一般情况下,成熟miRNA-155在T细胞和B细胞中表达,其它参与表达的还有单核细胞和巨噬细胞等。后来,越来越多的研究证实miRNA-155的表达异常与许多疾病如癌症,心血管疾病,炎症,自身免疫疾病等相关。研究发现,在乳腺癌、白血病、甲状腺癌、胃癌、结肠直肠癌、膀胱癌和肾细胞癌等各类型的肿瘤中,miR-155均在此类恶性疾病的过度表达。以前,Kono等学者也提出了在胆囊癌中,miR-155有过度表达。在胆囊癌的发展过程中,miR-155体现出来的表达水平,与患者的淋巴转移,以及预后情况,均显示了二者之间明显的相关性。另外,有相关的试验证明,miR-155的异常表达,也明显增强了胆囊癌细胞的侵袭性。然而,miR-155在中国人群胆囊癌中的临床意义还没有研究过。目前,关于胆囊癌的发病机制却未明确,治疗的手段也比较单一,大多都是以手术切除的方式为主。但是,由于发病症状并不明显,临床症状也非常隐秘,因此,此类疾病的初期诊断率并不高。临床上80%以上的患者在明确诊断时已属中晚期,然而在大部分患者通过采取手术治疗后,效果并不佳,甚至术后的复发率高达50%。由此可见,对于胆囊癌的化疗手段显得非常十分重要。本研究将在已有的研究基础上,从细胞和机体两个水平探究在胆囊癌患者中,miRNA-155的表达水平对索拉非尼化疗效果的影响。目的:采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription-PolymeRase Chain Reac-tion,RT-PCR)的方法,测定人胆囊癌组织及正常的胆囊组织中miR-155的表达。观察miR-155有无异常表达及其在人胆囊癌诊断与治疗中的临床意义。(2)研究索拉非尼对人胆囊癌GBC-SD细胞和胆囊癌患者的作用以及与miRNA-155表达的关系。方法:(1)选取我院2008年5月至2014年4月间行胆囊癌手术治疗的病人,术前均未经放疗及化疗,术后通过RT-PCR法测定胆囊癌组织和正常胆囊组织miR-155的表达。梅耶生存曲线(Kaplan-Meier)法,分析患者术后5年生存率。(2)索拉非尼处理GBC-SD细胞:分为正常细胞对照组、GBC-SD细胞组和不同剂量索拉非尼处理组(剂量分别为3、6和12 μmol/l)。采用RT-PCR法测定相应细胞中miR-155的表达水平;采用四氮唑盐还原(MTT)法检测细胞活性;采用流式细胞仪检测GBC-SD细胞的凋亡情况。(3)选取本院收治的26例接受索拉非尼化疗的胆囊癌患者,术后取癌组织及癌旁组织检测miR-155表达,分析miR-155的表达水平变化及其与患者预后的相关性。结果:(1)miR-155在胆囊癌组织和正常胆囊组织中的表达:133例胆囊癌组织中miR-155的表达水平,均明显高于正常胆囊组织,差异具有统计学意义(P<0.01)。miR-155表达水平与临床病理特征:miR-155高表达

关键词： 医学细胞生物学   教学改革  

摘要： 医学细胞生物学是高等院校生物和医学类专业主要的基础学科之一。它是21世纪自然科学的四大前沿学科之一,既是生命科学的基础学科,又是现代生命科学发展的重要支柱。根据医学细胞生物学课程在高等院校教学中的局限性及其重要性,探讨教学过程中存在的问题及改革。

关键词： 舌癌   MicroRNAs   MRP2   miR-320a   miR-320a   OTSCC   增殖   迁移   侵袭  

摘要： 目的:1、使用miRNA芯片分析比较舌鳞状细胞癌病患组和健康组别的血清miRNA,筛查出异常表达的miRNA;2、对异常表达的miR-320a进行相关的生物学分析,预测可能的靶基因。方法:1、采用组织微阵列检测48例舌鳞状细胞癌患者及50例健康志愿者血清中microRNA的表达水平,qRT-PCR验证微阵列的数据;2、锁定寡核苷酸探针原位杂交技术和免疫组织化学方法,检测舌鳞状细胞癌组织及非舌鳞状细胞癌正常舌组织中miR-320a和MRP2表达水平,寻找miR-320a调节MRP2表达的组织学证据。结果:1、微阵列检测到总共有21种miRNAs表达异常,而其中miR-320a的表达呈现最明显的降低,P<0.05。进一步对OTSCC样本和健康人中4个表达有显著异常的miRNAs,包括miR-320a,miR-129,miR-106a和miR-31进行了qRT-PCR检测验证,表达趋势与微阵列一致,P<0.05。2、原位杂交技术和免疫组织化学结果显示:舌癌组织中miR-320a的表达水平显著低于正常舌组织,P<0.01;而舌癌组织中MRP2的表达水平显著高于正常舌组织,P<0.01。结论:miR-320a在舌癌患者血清中的表达水平显著低于在正常人血清中的表达,在舌癌组织中的表达水平也低于在正常组织中的表达;但是MRP2的表达水平却是增高的。提示我们可将miR-320a表达异常降低和MRP2异常增高现象作为舌鳞状细胞癌诊断的辅助参考指标。目的:1、观察外源性mi R-320a对SCC细胞系增殖、迁移、侵袭的影响。2、在SCC细胞系中验证MRP2是否是mi R-320a的天然靶基因,并探索mi R-320a抑制MRP2表达的分子机制。3、进一步观察过表达MRP2后,能否有效逆转mi R-320a对舌鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用。方法:1、以人SCC细胞系为研究对象,q RT-PCR检测舌癌细胞系(SCC4、SCC1)和正常角化细胞系(NHOK)中的mi R-320a的含量。2、通过向SCC细胞系转染mi R-320a mimics,提升细胞系中mi R-320a的水平,再开展下述实验:(1)CCK-8、克隆形成及Edu实验检查mi R-320a对SCC细胞增殖的作用影响;(2)用transwell体外迁移侵袭和划痕实验,分析miR-320a对SCC细胞迁移和侵袭功能的影响。3、通过q RT-PCR检测及Western blot技术检测转染mi R-320a mimics后对舌癌细胞系中MRP2m RNA及MRP2蛋白表达水平的影响,探索mi R-320a降低MRP2表达的分子机制;为验证MRP2是否为mi R-320a的天然靶基因,我们采用荧光素酶实验进行检测。4、构建MRP2真核生物过表达质粒转染入已转染了mi R-320a mimics的SCC细胞系,继而使得细胞内有过表达的MRP2,再用CCK-8实验以及Edu实验检验过表达MRP2可否有效逆转mi R-320a对舌鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用。结果:1、q RT-PCR检测结果显示,NHOK中mi R-320a的表达水平明显高于所检舌鳞状细胞癌细胞系,差异有统计学意义,P<0.001。2、CCK-8实验结果显示,mi R-320a显著的抑制了SCC细胞的增殖功能,450nm吸收值显著低于NC组,P<0.01;体外克隆实验结果显示,通过两周的体外培养,SCC细胞系内NC组以及mi R-320a组都存在细胞克隆,与对应的NC组进行对比,mi R-320a组的克隆细胞的形态明显偏小,核染较NC组也明显变浅,mi R-320a组的克隆形成效率(CFE)显著低于NC组,P<0.01。3、体外划痕实验结果显示,mi R-320a组SCC的间隙存留率(各时间点存留的间距/0h的划痕间距%)显著高于NC组的存留率,P<0.01～0.001。Transwell体外迁移实验得出,SCC细胞系mi R-320a组细胞透过纤维素膜孔的数目显著低于未转染的NC组,差别有统计学意义,P<0.001;体外侵袭的分析得出,SCCmi R-320a组穿过Matrigel的细胞数明显少于对应的NC组,两组侵袭能力也有显著差别,P<0.001。4、q RT-PCR检测结果显示,SCC细胞系mi R-320a组MRP2m RNA含量明显低于对应的NC组,差异有统计学意义P<0.05。Western blot检测结果显示,SCC细胞系mi R-320a组MRP2蛋白表达水平均显著低于对应的NC组,统计分析两组Gelpro测量灰度值有显著差异,P<0.05。5、荧光素酶分析检测结果显示,在SCC细胞系,mi R-320a-WT组的活性相对于Mock-WT组以及NC-WT组显著偏低,其差异有统计学价值,P<0.001,Moc

关键词： 医学细胞生物学   形成性评价   实验内容  

摘要： 医学细胞生物学是高等医学教育的基础课程。它是一门从显微、超微和分子结构三个水平上研究细胞基本生命活动规律的科学。在医学教育中,医学细胞生物学与生物化学、组织胚胎学等医学基础课程有着密切联系,并为医学遗传学、生理学、病理学、微生物学、分子生物学等后续课程提供基础理论和相关知识。医学细胞生物学作为医学专业基础课程,在临床医学、口腔

关键词： 椎间盘退变   髓核间充质细胞   氧浓度   生物学特性  

摘要： 背景椎间盘退变是腰痛的主要病因,据统计在人群中有较高患病率,严重情况下会导致残疾,给患者带来沉重的社会经济负担。椎间盘是人体最大的无血管组织,由髓核,纤维环和软骨终板组成。椎间盘内氧浓度范围为(1%O2-5%O2),在椎间盘退变后可能使得氧浓度范围变得更低。干细胞存在于退变的髓核内,仍具有再生、分化能力等。然而在椎间盘退变的过程中内源性髓核间充质干细胞（nucleus pulposusmesenchymal stem cells,NPMSCs）为何保存“静默”状态,不向类髓核细胞分化修复退变组织,仍需深入研究。目的分离培养髓核来源的间充质干细胞,比较不同氧浓度下细胞的生物学特性（形态、干性、增殖能力、线粒体等相关基因的表达）,探索氧浓度对椎间盘退变机制的影响。方法用胶原酶消化法从腰椎骨折（外伤性）及先天性脊柱侧凸矫形患者手术摘除的4个腰椎间盘（Pfirrmann椎间盘退变分级为Ⅰ级或Ⅱ级）髓核组织中分离细胞,体外培养,传代,观察记录细胞形态。取P3代细胞,用流式细胞仪对分离得到的细胞表面抗原CD90、CD73、CD105、CD44和CD31、CD34、CD45的表达情况进行检测;用成骨、成脂A、成脂B、成软骨培养液诱导培养细胞,分别在21d、28d、21d用茜素红、油红O、甲苯胺蓝对细胞进行染色,观察其成骨、成脂、成软骨能力。基于国际干细胞治疗协会（ISCT）有关间充质干细胞（MSCs）的判定标准,对本实验得到的细胞进行综合评估鉴定。在三气培养箱的低氧条件（2%O2、5%CO2、37°C）,常规细胞培养箱的常氧条件（20%O2、5%CO2、37°C）下培养P3代细胞。通过细胞计数计算各时间点（1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、8d）细胞的数量,比较不同氧浓度的生长曲线。使用Architect c8000自动生化检测仪检测各时间点（1d、2d、3d、4d、5d）培养基的PH值、渗透压。实时荧光定量（qRT-PCR）检测不同氧浓度培养下细胞的干性基因POU5F1（OCT4）、NANOG、SOX2及扩增基因CCND1（CyclinD1）、MYC（c-Myc）、低氧诱导基因EPAS1（HIF1α）、能量基因ATP5A1、线粒体相关基因COX4I1、TFAM、MT-CO1、MT-CO2的mRNA表达情况。结果髓核来源的间充质干细胞呈典型的单层贴壁生长,纺锤样。P3代细胞免疫表型鉴定显示MSCs表面分子标记高表达CD90（80.4%）、CD73（99.9%）、CD105（99.8%）、CD44（95.9%）,低表达CD31（5.3%）、CD34（4.4%）、CD45（6.8%）。茜素红、油红O染色、甲苯胺蓝染色证实可向骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞分化。根据ISCT有关MSCs的判定标准,分离培养的细胞即NPMSCs。低氧环境下细胞形态更小,形态更接近原始间充质干细胞。细胞增殖更快,有统计学意义（P<0.05）,低氧时倍增期为31.22±1.98 h,常氧时倍增期为39.56±2.02 h。不同氧浓度各时间点培养基的PH值、渗透压差异无统计学意义（P>0.05）,且皆处于适于细胞生成的范围。低氧培养细胞干性基因POU5F1（OCT4）、NANOG、SOX2较常氧培养显著升高（P<0.05）;扩增基因CCND1（CyclinD1）、MYC（c-Myc）较常氧显著升高（P<0.05）;低氧诱导因子HIF1α相关基因EPAS1显著升高（P<0.05）;核编码的能量基因ATP5A1（三磷酸腺苷合成酶）低氧时显著升高（P<0.05）;核编码的与线粒体合成等功能有关基因COX4I1（细胞色素c氧化酶IV亚基1型同工酶）、TFAM（线粒体转录因子A）低氧时明显降低（P<0.05）;线粒体编码的与自身生成、合成功能相关基因MT-CO1（线粒体编码细胞色素c氧化酶I）、MT-CO2（线粒体编码细胞色素c氧化酶II）低氧时明显降低（P<0.05）。结论低氧环境下人NPMSCs的形态更小、扩增能力更强、PH值、渗透压无明显影响,但促进干性、扩增、低氧诱导基因及合成能量基因的表达,抑制线粒体合成功能相关基因的表达。

关键词： 胆囊癌   UBR5   细胞增殖   shRNA  

摘要： 研究背景:胆囊癌(gallbladder cancer,GBC)作为胆道系统中常见的恶性肿瘤,发病率位居消化道恶性肿瘤的第7位,恶性程度极高,病程进展快,预后很差,患者的5年生存率仅在10%左右。目前来说,胆囊癌治疗的最佳方案仍然是肿瘤根治性切除,但根治切除术后的5年生存率也仅为16.5%左右,且术后也易复发和转移。而且由于胆囊癌具有发病隐匿且缺乏相应特异性的临床症状和早期诊断指标的特性,大多数胆囊癌患者在确诊时已经处于晚期阶段,已发生局部广泛浸润或者远端转移,这种情况下的患者就失去了根治性手术治疗的机会。另外放疗、化疗等辅助性治疗对中、晚期胆囊癌治疗效果也十分有限,即使是敏感性较高的吉西他滨,其治疗的有效性也仅为36%。因而通过研究相关机制优化现有治疗手段,或寻找新的作用靶点显得极为迫切。UBR5是一种果蝇抑癌基因。哺乳动物UBR5是HECT结构域家族(同源E6相关蛋白在羧基末端)E3泛素连接酶识别正降解决定子。人类UBR5基因具有59个外显子,编码约10kb的mRNA和>300kDa的蛋白质,在各种细胞类型中广泛表达。UBR5在多细胞动物中高度保守,具有独特的结构特征,并参与调控DNA损伤反应,代谢,转录和凋亡。因此,UBR5是与肿瘤生物学广泛领域相关的细胞信号传导的关键调控者。近年大量研究发现,UBR5在许多肿瘤的发生发展中均发挥着重要作用,UBR5表达异常极有可能与恶性肿瘤的增殖和转移过程都密切相关。另外,还有研究表明,UBR5可能还与一些癌细胞的耐药性或对化疗药的敏感性等相关,但其具体机制尚不十分明确。然而相对来说,目前UBR5在胆囊癌中的研究还比较少,所以探明其对胆囊癌的影响和相关机制,填补此研究区域上的空缺是十分必要的。目的:观察UBR5基因在胆囊癌组织中的表达高低,结合病例的临床信息,分析影响UBR5蛋白表达的危险因素以及研究影响患者预后的危险因素,再运用脂质体法对人胆囊癌细胞系GBC-SD中的UBR5基因进行沉默,然后研究其对细胞增殖能力的影响,以及细胞周期和细胞凋亡情况变化。方法:1、收集天津市南开医院2014年01月至2017年10月手术切除的胆囊癌标本39例,并购买胆囊组织芯片,共计79例病例资料,所有的病例术前均未接受过任何治疗,且都有完整的病例资料以及随访结果。全部标本组织皆是常规石蜡包埋切片,运用免疫组化技术检测标本中UBR5蛋白的表达强度。用卡方检验统计分析病例资料与UBR5蛋白表达高低的相关性。2、用慢病毒将shRNA转染到人胆囊癌GBC-SD细胞中使UBR5基因沉默,构建稳定低表达UBR5蛋白的胆囊癌GBC-SD细胞株。3、分别采用半定量PCR技术和蛋白印迹(Western blotting)方法检测基因沉默后胆囊癌细胞中UBR5基因的mRNA水平和蛋白水平,并且运用流式细胞技术检测UBR5基因沉默对胆囊癌GBC-SD细胞周期及凋亡情况的影响。结果:1、UBR5表达高低影响肿瘤生长的大小、肿瘤组织学类型和分化程度(p<0.05),而与年龄、性别、远处转移、淋巴结转移、临床分期以及Nevin分期无显著性差异(p>0.05)。其中还对患者进行了生存分析,UBR5表达高低、远处转移、分化程度与患者预后密切相关(p<0.05)。2、构建出稳定敲低的sh-UBR5-GBC-SD细胞株,绿色荧光蛋白的表达达到90%以上,且经半定量PCR技术和蛋白印迹(Western blotting)方法检测出sh1-UBR5-GBC-SD细胞株中UBR5蛋白表达最低。3、与乱序对照转染组SH0相比,UBR5基因敲低后胆囊癌细胞的生长速度也明显降低,细胞周期被阻滞于G2/M期,G1/G0期比例减小,S期的比例变化不大,细胞凋亡率明显升高,表明UBR5基因敲出在体外能抑制GBC-SD细胞生长。结论:1、UBR5在胆囊癌组织中表达较高时,患者的肿瘤较大、腺癌较多且恶性程度较高;UBR5表达水平较高的患者,其生存期较UBR5低表达患者短。2、本课题组构建出稳定低表达UBR5蛋白的GBC-SD细胞株,并筛选出胆囊癌GBC-SD-SH1细胞敲低效率最高。3、在人胆囊癌GBC-SD细胞中,UBR5低表达抑制细胞的生长,诱导细胞的凋亡,调控细胞周期,其具体机制有待进一步研究,本实验为UBR5基因对人胆囊癌细胞的影响和作用提供了最基本和必须的证据。