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关键词： 胆囊肿瘤   钙网蛋白   生物学行为   p-Akt/MMP-9通路  

摘要： 目的:探讨钙网蛋白(calreticulin CRT)在胆囊癌组织中表达及其对GBC-SD细胞株生物学行为的作用。方法:利用免疫组织化学及RT-qPCR测定胆囊癌组织、癌旁组织和慢性胆囊炎组织中CRT蛋白和mRNA的表达。利用小干扰RNA转染技术沉默GBC-SD细胞株CRT表达,通过Western blotting方法检验转染效果,Cell counting kit-8(CCK-8)及平板克隆实验测定细胞的增殖能力;应用流式仪测定GBC-SD细胞株的凋亡情况及细胞周期的改变;运用划痕及Transwell小室测定GBC-SD细胞株的迁移情况;Western blotting方法检测p-Akt及MMP-9蛋白表达。结果:与肿瘤旁及慢性胆囊炎标本比较,CRT mRNA在胆囊癌标本中高表达(t=5.571,P<0.05)。siCRT-1、siCRT-2实验组24h及48h相对存活率分别为(71.5±6.3)%,(79.5±2.7)%;(62.6±8.8)%,(55.6±2.6)%。空白组,阴性对照组,siCRT-1,siCRT-2的凋亡率分别为(3.0±1.8)%,(4.7±1.3)%,(13.6±1.0)%,(20.0±4.0)%。划痕实验显示:空白组,阴性对照组,siCRT-1,siCRT-2的划痕修复率分别为(0.67±0.02),(0.58±0.02),(0.22±0.01),(0.37±0.04)。Transwell结果显示,空白组,阴性对照组,siCRT-1,siCRT-2的细胞穿膜个数分别为(301.8±10.7),(296.6±14.5),(178.0±10.1),(165.2±12.0)。与空白组及阴性对照组比较,siCRT-1,siCRT-2实验组24h,48h相对存活率明显降低,凋亡上升,迁移能力下降(F=29.310,118.618,69.651,144.515,190.145,P<0.05)。沉默CRT相关基因后,与空白组及阴性对照组相比,p-Akt及MMP-9蛋白表达程度均下降。结论:CRT在胆囊癌中高表达,CRT表达下调介导的胆囊癌生物学行为的改变可能与p-Akt/MMP-9通路相关。

关键词： 肝细胞癌   AGTR1   洛沙坦   JAK2  

摘要： 近年来,基因组测序技术的快速发展,加深了人们对肿瘤异质性的认识,含有大量肿瘤临床样本多组学数据库的TCGA及Oncomine分析平台为肿瘤个体差异的基因分型、治疗与生存期的整合研究提供了大样本数据库,受到国内外学者的广泛关注,并越来越多地运用到肿瘤的个体化精准治疗的研究中来。肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是常见的恶性肿瘤之一,现已成为我国第二世界第三位的癌症死亡原因。我国为肝癌高发病率国家,手术切除被认为是可能治愈初诊HCC患者的疗法,但只有约10%20%的患者肿瘤可切除,且手术病人面临肿瘤复发的可能,最近的统计发现2000年至2014年间我国肝癌患者5年生存率仅为14.1%。近年来针对肝癌靶向治疗药物的研发逐渐成为热点,但由于大量不同癌基因以及抑癌基因的突变参与了肝细胞癌的发生发展,而其精确的分子机制尚不完全清楚,导致靶向制剂对肿瘤患者个体的治疗效果差异大,药物靶向性较低。目前,作为首个美国FDA批准上市,用于晚期HCC靶向治疗的多激酶抑制剂索拉菲尼,其有效率也仅为25%。1995年Lever在The Lancet杂志发表一项大型开创性回顾研究,发现服用血管紧张素酶抑制剂（angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEIs）和血管紧张素受体抑制剂（angotensin recepter blockers,ARBs）的病人比未服用该类药物的病人患乳腺癌和肺癌的风险更低。随后另一部分的学者进行相关研究却未得到类似结果。这个不同的研究结果引起众多学者的关注,在这些研究中除了入选患者种族、人群及服药周期等不同因素外,由于受到基因测序技术的限制,大部分的患者未做个体基因表达谱测定,导致患者个体基因差异未做考虑。在后续的研究中发现,在肾素血管紧张素系统中一个关键受体AT1R（type-1 angiotensin II）其编码的基因AGTR1在多个肿瘤中发生异质性表达,并且高表达该基因会引起多种肿瘤包括乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌等的不良预后,但是AGTR1基因在肝细胞癌中的表达及对肝癌的影响却少有报道。我们对TCGA数据库中全部3个肝细胞癌的临床374例RNA芯片数据的AGTR1基因表达与临床生存期的相关性进行分析,提示AGTR1在肝细胞癌的发生发展中可能具有重要作用的基础上,进行了AGTR1在肝细胞癌中的表达及其对肝癌影响的研究。第一部分AGTR1差异表达对肝细胞癌发展的影响选用Oncomine数据库中全部3个肝细胞癌的临床347例RNA芯片数据,发现AGTR1基因在这3个数据集中均位于过表达基因前5%,并在部分肝细胞癌患者中出现高表达。同时在TCGA数据库中我们对全部374例的肝细胞癌临床样本进行差异分析,发现AGTR1表达前80位和后80位的样本AGTR1的相对表达具有显著差异,进一步结合数据库中肝细胞癌样本预后数据,采用Kaplan-Meier生存分析,发现低表达组患者的生存期较高表达组显著延长。以上结果说明,AGTR1在部分肝细胞癌患者中呈高表达,且这种高表达与患者的生存期相关,由此初步推断AGTR1在肝细胞癌的发生发展中可能具有重要作用。为了证明AGTR1基因在肝细胞癌发生、发展及转移中的作用,我们筛选低表达AGTR1的SMMC-7721和BEL-7404细胞,对它们进行过表达AGTR1的改造,同时选择高表达AGTR1的MHCC-97H细胞进行干扰表达的改造,体内外研究AGTR1对肝细胞癌的作用。结果发现AGTR1在体外实验中具有促进肿瘤细胞增殖、克隆形成、细胞侵袭及迁移的作用,而在体内试验中能加速裸鼠皮下成瘤试验的肿瘤形成及生长。此外,采用含有luciferine片段的载体构建sh-AGTR1和sh-nc,稳筛低表达AGTR1的MHCC-97H细胞,采用小动物活体成像系统,在体观察不同AGTR1表达量的MHCC-97H细胞在脾脏肝转移模型中的转移情况,发现抑制AGTR1可以降低MHCC-97H肿瘤细胞的脾脏肝转移能力。第二部分:AGTR1差异表达影响肝细胞癌生长的作用机制研究为了探讨AGTR1促进HCC细胞生长、转移作用机制,我们采用Westen Blot方法检测过表达和干扰表达AGTR1对HCC细胞信号通路的影响,发现过表达HCC细胞中的AGTR1可以促进JAK2、STAT3、ERK的磷酸化,抑制AGTR1则可以降低相应分子的磷酸化。且JAK2特异性抑制剂AG490可以抑制AGTR1介导的HCC细胞的生长、克隆形成、迁移及侵袭能力。此外,我们先用TCGA数据库中374例肝细胞癌患者的mRNA芯片数据,对VEGF与AGTR1进行相关性分析,发现随着AGTR1的表达量的上升,VEGF与AGTR1表达相关性也随之上升。对低表达AGTR1的SMMC

关键词： 间充质干细胞   miR-99a-5p   miR-425-5p   增殖   分化   细胞因子  

摘要： 背景和目的:间充质干细胞(MSCs)是一种具有高度自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,其来源广泛,可在多种组织和器官中获取。Toll样受体(TLRs)是一类天然免疫受体,在固有免疫和获得性免疫过程中发挥重要的作用。研究发现TLRs能够参与调节MSCs迁移、分化及细胞因子分泌等多种生物学功能。micro RNA(mi RNA)是一类长约19～23个核苷酸的微小RNA,通过与靶基因结合,导致靶基因降解或翻译抑制,对靶基因进行负向调控。micro RNA参与调节MSCs的多种生物学特性,如增殖、迁移、分化、调亡等结果。目前已在多种细胞类型中证实TLRs可调节mi RNA的表达,反之mi RNA又可作为重要的调节分子调控TLR信号。因此,我们相信TLRs相关mi RNA更有可能调控MSCs的生物学特性。本课题组前期证实了BM-MSCs表达TLR2和TLR4,且利用TLR2激动剂(Pam3CSK4)或TLR4激动剂(LPS)刺激BM-MSCs能够影响后者的迁移、分化、细胞因子分泌及造血支持等生物学特性,并采用Illumine高通量测序检测了Pam3CSK4或LPS刺激前后BM-MSCs胞内micro RNA表达谱的变化。根据检测结果,我们选取了刺激后明显上调的mi R-99a-5p和明显下调的mi R-425-5p,并探讨这两种mi RNA对BM-MSCs生物学特性的影响。方法:分离培养健康志愿者的BM-MSCs,用mi R-99a-5p、mi R-425-5p类似物或抑制物转染细胞,q RT-PCR(定量实时聚合酶链式反应)检测转染效率。通过增殖实验、分化实验、酶联免疫吸附法(ELISA)检测mi R-99a-5p、mi R-425-5p对BM-MSCs增殖、分化、细胞因子分化能力的影响。结果:与对照组相比,转染mi R-99a-5p、mi R-425-5p类似物后,相应的mi RNA表达量能显著上调(P<0.0001),反之转染mi R-99a-5p、mi R-425-5p抑制物后,相应的mi RNA表达下调(P<0.0001)。在成骨分化实验中,成骨诱导结束后茜素红染色镜下观察结果提示:过表达mi R-99a-5p能促进BM-MSCs成骨分化;低表达mi R-99a-5p抑制其成骨分化。后氯化十六烷基吡啶溶解茜素红染料,酶标仪检测562 nm处吸光度值,得到与镜下观察相同的结果。而在成脂分化试验中,转染mi R-99a-5p类似物或抑制物对BM-MSCs成脂分化无明显影响。另外,过表达或低表达mi R-425-5p对BM-MSCs成脂和成骨分化均无明显影响。EILSA检测结果提示BM-MSCs分泌TGF-β1浓度值明显高于IL-1β、GM-CSF。过表达mi R-99a-5p促进BM-MSCs分泌TGF-β1(P<0.05),低表达mi R-99a-5p对BM-MSCs分泌TGF-β1无明显影响。过表达mi R-425-5p可抑制GM-CSF分泌(P<0.05),而低表达mi R-425-5p对GM-CSF无明显影响。结论:*** R-99a-5p、mi R-425-5p对BM-MSCs增殖能力无明显影响。2.过表达mi R-99a-5p促进BM-MSCs成骨分化,而对成脂分化无明显影响。3过表达mi R-99a-5p促进BM-MSCs分泌TGF-β1,过表达mi R-425-5p抑制BM-MSCs分泌GM-CSF,说明mi R-99a-5p、mi R-425-5p对BM-MSCs细胞因子分泌有一定影响。***2/4相关mi RNA影响BM-MSCs生物学特性。

关键词： Lemur酪氨酸激酶3   肺鳞癌   细胞增殖   细胞侵袭  

摘要： 目的:探讨慢病毒介导的Lemur酪氨酸激酶3(Lemur tyrosine kinase-3,LMTK3)基因沉默对肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖、细胞周期和侵袭能力等生物学行为的影响及其分子作用机制。方法:采用LMTK3-短发卡RNA(LMTK3-small hairpin RNA,LMTK3-sh RNA)慢病毒质粒转染肺鳞癌SK-MES-1细胞,嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞株。通过实时定量聚合酶链反应(Real-Time quantitative polymerase chain reaction,Real-Time q PCR)和Western blot检测转染后细胞中LMTK3、β-连环蛋白(β-catenin)和周期素D1(cyclin D1)基因沉默情况。同时进行细胞功能实验:细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit,CCK-8)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell侵袭实验分析细胞侵袭能力。结果:LMTK3-sh RNA有效沉默LMTK3基因在肺鳞癌SK-MES-1细胞中的转录和翻译。实验(LMTK3-sh RNA)组细胞中LMTK3 m RNA相对表达量(0.24±0.18)显著低于空白对照(mock)组(1.00±0.18)和阴性对照(NC)组(0.93±0.19),(P<0.05)。实验组细胞LMTK3蛋白表达量(0.49±0.07)亦显著低于mock组(1.00±0.11)和NC组(0.99±0.07),(P<0.05)。LMTK3基因沉默可抑制细胞中β-catenin和cyclin D1的表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。LMTK3-sh RNA转染抑制了SK-MES-1细胞的增殖;实验组细胞周期明显阻滞于G1期;实验组、mock组和NC组穿膜细胞个数分别为(45±5)、(198±8)、(171±4)个,实验组与mock及NC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LMTK3基因沉默可显著抑制SK-MES-1细胞的增殖、侵袭能力,并阻滞细胞周期于G1期,其机制可能与其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制有关。

关键词： 猪   鼠胚胎干细胞   异种细胞融合   融合效率   异种融合细胞特性  

摘要： 细胞融合实验始于1969年,细胞融合是研究细胞多能性、命运决定及基因调控的重要手段。然而目前文献报道的细胞融合方法效率一般在1%左右,且异种细胞融合效率更低。通过细胞融合改变细胞的生物学特性,为进化生物学、发育生物学和遗传学等研究提供新的模型和工具。猪在生理结构、形态学和免疫学上与人有着许多相似的特性,因此猪在人类疾病临床研究中常被作为动物疾病模型,但是猪的胚胎干细胞系仍然还没有被建立成功,通过探索鼠猪异种融合细胞的特性为猪胚胎干细胞建系的研究工作添砖加瓦。针对这些问题,本研究进行以下三部分的探索:(1)探索提高细胞融合效率的方法;(2)探索鼠猪异种融合细胞的生物学特性;(3)探索鼠猪异种融合细胞所依赖的生长因子。为提高细胞融合效率,有效的为相关研究提供更丰富的研究材料,本研究采用单细胞融合方法,将小鼠胚胎干细胞(mESC)与猪的成纤维细胞(PEF)以及猪多能性干细胞进行融合,用0.25%的胰酶将细胞消化成单细胞,利用细胞凝集素构建一对一的细胞对,在含有50%聚乙二醇中培养1min,随后将细胞继续培养7天,成功融合的细胞既表达红色荧光也表达绿色荧光,结果发现单细胞融合法的克隆效率(0%)显著高于传统融合的效率。然后,将融合细胞在小鼠胚胎干细胞的培养条件下培养,融合细胞可传至30代左右,并可以进行正常的冻存和复苏。融合细胞既表达猪的种属特异基因Stat3,也表达小鼠的种属特异基因Wdr59和Akt1。融合细胞呈AP阳性,多能性基因Sox2相对于猪成纤维细胞高表达。经过AKT、BMP、TGF、FGF、LIF、WNT等信号通路的相关因子检测,我们发现融合细胞与小鼠胚胎干细胞更相似,Bmp4,Tgfβ2,Fgfr1等基因处于高表达水平。另外,核型鉴定结果表明,融合细胞中猪染色体严重丢失。通过上述研究,得到结论为:(1)通过优化融合方法我们成功的建立单细胞融合体系,适用于同种细胞融合和异种细胞融合,融合效率高,操作方便;(2)我们成功获得两株同种融合细胞系和四株异种融合细胞系,融合细胞呈AP阳性;表达多能性基因;可体外形成拟胚体,具有向三胚层分化能力;(3)融合细胞系高表达Bmp4,Tgfβ2,Fgfr1等信号通路关键因子。(4)小鼠染色体在异种融合细胞系中较稳定存在,而猪染色体丢失较严重。

关键词： 甲状腺乳头状癌   BMP-4   生物学特性   上皮间质转化   信号通路  

摘要： 研究背景甲状腺癌作为常见的内分泌器官来源的恶性肿瘤,发病率呈逐渐上升趋势,其中最常见的类型是甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)。经过有效合理的治疗,PTC一般有着良好的预后,但是有部分乳头状癌具有较高的侵袭性,出现肿瘤进展、转移和术后复发等,导致患者的生存率及生存质量下降。研究显示甲状腺癌患者中有20～40%的病人发生肿瘤复发,3～15%甲状腺癌患者存在远距离转移,如果在疾病诊断时即存在远距离转移,则此类患者预后更差,5年生存率仅为50%。因此,研究PTC细胞的生长、浸润和转移过程,寻找PTC中差异性表达、预测肿瘤侵犯、转移的生物学标记和干预治疗的分子,对于进一步提高患者的治愈率与生存率具有重要的意义。癌上皮细胞在某些因素作用下可以发生形态改变、丢失极性,细胞间黏附性下降、经过细胞骨架重塑并获得表达间质细胞成分,从而展现出迁移的表型,这个过程被称为上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT),其分子标志物包括上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、角蛋白,间质细胞标志物如波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)等。通过EMT,肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力,在肿瘤转移中发挥作用,这是对于肿瘤转移解释的重要理论,是近年的研究热点。研究显示,EMT在甲状腺癌细胞侵袭迁移中起重要作用。骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMPs)是一个细胞外信号分子家族,是转化生长因子-β(Transforming growth factor-beta,TGF-β)超家族的成员之一。BMPs拥有多种作用,能够调节细胞的增殖、分化、凋亡和迁移、决定细胞命运,并且研究表明BMPs在各种恶性肿瘤中存在异常表达现象,在肿瘤生长及侵袭迁移中发挥重要作用。BMPs发挥作用主要是通过Smad依赖性及非Smad依赖性两条信号通路,其中Smad依赖性通路(即骨形成蛋白信号通路)是一个经典的信号通路,Smad蛋白是该通路中细胞内信号传导的枢纽,其中受体调节Smads(R-Smads)包括Smadl、2、3、5、8,BMPs信号转导通路中是Smadl、5、8参与。此外BMPs还可激活其他信号通路来发挥作用,如细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)、p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mitogen-activated protein kinases,p38 MAPK)通路。作为BMPs家族的一员,BMP-4在调节各种类型细胞的生物学行为方面有着广泛的作用,例如对于胚胎发生、个体形成、非对称器官的生长以及造血系统的发育等都有着影响。研究表明,BMP-4蛋白在多种类型肿瘤里表达异常,且与肿瘤的生长、侵袭迁移及预后有关,并且多项研究表明BMP-4与肿瘤细胞的上皮间质转化有关。迄今为止,关于BMP-4在PTC中作用的研究尚未见报道。既然研究发现PTC的侵袭及转移与上皮间质转化有关,而BMP-4在诱导上皮间质转化中发挥重要作用,并且BMP-4对肿瘤细胞的生长也有影响,那么BMP-4在PTC中表达如何?对PTC细胞的生物学特性是否有影响?是否可促进PTC细胞发生上皮间质转化?BMP-4在PTC中发挥作用相关的信号通路是什么?针对上述问题,本研究进行了探讨。第一部分BMP-4在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与侵袭转移的关系目的研究Bone morphogenetic protein 4(BMP-4)在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与肿瘤侵袭转移的关系。方法1.收集青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院甲状腺外科收治的82例PTC患者的癌组织及其中41例患者的癌旁组织,所选病例均经病理诊断为PTC,并收集患者的临床病理资料。2.采用免疫组织化学方法检测PTC组织及癌旁组织中BMP-4的表达。3.分析BMP-4表达与PTC患者临床病理特征之间的关系(性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤是否多灶、有无包膜浸润、有无淋巴结转移及TNM分期)。结果***组织中存在BMP-4的表达,BMP-4蛋白位于细胞浆内,呈弥漫性分布,表达强弱不等,由弱阳性到强阳性。癌旁组织中BMP-4表达为阴性。BMP-4在PTC与癌旁组织中的表达有显著差异。***组织中BMP-4的表达与患者的性别、多灶性、淋巴结转移无相关性(P均>0.05)。BMP-4在年龄≥45岁组患者中的高表达率高于年龄<45岁组(P<0.01),在肿瘤>1cm患者中的高表达率高于肿瘤≤1cm患者(P<0.01),在有包膜浸润患者中的高表达率高于无包膜浸润患者(P<0.01),在TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者中的高表达率高于Ⅰ+Ⅱ期患者(

关键词： 医学细胞生物学   科研素养  

摘要： 细胞生物学是一门生命科学的前沿学科,同时也是医学专业的一门基础课程。在该课程的教学过程中,面对知识更新速度快、知识点多、课时量少、学生基础参差不齐等因素而导致教学效果不理想的问题。我们采用了优化教学内容、利用多媒体教学、启发式教学、案例教学方法、调整考核结构等方式提高学生的学习兴趣及动力,以期优化教学效果,适应应用型课程改革的要求。细胞生物学是一门生命科学的前沿学科,同时也是医学专业的一门基础课程。其也是以后学习组织胚胎学、医学免

关键词： UCA1   子宫内膜异位症   凋亡   LC3   VMP1   在位内膜细胞  

摘要： 目的:本研究旨在通过体外实验验证UCA1在子宫内膜异位症发病机制中的作用。采用慢病毒介导的RNAi技术对含si-UCA1的慢病毒颗粒进行包装。转染子宫内膜异位症在位内膜细胞(ESCs),稳定沉默UCA1基因的表达,深入探讨UCA1基因对该细胞增殖、凋亡及自噬的作用。研究方法:1、原代培养子宫内膜内异症在位内膜间质细胞(ESCs)。2、利用si-UCA1序列的慢病毒转染ESCs细胞。分组:UCA1基因沉默组(si-UCA1),转染阴性对照组(ESCs-C),未转染组(ESCs)。3、利用实时荧光定量PCR技术检测沉默UCA1基因后mRNA在ESCs中的表达。4、利用CCK8细胞增殖实验检测UCA1表达改变前后细胞增殖能力的变化。5、利用流式细胞仪实验检测UCA1表达改变前后细胞凋亡能力的改变。6、利用Lyso tracker实验检测UCA1表达改变前后细胞溶酶体荧光强度的变化。7、利用Westernblot检测UCA 1表达改变前后ESCs中LC3和VMP1的表达变化。结果:1、si-UCA1对UCA1 mRNA表达的影响:si-UCA1组UCA1 mRNA相对表达水平显著低于ESCs组(P<0.01)。ESCs-C组UCA1 mRNA相对表达水平与ESCs组无明显差异(P>0.05)。2、si-UCA1降低ESCs细胞增殖能力:si-UCA1转染ESCs细胞后明显降低细胞的增殖能力。si-UCA1在24h,48h,72h各个时间点的相对增殖能力明显低于ESCs组相应各个时间点的增殖能力(P<0.05)。ESCs-C组在24h,48h,72h各个时间点的相对增殖能力与ESCs组相应各个时间点增殖能力基本一致(P>0.05)。3、si-UCA1促进ESCs细胞凋亡能力:si-UCA1组细胞凋亡率明显高于ESCs组(P<0.01),ESCs-C组细胞凋亡率与ESCs组比较差异无统计学意义(P>0.05)。4、si-UCA1促进ESCs细胞溶酶体活性:si-UCA1组细胞溶酶体荧光强度明显高于ESCs组(P<0.01),ESCs-C组细胞溶酶体荧光强度与ESCs组比较差异无统计学意义(P>0.05)。5、si-UCA1对LC3和VMP1蛋白表达的影响:si-UCA1组LC3和VMP1蛋白相对表达水平显著高于ESCs组(P<0.01)。ESCs-C组LC3和VMP1蛋白相对表达水平与ESCs组无明显差异(P>0.05)。结论:体外实验沉默UCA1基因,能有效降低内异症在位内膜间质细胞(ESCs)增殖并提高细胞凋亡、自噬能力。UCA1基因可能通过改变子宫内膜细胞生物学特性,参与子宫内膜异位症的发生发展,提示UCA1可以作为子宫内膜异位症治疗的一个潜在基因靶点。

关键词： 非编码RNA   GAS5   肝细胞癌   细胞周期调控蛋白  

摘要： 目的检测生长特异性调节转录因子5(GAS5)在肝癌组织表达,探究GAS5质粒(pc DNA-GAS5)转染对Hep3B细胞及GAS5小干扰RNA(si RNA-GAS5)转染对Hep G2肝癌细胞的侵袭增值的影响,并进一步分析其可能的调控机理。方法选取手术肝癌切除的癌组织及其癌旁组织20例,q RT-PCR检测肝癌及其癌旁组织长链非编码RNA GAS5(GAS5)表达以及Western blot检测周期依赖性蛋白激酶6(CDK6)表达。利用脂质体转染pc DNA-GAS5和si RNA-GAS5干扰Hep3B和Hep G2细胞株中GAS5表达水平,划痕实验、Transwell和CCK-8检测转染Hep3B和后Hep G2细胞的迁移、侵袭及增殖能力,流式细胞仪检测干扰后Hep G2细胞凋亡周期变化。Western blot、q RT-PCR验证细胞周期调控蛋白周期素D1(Cyclin D1)、CDK6、E2F-1表达。结果肝癌组织中GAS5表达水平低于对应癌旁组织,CDK6表达高于癌旁组织。转染pc DNA-GAS5的Hep3B细胞迁移侵袭增值能力明显减弱;转染si RNA-GAS5的Hep G2细胞迁移侵袭增值能力明显增强;转染si RNA-GAS5的Hep G2细胞Cyclin D1、CDK6、E2F-1蛋白表达下降,干扰后的Hep G2细胞周期发生G1/S期改变。结论GAS5在肝癌组织的表达出现下调;GAS5可明显抑制肝癌细胞迁移、侵袭及增殖能力;GAS5调控肝癌细胞周期变化可能是通过Cyclin D1/CDK6/E2F-1通路。

关键词： 慕课   细胞生物学   教学改革改革策略  

摘要： 慕课是当下备受关注的一种在线学习模式.目前,高校各类专业课程普遍在尝试将慕课引入教学中.本文中,在简述慕课教学模式基础上,对细胞生物学实验教学存在的问题进行分析,最后提出了基于慕课的细胞生物学课程教学改革策略.