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关键词： 肝癌细胞   FBP1基因   转移   侵袭  

摘要： 目的据有关文献报导,FBP1在肺癌、乳腺癌、肾癌、胃癌几种癌症类型中发现对肿瘤发生和发展起关键作用。结合课题组之前的研究结果,在三株不同转移潜能的肝癌细胞株中所筛选出的差异表达蛋白,与糖酵解/糖异生的相关性排名前列,FBP1作为糖异生反应的限速酶之一,我们猜测其对人肝癌细胞的侵袭迁移有影响。因此,本课题通过慢病毒载体介导siRNA敲低肝癌MHCC97-H细胞中FBP1基因,试图探讨该基因对MHCC97-H肝癌细胞生物学特性的影响,探明FBP1基因是否为影响肝癌细胞生物学效应的靶向基因,从而为抑制肝癌转移侵袭的分子靶点提供新的实验依据。方法1.验证MHCC97-H、HCCLM3、MHCC97-L细胞株间FBP1基因的差异表达;2.慢病毒感染肝癌细胞株MHCC97-H,筛选稳定敲低FBP1i的细胞株并验证;3.对FBP1i细胞株进行体内、外肿瘤生物学行为进行验证。结果***法检测在HCCLM3细胞株中FBP1表达高于MHCC97-H及MHCC97-L细胞株;稳定敲低细胞株FBP1i的FBP1基因的蛋白条带较对照Scrambled细胞明显减少;2.在细胞生长,周期,凋亡,迁移等方面,FBP1i与对照组MHCC97-H及Scrambled细胞株之间无明显的差异(p>0.05);FBP1i的乳酸产生量明显高于对照组(p<0.05),线粒体有氧呼吸较对照组减弱;3.裸鼠肝原位接种实验均未见转移。结论FBP1基因对肝癌MHCC97-H细胞的侵袭、迁移无明显影响。

关键词： 胃癌   eIF4A1   AKT   细胞生物学   裸鼠  

摘要： 目的:探讨沉默eIF4A1基因对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的生物学行为和胃癌裸鼠移植瘤模型的影响及其可能作用机制。方法:在37℃、5%CO2细胞培养箱中,用含有10%胎牛血清的RPMI1640培养基常规培养人胃癌SGC-7901细胞。取对数生长期胃癌SGC-7901细胞每孔3.5×10～5个接种于6孔板。当细胞融合度达到40%-60%时,按转染说明书步骤,分别将eIF4A1基因沉默重组慢病毒颗粒LV-EIF4A1-RNAi（44682-1）、LV-EIF4A1-RNAi（44683-1）、LV-EIF4A1-RNAi（44684-1）和对照慢病毒颗粒CON077分别感染人胃癌SGC-7901细胞,分别标记为沉默组（eIF4A1-RNAi）(2、3、4)和阴性对照组（CON077）,另外设立一组未做任何处理的SGC-7901胃癌细胞作为空白对照组（control）。转染后,用嘌呤霉素筛转染细胞并选出稳定转染株。用实时荧光定量PCR检测各组人胃癌SGC-7901细胞eIF4A1基因的相对表达量,筛选出eIF4A1表达量最低为实验所用的沉默组（eIF4A1-RNAi）,并检测该沉默组（eIF4A1-RNAi）与阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）的AKT基因的相对表达量。用CCK-8法检测初始样本量为4×10～3个的各组人胃癌SGC-7901细胞的增殖能力;用流式细胞仪检测各组人胃癌SGC-7901细胞5×10～6个细胞的凋亡情况和1×10～6个细胞的周期分布;用Transwell实验分别检测各组人胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测各组细胞eIF4A1和AKT的蛋白表达水平。取4周龄裸鼠24只,随机分成3组。取对数生长期的各组人胃癌SGC-7901细胞,调整细胞浓度为1.5×10～6个/ml,分别于每只裸鼠的左上肢腋窝下接种200ul。常规饲养,每天观察并记录裸鼠精神、营养等状态,成瘤后隔三天测量记录瘤体体积。21天后用颈椎脱臼法处死各组裸鼠,取出各组裸鼠的皮下瘤、肝脏、肺脏组织并浸泡于10%福尔马林中,24小时后做成蜡块组织。把各组裸鼠的皮下瘤、肝脏、肺脏蜡块组织切片,HE染色后,观察其组织的病理改变。把取各组裸鼠的皮下瘤蜡块组织切片,用免疫组织化学检测方法,检测各组裸鼠组织切片的eIF4A1蛋白表达。结果:实时荧光定量PCR检测显示LV-EIF4A1-RNAi（44683-1）组eIF4A1基因的相对表达量最低为0.31±0.04,低于空白对照组（control）的表达量的0.5倍,符合实验要求,选择该组为eIF4A1沉默组（eIF4A1-RNAi）;CCK-8实验检测发现沉默组（eIF4A1-RNAi）细胞增殖活力明显低于阴性对照组（CON077）组和空白对照组（control）;流式细胞仪检测发现沉默组（eIF4A1-RNAi）细胞凋亡率明显比阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）高,并且沉默组（eIF4A1-RNAi）与阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）比较,细胞更多处于S期,G1/G2期细胞则相对减少;Transwell实验发现较阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）,沉默组（eIF4A1-RNAi）细胞的迁移、侵袭能力下降;Western blotting检测发现,较阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）,沉默组（eIF4A1-RNAi）的eIF4A1和AKT基因的蛋白表达明显降低;构建裸鼠皮下瘤模型,发现较阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）,沉默组（eIF4A1-RNAi）裸鼠皮下瘤增长速度明显减慢;免疫组化实验显示,较阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）,沉默组（eIF4A1-RNAi）eIF4A1和AKT的表达量明显降低。CON077组与control组比较,上述指标差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:沉默eIF4A1基因能提高人胃癌SGC-7901细胞凋亡率,抑制增殖、迁移和侵袭能力、使细胞周期阻滞于S期,沉默eIF4A1基因能够抑制人胃癌裸鼠皮下瘤模型肿瘤的生长速度,其机制可能与eIF4A1抑制AKT的表达量相关。

关键词： 乙型肝炎病毒   HBX蛋白   生物学活性   影响  

摘要： 乙型肝炎病毒HBV是威胁中国人民健康最主要的疾病之一,约60-70%的人群都携带有HBV感染。HBV可致急、慢性乙型肝炎,造成肝纤维化、肝硬化,最终发展成为肝细胞癌。HBV病毒的x基因是其基因组中最小却最重要的开放读码框。其编码合成的HBX蛋白不会分泌到细胞外,而是留在细胞中发挥着反式激活的功能,调节细胞信号通路,进而对细胞的形态学和生物学状态产生不良影响,最终导致肝脏的一系列病理性改变。对此,本篇综述旨在从最基本的细胞层面,对HBX致感染细胞生物学活性改变的相关研究内容作一个全面的综述,以期为后续的肝脏疾病进展机制研究奠定一个根本的全面的理论基础。

关键词： 大学教材   高中生物课程资源   开发与利用  

摘要： 《普通高中生物课程标准(2003年版)》认为,教师在教学的过程中,充分利用教学环境中现有或潜在的课程资源,并积极有效的开发新的课程资源,是优化教学、提高教学效果的方法,是推进我国新课程改革的重要手段。目前,我国学者对高中生物课程资源开发与利用的研究较少,多数学者的研究内容集中在理论层面,有关开发与利用高中生物课程资源的实践研究更是屈指可数。笔者通过梳理文献,分析我国高中生物课程资源开发与利用的现状。从高中生物教学的实际需求出发,确定开发利用的高中生物课程资源是大学教材《细胞生物学》。随后,笔者将人教版高中生物必修一《分子与细胞》中有关“细胞”的知识与图片,和《细胞生物学》中的内容进行整合。结合教学实际情况,分析整合内容是否有助于学生理解高中教材内容、是否有助于优化高中教学效果、是否有助于学生能力的培养。然后,通过问卷调查法和教师访谈法,了解高中生物教师开发利用大学教材的意识和态度,考察高中生物教师开发利用大学教材的过程中遇到的问题和面临的困难。最后,笔者从高中生物教师开发利用大学教材意识的培养、开发利用大学教材的基本原则和建立可利用的课程资源库三个方面提出策略,希望能够给开发大学教材的高中生物教师提供一些参考帮助。

关键词： 急性髓系白血病   细胞生物学   谷氨酰胺代谢通路   金属硫蛋白   二甲双胍  

摘要： 目的：探讨干扰谷氨酰胺代谢通路对急性髓系白血病（AML）细胞株SKM-1细胞的生物学特性的影响，并分析其可能的作用机制。　　方法：将AML细胞系SKM-1细胞作为研究对象，分别用不含谷氨酰胺的培养基进行“饥饿”培养处理，或用谷氨酰胺酶1（GLS1）抑制剂BPTES干扰SKM-1细胞代谢通路，进而联合阿糖胞苷共同处理SKM-1细胞。借助于CCK8试剂检测细胞增殖、PI-AnnexinV标记细胞后应用流式细胞术检测细胞凋亡。谷氨酰胺饥饿处理SKM-1细胞后用基因芯片检测处理前后相关基因变化情况，并用实时荧光定量PCR验证基因芯片结果。选择基因芯片存在明显差异表达的金属蛋白酶(MT)家族中的MT2A为研究对象，下调其表达，观察SKM-1细胞的增殖、凋亡情况。用不同浓度的二甲双胍作用于SKM-1细胞，干扰代谢通路，CCK8试剂检测细胞增殖，确定二甲双胍作用于SKM-1细胞的最适浓度和时间。二甲双胍进一步联合阿糖胞苷或者联合“谷氨酰胺饥饿”处理方法作用于SKM-1细胞，检测细胞增殖、凋亡情况以判断二者的协同作用。用流式细胞术检测相关处理后细胞内活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)变化情况。Western Blot检测相关处理后凋亡通路Caspase3、聚ADP核糖聚合酶(Poly ADP-ribose polymerase，PARP)的蛋白表达水平。　　结果：谷氨酰胺饥饿培养以及谷氨酰胺酶抑制剂BPTES能够抑制SKM-1细胞增殖，促进细胞凋亡，联合阿糖胞苷后SKM-1凋亡率更高。谷氨酰胺饥饿后部分金属硫蛋白(metallothionein，MT)家族基因表达上调。下调MT家族之一的MT2A基因后，SKM-1细胞的增殖不受影响，但凋亡率增加。二甲双胍促进SKM-1细胞凋亡，二甲双胍联合阿糖胞苷作用于SKM-1细胞比单独处理组的凋亡率更高。谷氨酰胺饥饿联合二甲双胍促进细胞凋亡，增加细胞ROS的表达。凋亡通路Caspase3，PARP的表达水平均增加，且联合处理组增加更显著。　　结论：1、谷氨酰胺代谢通路参与了AML生物学活性的调控，干预代谢通路可增强白血病细胞对化疗药物的敏感性。2、谷氨酰胺饥饿与二甲双胍联合具有协同抗白血病作用，其机制与影响细胞内氧化呼吸作用增加ROS的产生有关。3、金属硫蛋白可能参与调控白血病细胞的谷氨酰胺代谢通路。

关键词： 小凹蛋白-1   恶性黑色素瘤   表皮生长因子受体   增殖   转移  

摘要： 恶性黑色素瘤（malignant melanoma,MM）多好发于皮肤、粘膜。是起源于胚胎期神经嵴的恶性肿瘤,易转移,预后较差,发病率为全部恶性肿瘤的1%3%。然而近十几年来,恶性黑色素瘤的发病率日益增加。传统的手术、放化疗一直是恶性黑色素瘤治疗的主要方法,但对于晚期患者来说,手术治疗无生存获益,且其对放疗和化疗敏感性欠佳。近年来,随着黑色素瘤相关突变基因的发现与深入研究,分子靶向药物为其治疗带来了突破性进展。因此,探索更多的有效靶点成为了当前首要任务。表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）分子量为170kDa,是一种参与细胞增殖、存活、转移的蛋白质。表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGF）为其配体,当EGFR受到刺激后,可与EGF发生结合,产生构型变化,形成同源或异源二聚体,使其胞内段受体酪氨酸激酶发生自身磷酸化,进而激活其下游通路。其中主要包括Ras/Raf/MEK/ERK、PI3K/AKT通路等。目前有研究证明,包括黑色素瘤在内的人多种恶性肿瘤中均可发现有EGFR过表达现象的存在,且EGFR的表达水平可与治疗效果差、疾病恶化快以及存活率低有关。小凹蛋白-1（caveolin-1,Cav-1）是分子量为21-24kDa的膜内在蛋白,是膜内陷囊泡的重要结构蛋白。Cav-1由178个氨基酸残基组成,位于肽链中的疏水残基（102-134）在膜结构上形成特殊的发卡样结构,将Cav-1蛋白分成N端及C端两个区域,其中N端为主要的功能区域,该区域通过与EGFR相连接,调控EGFR酪氨酸激酶的活性。目前已有多项研究显示,Cav-1可在不同恶性肿瘤中发挥抑制或促进的作用。然而Cav-1通过调控EGFR在恶性黑色素瘤细胞中发挥作用的研究尚未见报道。根据预实验结果提示,恶性黑色素瘤UACC647细胞中的Cav-1的表达量明显高于M2细胞,而M2细胞中Cav-1表达量较少。故本次研究分别以高表达Cav-1的UACC647细胞和低表达Cav-1的M2细胞为研究对象,通过质粒稳定转染技术,改变两组细胞中Cav-1的表达水平,通过对比Cav-1水平改变前后恶性黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化,探讨Cav-1对恶性黑色素瘤细胞生物学行为的影响,并进而探讨其可能存在的分子机制。为恶性黑色素瘤的新靶点的探索以及治疗预后提供新的理论依据。方法:1细胞转染选取高表达Cav-1的UACC647细胞,分别转染Ctrl shRNA和Cav-1shRNA质粒,嘌呤霉素进行抗性筛选,从而构建稳定转染的UACC647Ctrl shRNA[UACC647（Ctrl）]和UACC647 Cav-1 shRNA[UACC647（KD）]细胞。另外选取低表达Cav-1的M2细胞,分别转染pcDNA3.1和pcDNA3.1/Cav-1质粒,G418进行抗性筛选,进而构建稳定转染的M2（pcDNA3.1）和M2（pcDNA3.1/Cav-1）[M2（Cav-1）]细胞。Western blot验证Cav-1表达情况。2 MTS实验检测细胞增殖能力将细胞接种于96孔板中,待细胞贴壁后加入不同浓度的EGF溶液刺激,培养一定时间后检测各孔的吸光度值（OD）。3细胞划痕修复实验检测细胞迁移能力将细胞接种于24孔板中,待形成单细胞层后用移液器枪头进行划痕,观察在有或无EGF刺激下细胞的迁移情况,在不同时间点拍照记录,直至划痕愈合。4 Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力将细胞接种于Transwell小室中,置于37℃、5%CO2培养箱中培养24h。观察并统计穿膜细胞数。5 Western blot检测蛋白表达水平分别用终浓度为20nM EGF的培养基培养UACC647（Ctrl）和UACC647（KD）细胞以及M2（pcDNA3.1）和M2（Cav-1）细胞,培养时间分别为0、5、10、30min。提取各组细胞总蛋白。将蛋白样品等体积上样,电泳、转膜、孵育抗体,分别检测UACC647（Ctrl）和UACC647（KD）细胞以及M2（pcDNA3.1）和M2（Cav-1）细胞中EGFR、pY-EGFR、Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、Cav-1和β-actin的蛋白表达水平,测量灰度值,分别计算各组细胞磷酸化EGFR、Akt和Erk占总EGFR、Akt和Erk的相对值。结果1稳定转染细胞株中Cav-1蛋白表达量蛋白印迹检测UACC647（Ctrl）和UACC647（KD）细胞中Cav-1的蛋白表达量,测得的相对灰度值分别为（0.84±0.03,0.24±0.01）。与相应的其他两组细胞相比,UACC647（KD）细胞Cav-1蛋白表达水平明显降低,差异有显著性（P<0.01）。M2（pc

关键词： 医学细胞生物学   网络资源   医学教育  

摘要： 以新疆医科大学的课程中心网络资源配置为例,目前的基础医学课程教学中已注入多媒体技术、数字化技术和网路技术等元素,使教学手段更加多元化,使课程内容更加直观化、形象化,显著提高了教学效率和质量,以网络为基础的各种知识学习逐渐成为世界教学发展的一种趋势。

关键词： 溃疡性结肠炎   骨髓间充质干细胞   参苓白术散   痛泻要方   CD29   CD45   CD105  

摘要： 目的:1.观察TNBS/乙醇诱导UC模型大鼠结肠黏膜炎性反应损伤时,骨髓来源BMSCs是否动员进入外周血液,进入外周血来源的BMSCs与骨髓来源的BMSCs,其生长增殖、迁移黏附的生物学特性有何不同,为探讨BMSCs归巢修复结肠黏膜奠定基础。2.探讨参苓白术散与痛泻要方促进TNBS/乙醇诱导UC模型骨髓中BMSCs动员及其对外周血来源的BMSCs与骨髓来源BMSCs的生长增殖、迁移黏附有何不同干预效应。同时,以“方证相应”理论为指导,通过二方的不同干预效应评价TNBS/乙醇诱导UC大鼠模型的中医证候特征。方法:1.180～220g健康SPF级SD雄性大鼠20只,常规饲养1周左右后,随机抽取6只作为空白组,剩余全部以三硝基苯磺酸(TNBS)/50%乙醇造成UC模型,5周后取结肠组织,采用HE染色进行模型成功的评价。2.依据参苓白术散与痛泻要方原方组成与剂量比例,采用传统的中药煎煮方法制备灌胃用药,从模型中随机选取2组给予参苓白术散与痛泻要方灌胃治疗,其他组给予等剂量生理盐水灌胃,28天后,麻醉大鼠,采集血液,分离股骨,收集空白组血清及参苓白术散组与痛泻要方组含药血清。提取外周血与骨髓中各组BMSCs进行原代培养,用倒置显微镜观察BMSCs形态,免疫荧光鉴定外周血与骨髓来源的BMSCs,流式细胞技术检测骨髓与外周血来源的BMSCs含量、生长、增殖。3.180-220g健康SPF级SD雄性大鼠20只,常规饲养1周后随机分2组,实验前禁食12-24h,各组大鼠给予参苓白术散与痛泻要方灌胃,第3次给药后2h在无菌的条件下腹主动脉采血、静置、离心、分离血清,混匀药物血清,水浴中灭活,冰箱保存(-20℃)备用。4.取各组外周血的BMSCs,用0.25%胰酶消化,按照1:2传代,取第三代BMSCs作为后续实验,RTCA检测各组来源的BMSCs的黏附能力、迁移及参苓白术散与痛泻要方含药血清的干预作用,用免疫组化法检测外周血来源的各组VCAM-1表达,QPCR检测外周血来源的各组VCAM-1表达,流式细胞技术检测外周血来源的各组VLA-4的表达。结果:1.骨髓及外周血来源的BMSCs动员检测。骨髓来源的各组阳性细胞百分数示:与空白组比较,模型组的阳性细胞百分数下降(P<0.05),差异具有统计学意义;与模型组比较,参苓白术散组、痛泻要方组的阳性细胞百分数升高,痛泻要方组优于参苓白术散组(P<0.05),差异具有统计学意义;外周血来源的各组阳性细胞百分数示:与空白组比较,模型组的阳性细胞百分数升高(P<0.05),差异具有统计学意义;与模型组比较,参苓白术散组、痛泻要方组阳性细胞百分数下降,痛泻要方组优于参苓白术散组(P<0.05),差异具有统计学意义。***的形态观察。细胞形态在刚刚接种时,主要表现为椭圆形、圆形不等的细胞。在培养液中,细胞密集地悬浮,细胞折光性比较强,培养3天后,部分细胞呈现类圆形或纺锤形,仍有大量未贴壁的细胞悬浮于培养液中。第一代细胞表现为:细胞贴壁生长,形态呈纺锤形、不规则形、三角形或多边形等多形态,细胞融合范围为80-90%,有较少的杂质悬浮于培养液中。***检测骨髓与外周血来源的BMSCs的周期。骨髓来源的各组BMSCs细胞周期示:与空白组比较,模型组的S期细胞比例增高(P<0.05),差异具有统计学意义;与模型组比较,参苓白术散组、痛泻要方组的S期细胞比例增高,痛泻要方组增高更显著(P<0.05),差异具有统计学意义;外周血来源的各组BMSCs细胞周期示:与空白组比较,模型组的S期细胞比例增高(P<0.05),差异具有统计学意义;与模型组比较,参苓白术散组、痛泻要方组的S期细胞比例增高,痛泻要方组增高更显著(P<0.05),差异具有统计学意义。***检测骨髓与外周血来源的BMSCs的增殖能力。骨髓来源的各组BMSCs,与空白组比较,模型组细胞活性增高(P<0.05),差异具有统计学意义;与模型组比较,参苓白术散与痛泻要方组的细胞活性要高于模型组(P<0.05),差异具有统计学意义;而参苓白术散与痛泻要方组的细胞活性表现相当(P>0.05)。外周血来源的各组BMSCs,与空白组比较,模型组的细胞活性降低(P<0.05),模型组的细胞活性在四组中最低;与模型组比较,参苓白术散组与痛泻要方组的细胞活性高于模型组,痛泻要方组的细胞活性最高(P<0.05),差异具有统计学意义。***检测外周血来源的BMSCs的黏附特性。与空白组比较,模型组细胞指数接近0(P>0.05);与模型组比较,随着时间的迁延,痛泻要方组发生黏附的细胞越来越多(P<0.05),差异具有统计学意义,而与参苓白术散组的关系比较弱(P>0.05)。***、免疫组化检测外周血来源的各组VCAM-1的表达。与空白组比较,模型组的VCA

关键词： 甲状腺乳头状癌   LAMB3基因   淋巴结转移   分子标记物   细胞生物学  

摘要： 背景和目的：　　甲状腺癌（thyroid cancer，TC）是全世界范围内发病率最高的内分泌恶性肿瘤。根据最新的美国肿瘤统计年报，全美2017年甲状腺癌新发病例46000余例，其中75%为女性患者，其新发病例在女性所有恶性肿瘤中排名第五，仅次于乳腺癌、肺癌、结直肠癌和子宫体癌。根据2015年的中国肿瘤统计年报，在小于30岁女性人群中，甲状腺癌是最常见的恶性肿瘤;在30-59岁女性人群中，甲状腺癌发病率仅次于乳腺癌。　　因此，为了能够解决当前在甲状腺癌诊疗过程中碰到的各种难题，迫切要求我们从分子水平全面系统、探索甲状腺癌的具体发生及进展机制和复杂的基因调控作用。一方面，为临床实践中的具体诊疗方案提供充实的理论依据，另一方面，为发现甲状腺癌预后相关的分子标记物及提供个体化治疗奠定基础。　　方法：　　我们用RNA-seq技术对20对甲状腺癌组织及其对应的正常甲状腺组织进行转录组测序。通过原始数据过滤和质量控制之后，对符合条件的数据进行分析。利用生物信息学技术，筛选出在甲状腺癌组织和正常甲状腺组织中所有显著差异表达的基因，对甲状癌的转录组信息进行全面系统探索。对筛选出的差异基因，我们利用基因本底论分析和信号通路分析，研究分析所有差异基因在肿瘤发生中涉及的生物学进程、分子机制、细胞组分和信号通路多方面中的作用。我们进一步确定最显著差异的基因之一，LAMB3作为最终的研究对象。我们通过收集56对甲状腺癌及相应的正常甲状腺组织和33对甲状腺腺瘤及相应正常甲状腺组织，利用逆转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）实验，检验 LAMB3 基因在以上组织标本中mRNA水平表达情况，通过分析The Cancer GenomeAtlas（TCGA）公共数据库，验证LAMB3在甲状腺癌中的表达。利用ROC曲线分析方法，检验LAMB3作为分子标记物鉴别肿瘤与正常组织的效率。结合验证组和TCGA数据库的临床病理特征资料，我们对LAMB3表达水平与相应的临床病理特征进行统计学分析。我们运用基因下调技术（siRNA干扰技术）验证LAMB3在细胞株（TPC1，BCPAP和KTC-1）中的生物学功能。我们通过细胞增殖实验和细胞克隆形成实验检验LAMB3在细胞株中对细胞增殖能力的影响。通过细胞迁移实验和细胞侵袭实验，来检测LAMB3在细胞株中对细胞迁移和侵袭能力的影响。　　结果：　　对测序的数据进行过滤和质量控制之后，我们得到了符合条件的clean data，我们利用算法绘制 20 例测序样本的 HeatMap，结果表明，甲状腺乳头状癌和其对应的正常组织的基因表达情况有很明显的不同。我们用EB-Seq算法，筛选差异基因，一共得到17702个差异基因。于是我们选择在20对样本中均有显著差异表达的801个基因，作进一步分析和筛选。结合基因本底论分析、信号通路分析和文献调研，确定LAMB3基因作为最终研究基因。我们选取TCGA数据库中有正常组织的59例标本数据。同样发现LAMB3在PTC组织标本的表达也高于对应的正常组织（P＜0.001）。在组织标本（56对PTC，33对甲状腺腺瘤）中LAMB3基因的表达进行检测。实验发现，在PTC组织标本中的LAMB3表达显著高于其对应的正常组织（P＜0.001）。而在甲状腺腺瘤组织中的LAMB3的表达相对于正常组织却没有差异（P＞0.1）。我们选取了TCGA数据（507例PTC及59例正常甲状腺组织），计算并绘制ROC曲线，发现LAMB3作为鉴别甲状腺癌组织和正常组织的敏感度是83.1%，特异性为91.5%，曲线下面积为90.1%。同样地，我们用验证组数据进行计算，发现敏感度为94.6%，特异性为98.2%，而曲线下面积达97.3%。通过临床病理资料分析，我们发现在 TCGA 数据库中，LAMB3 高表达与淋巴结转移(P＜0.001)和病理组织学类型(P＜0.001)具有密切联系。在我们验证组分析证明，LAMB3高表达与淋巴结转移(P=0.018)和肿瘤大小(P＜0.001)具有相关性。为了进一步比较LAMB3表达在所有影响因素中的作用大小，我们采用多因素Logistic回归分析，结果显示LAMB3表达水平（OR 2.28,95%CI1.465-3.549，P＜0.001），年龄（OR 0.671，95%CI 0.433-1.04，P=0.074），性别（OR 0.476,95CI% 0.284-0.796，P=0.005），肿瘤大小（OR 2.043, 95%CI 0.911-4.584，P=0.083）和组织学类型（OR 0.444，95%CI 0.274-0.721，P=0.001）与甲状腺乳头状癌的淋巴结转移具有密切联系。我们将特异性的siRNA通过细胞转染转移入甲状腺癌细胞株（TPC1，BCPAP和KTC-1）中，LAMB

关键词： ADAMDEC1   胶质瘤U87细胞   细胞侵袭   细胞凋亡  

摘要： 目的:研究ADAMDEC1(解聚素金属蛋白酶家族癸蛋白1)对人脑胶质瘤U87细胞的增殖、黏附、侵袭、迁移和凋亡等细胞生物学行为的影响。方法:1.从上海吉凯基因公司提供的三种可能有效的慢病毒(分别携带TACCACGAAACCTGAGAACAT、CTGATAAGA AGCTTTGTGTTT、TCCCAGGAATCTTGTGAATTT三个基因片段)中筛选能够下调U87细胞ADAMDEC1表达的慢病毒:(1)分别用三种慢病毒感染U87细胞,筛选最适复感染指数值(MOI),通过观察GFP荧光的表达情况来判定转染效率;(2)采用Real-time PC R法分别检测三种慢病毒感染后U87细胞ADAMDEC1 mRNA的表达情况,并对三种慢病毒感染后U87细胞ADAMDEC1mRNA的表达差异进行分析比较,筛选出能够下调U87细胞ADAMDEC1表达的慢病毒;2.实验组(ADAMDEC1-RNAi)人脑胶质瘤U87细胞通过用筛选出的能够下调U87细胞ADAMDEC1表达的慢病毒在最适复感染指数的条件下进行感染来下调ADAMDEC1的表达,对照组(CONTROL-RNAi)用阴性对照慢病毒(携带TTCTCCGAACGTG TCACGT基因片段)在最适复感染指数的条件下进行感染,采用We stern blot法检测稳定转染的U87细胞ADAMDEC1蛋白的定性、定量表达情况,并对转染后U87细胞ADAMDEC1蛋白的表达差异进行分析比较;3.采用CCK-8法检测两组细胞增殖及黏附能力的差异,并对差异进行分析比较;4.采用Transwell法检测两组细胞侵袭及迁移能力的差异,并对差异进行分析比较;5.采用流式细胞技术检测两组细胞凋亡情况的差异,并对差异进行分析比较。实验数据采用SPSS 19.0统计软件进行分析,计量数据以x±s表示,两组间差异采用t检验分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.通过观察GFP荧光的表达情况可得知:上海吉凯基因公司提供的携带特异性基因片段的慢病毒能够感染人脑胶质瘤U87细胞,且最适复感染指数为20;***-time PCR结果显示:携带TCCCAGGAATCTTG TGAATTT基因片段的慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后,与对照组相比,稳定转染后的U87细胞的ADAMDEC1-RNAi mRNA表达水平均明显降低(P<0.01),即TCCCAGGAATCTTGTGAATTT基因片段为下调ADAMDEC1基因表达的有效片段;***-8检测结果显示:携带有效基因片段的慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后,与对照组相比,下调ADAMDEC1表达后的U87细胞的增殖能力下降(P<0.05),黏附能力明显受到抑制(P<0.01);***检测结果显示:携带有效基因片段的慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后,与对照组相比,下调ADAMDEC1表达后的U87细胞的侵袭和迁移能力均明显下降(P<0.01);5.流式细胞术检测结果显示:携带有效基因片段的慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后,与对照组相比,下调A DAMDEC1表达能够促进U87细胞的凋亡(P<0.01)。结论:在体外细胞培养试验中,下调ADAMDEC1表达能够显著抑制U87细胞的增殖、黏附、侵袭、迁移能力,促进U87细胞的凋亡。