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关键词： 细胞生物学实验   多元化考核评价体系   创新能力  

摘要： "细胞生物学"是一门理论与实践并重的专业基础课程,也是当前发展迅速的学科之一。为配合细胞生物学理论课程的不断深化,促进学生实践动手能力与创新能力的培养,对细胞生物学实验教学进行改革探索是非常必要的。实验教学是人才培养的重要环节,也是高校培养学生创新能力的重要手段。结合山东农业大学的具体情况,从大学生早期科研素质培养、实验技能规范操作、教学模式改善及多元化考核评价体系等方面对细胞生物学实验教学进行深入的探索与实践,以激发学生对生物学实验的兴趣,提高实验教学质量,培养出更多的新世纪创新型人才。

关键词： 聚乙二醇化   重组人粒细胞集落刺激因子   体外药效   生物学活性  

摘要： 通过细胞集落实验和体外活性实验,对聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)的体外生物学活性进行对照验证,为临床应用提供理论依据.通过小鼠骨髓瘤细胞集落实验研究PEG修饰前后rhG-CSF因子对细胞集落形成的影响;按照药典(2015版)标准,采用新型染剂CCK-8、MTS和原染剂MTT,对PEG-rhG-CSF和rhG-CSF进行体外生物学活性的测定.结果显示,PEG-rhG-CSF对小鼠骨髓瘤细胞集落形成的作用明显强于rhG-CSF(P<0.05),集落数目多(38.5±4.2个),集落大且密集;新型染剂CCK-8在体外生物学活性的测定效果最好,R^2超过0.995,曲线拟合更好,在最适体外生物活性范围内(0.1~400 IU·mL^(-1)),PEG-rhG-CSF吸光度值(0.75±0.027)明显高于rhG-CSF(0.36±0.036).聚乙二醇修饰在体外药效方面显示了更强的长效特征,对体外生物学活性有增强效应,重复性良好,回收率较高.

关键词： 生命科学   中国科协   科学学会   联合体   科学研究所   四川农业大学   细胞生物学   中国科学院  

摘要： 为推动生命科学领域的创新发展,充分展示和宣传中国生命科学领域的重大科技成果,中国科协生命科学学会联合体组织22家成员学会推荐,经生命科学领域同行专家审核与评选,向社会公布了2017年度“中国生命科学十大进展”评选结果：水稻新型广谱抗病遗传基础发现与机制解析（四川农业大学陈学伟研究组）、人Piwi基因突变致男性不育（中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所刘默芳研究组和上海市计划生育科学研究所施惠娟研究组合作）。

关键词： Eps8基因   慢性髓系白血病   K562细胞   慢病毒介导RNA干扰技术   AKT/m   TOR  

摘要： 目的:探索靶向沉默Eps8(表皮生长因子受体通路底物8)基因对人慢性髓系白血病K562细胞生物学活性的影响及其可能的分子机制。方法:采用慢病毒介导RNA干扰技术靶向沉默K562细胞中Eps8基因。实验分组为:空白对照(blank control)组、Eps8-shRNA靶向沉默(K562-shRNA)组和阴性对照(K562-NC)组。在荧光显微镜下观察转染效率;应用RT-PCR法和Western blot法分别从mRNA转录水平和蛋白水平验证Eps8基因沉默效率;台盼蓝拒染法和MTT法检测细胞体外增殖能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡率变化;甲基纤维素克隆形成实验验证细胞集落形成能力;Western blot法检测沉默Eps8基因后AKT/mTOR及其下游信号通路磷酸化蛋白的表达情况。结果:成功建立稳定低表达Eps8的K562细胞株(K562-shRNA)和阴性对照细胞株(K562-NC)。与空白对照组和K562-NC组相比,沉默Eps8基因后K562-shRNA组细胞Eps8转录和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);体外培养48 h后,K562-shRNA组细胞增殖能力明显下降(P<0.05);K562-shRNA组细胞凋亡率为(5.81±0.39)%,空白对照组和K562-NC组细胞凋亡率分别为(1.02±0.70)%和(1.19±0.15)%,提示K562-shRNA组细胞凋亡率与空白对照组和K562-NC组之间有显著性差异(P<0.05),而空白对照组和K562-NC组之间没有显著性差异(P>0.05);体外甲基纤维素半固体培养10 d后,K562-shRNA组细胞集落形成能力与空白对照组和K562-NC组相比有显著性差异(P<0.05)。沉默Eps8基因可下调K562细胞p-AKT(308)和p-AKT(473)的表达(P<0.05),而t-AKT表达水平没有明显变化。另外,沉默Eps8基因可下调AKT下游的pmTOR和p-PRAS40蛋白的表达(P<0.05),而总mTOR和总PRAS40的表达水平没有明显变化。结论:利用慢病毒介导的RNA干扰技术靶向沉默Eps8基因能够抑制K562细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与AKT/mTOR及其下游信号通路下调有关。

关键词： 结直肠癌   肿瘤浸润T淋巴细胞   中心记忆T淋巴细胞   AKT抑制剂  

摘要： 目的探讨AKT抑制剂对结直肠癌肝转移肿瘤浸润T淋巴细胞生物学活性的影响。方法收集郑州大学附属肿瘤医院普外科2016年1-12月间收治的可手术的结直肠癌肝转移患者的肿瘤组织,密度梯度离心法分离获得组织中的淋巴细胞和肿瘤细胞,采用流式细胞学方法检测AKT抑制剂对肿瘤浸润T淋巴细胞增殖,分化,细胞表型及功能的影响。结果 AKT抑制剂组能增加中心记忆T淋巴细胞的比例而不影响肝转移癌浸润T淋巴细胞的增殖,自体肿瘤细胞刺激诱导出的分泌IFN-γ的T细胞比例明显高于IL-2组。结论在TIL培养体系中加入AKT抑制剂可以增强中心记忆T淋巴细胞的增殖及功能,而不影响CD8+T细胞的数量,这对于肿瘤过继免疫治疗方案的改进具有重要的参考意义。

关键词： 顺铂   喉癌   耐药   干细胞  

摘要： 目的建立人喉癌顺铂(CDDP)耐药细胞株并鉴定其干细胞生物学特性,探讨其对CDDP耐药机制及与干细胞的关系。方法以药物浓度梯度递增法诱导建立人喉癌Hep-2的顺铂耐药细胞株Hep-2/CDDP;倒置显微镜观察细胞的形态;CCK-8法检测细胞IC50及耐药指数;无血清细胞球体培养观察成球能力;实时定量RTqPCR法检测MDRl/P-gp、ABCG2、CD44、CD133 mRNA的表达情况;Western blot法检测MDRl/P-gp、ABCG2、CD44、CD133蛋白表达情况。结果顺铂体外缓慢诱导历时12个月建成的Hep-2/CDDP耐药细胞株,与亲本Hep-2细胞相比,细胞形态改变明显;耐药性能稳定耐药指数为5.43;无血清球体培养实验示细胞成球率升高(P<0.05);RT-qPCR和Western blot结果表明耐药相关基因MDRl/P-gp、ABCG2表达上调(均P<0.05);干性相关标记基因CD44、CD133升高(均P<0.05)。结论 Hep-2/CDDP细胞株具有稳定的顺铂耐药性,是研究喉癌顺铂耐药和逆转机制的良好模型,且其耐药机制与顺铂诱导的肿瘤干细胞有关,可为研究逆转耐药提供参考。

关键词： siRNA   SOX9   膀胱癌   PTEN  

摘要： 目的探讨SOX9基因沉默对膀胱癌EJ细胞株增殖、凋亡及迁移的影响及其潜在的作用机制。方法采用SOX9 si RNA转染EJ细胞,抑制SOX9基因的表达,并以非特异性si RNA转染EJ细胞为对照。采用Edu细胞荧光染色法检测SOX9基因沉默对EJ细胞增殖的影响,Hoechst 33342细胞染色法检测SOX9基因沉默对EJ细胞凋亡的影响,划痕愈合实验检测SOX9基因沉默对EJ细胞迁移的影响,蛋白质免疫印迹(Western Blot)实验检测PTEN/AKT信号通路相关蛋白的表达水平。结果对照组的SOX9 m RNA表达水平为(100.0±0.5)%,明显高于SOX9沉默组的(14.2±1.3)%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。转染72 h后,对照组细胞在450 nm激发光下的OD值为(4.0±0.3),明显高于SOX9沉默组的(2.3±0.2),差异有统计学意义(P﹤0.01)。Edu细胞荧光染色结果显示,转染48 h后,对照组的细胞相对增殖率为(100.0±2.3)%,明显高于SOX9沉默组的(42.2±3.2)%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。Hoechst 33342免疫荧光染色结果表明,对照组的细胞凋亡率为(7.2±1.2)%,明显低于SOX9沉默组的(33.2±2.4)%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。划痕愈合实验表明,对照组的相对划痕愈合比例为(100.0±1.9)%,明显高于SOX9沉默组的(56.6±4.3)%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。SOX9 si RNA转染EJ细胞1 h后,采用Western Blot检测PTEN、AKT及p-AKT蛋白的表达水平。结果显示,SOX9沉默组的PTEN蛋白表达水平高于对照组,p-AKT蛋白表达水平低于对照组。结论沉默SOX9基因能够明显抑制膀胱癌EJ细胞株的增殖和迁移,并促进细胞凋亡,PTEN/AKT信号通路的激活可能与之有关。

关键词： 牙龈间充质干细胞   细胞培养   生物学特性  

摘要： 目的:探讨一种简单有效的,原代培养牙龈来源的间充质干细胞的实验方法。方法:收集人的无炎症的健康牙龈组织,采用组织块法原代分离培养牙龈细胞,再以Stro-1抗体为分选标记物,使用免疫磁珠分选法,分选出间充质干细胞,即牙龈来源的间充质干细胞(G-MSCs),并进行相关干细胞特性的检测。结果:相差显微镜下可见从组织块爬出来的牙龈细胞呈成纤维样细胞,分离、纯化的牙龈来源的MSCs也呈成纤维样细胞,细胞形态上差别不大。用Stro-1免疫磁珠分选后的细胞具有克隆形成能力,在成骨和成脂肪的诱导培养基的培养下,能形成大量的钙化结节和分化成脂肪细胞,并分泌脂滴。结论:本研究收集牙龈组织,采用组织块法原代分离,培养牙龈细胞是简单、可行、有效的方法。采用Stro-1免疫磁珠细胞分选法能快速、有效地从牙龈细胞中分离出Stro-1阳性细胞,这一细胞亚群具有干细胞特性。

关键词： 多学科知识融合   医学细胞生物学   教学改革  

摘要： 医学细胞生物学是在医学各领域广泛应用的一门基础学科。西藏大学医学院通过整合教学资源,提炼交叉学科教学知识点;寓教于乐,开展主题教学活动;构建丰富的多媒体素材库,建立导师-小组制团队学习模式以及科学的考核评价体系等,探索多学科知识融合下的医学细胞生物学教学改革,促进学生知识、思维和情感的全面发展。

关键词： 聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒   正交试验   肝细胞生长因子   缓释  

摘要： 目的探究制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒的优化条件,构建肝细胞生长因子(HGF)纳米粒,评价其包封率、载药量、回收率、释放度和生物学活性。方法采用复乳溶剂挥发法制备牛血清白蛋白(BSA)PLGA纳米粒,通过正交试验设计,以粒径较小,包封率、载药量和回收率较高为考察指标,优化纳米粒的制备条件;选取优化条件制备HGF纳米粒,分别采用BCA试剂盒和HGF-ELISA试剂盒检测BSA纳米粒和HGF纳米粒的包封率、载药量和释放度,通过CCK8增殖实验评价HGF纳米粒的生物活性。结果优化条件下制备的HGF纳米粒大小均匀,粒径234.4±4.8 nm,包封率(77.75±3.04)%,回收率(49.33±9.34)%,体外释放度曲线表现为先突释,后缓释;HGF纳米粒可以促进角质形成细胞的增殖。结论复乳溶剂挥发法-优化条件下制备的HGF纳米粒具有较高包封率,良好的缓释效果和生物学活性。