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关键词： 细胞生物学   实验教学   教学改革   人才培养  

摘要： 大学本科生物相关专业课程中,细胞生物学属于重要的专业基础课。该课程的相关实验教学内容对培养高素质综合型人才具有举足轻重的作用。针对综合大学生命科学细胞生物学传统实验教学的不足,通过改进实验教学内容,引入创新性实验,改变教学模式,加强教学梯队建设,提高实验教学条件等方面进行了实验教学改革探讨,以期培养学生的创新意识及基本的科学素养,在实践中摸索出提高大学本科细胞生物学实验教学的方法措施。

关键词： 肝肿瘤   HepG2细胞   血管内皮细胞生长因子165b   血管内皮细胞生长因子165   细胞增殖   细胞迁移  

摘要： 目的:探讨血管内皮生长因子165b(VEGF165b)对人肝癌HepG_2细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法:HepG_2细胞分为空白组(仅加转染试剂)、对照组(转染阴性对照PcDNA3.0表达载体)和PcDNA-VEGF165b组(转染VEGF165b表达载体PcDNA-VEGF165b)。MTT法检测各组HepG_2细胞生存率,RT-PCR法和Western blotting法检测HepG_2细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测HepG_2细胞迁移能力。结果:与空白组比较,对照组HepG_2细胞中VEGF165b和VEGF165mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。与空白组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165bmRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),VEGF165 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。空白组和对照组细胞生存率比较差异无统计学意义(P>0.05);与空白组和对照组比较,PcDNAVEGF165b组细胞生存率有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。细胞迁移实验,空白组和对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义(P<0.05);与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组HepG_2细胞迁移率明显降低(P<0.05)。结论:VEGF 165b能抑制VEGF165基因和蛋白的表达,VEGF165b对肝癌细胞增殖无明显影响,但可降低肝癌细胞的迁移能力。

关键词： 食管鳞状细胞癌   DNA甲基化   5-氮杂-2’-脱氧胞苷   细胞凋亡   细胞周期  

摘要： 目的探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-dC）对食管鳞状细胞癌细胞株KYSE140和KYSE150生物学行为的影响。方法KYSE140、KYSE150细胞分别设空白组、对照组和实验组，空白组细胞不做处理，对照组细胞中加入2 μmol/L二甲基亚砜（DMSO），实验组应用浓度为1、2、3、4 μmol/L 5-Aza-dC分别作用24、48、72、96 h。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测药物对细胞增殖能力的影响，选择药物作用的最佳浓度和时间；Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变；流式细胞术检测药物对细胞凋亡和细胞周期的影响；蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3和周期调控相关蛋白CCNB-1、CCNE-1的表达。结果MTT法检测结果显示5-Aza-dC对KYSE140和KYSE150细胞最佳作用时间为96 h，最佳浓度为4 μmol/L。在此条件下，肿瘤细胞迁移、侵袭能力下降，空白组、对照组、实验组KYSE140和KYSE150细胞的迁移细胞数分别为（193.3±8.6）、（184.0±10.4）、（61.7±7.1）个和（112.0±6.4）、（101.3±7.9）、（26.3±5.7）个，侵袭细胞数分别为（47.3±7.3）、（38.7±5.1）、（8.0±3.9）个和（83.3±6.8）、（74.7±5.7）、（21.0±2.7）个，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。5-Aza-dC促进KYSE140和KYSE150细胞凋亡，空白组、对照组、实验组细胞凋亡率分别为（2.8±0.3）%、（11.2±0.7）%、（18.6±0.6）%和（2.7±0.4）%、（9.8±0.4）%、（17.7±0.5）%，实验组较空白组、对照组G2/M期细胞比例增加，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。实验组中凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3剪切作用增强，周期相关蛋白CCNB-1表达升高，CCNE-1表达降低。结论5-Aza-dC可以抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖，促进其凋亡。

关键词： 人脂肪干细胞   细胞膜片   组织再生  

摘要： 目的利用分离纯化后的人脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)构建ADSCs膜片,并探讨人ADSCs膜片的生物学特性。方法收集年轻女性腹部手术皮下脂肪组织,用酶消化法成功分离纯化人ADSCs,进行流式细胞学鉴定,使用含有活性因子的完全培养基诱导构建人ADSCs膜片后,扫描电镜观察细胞膜片组织形态,并采用q RT-PCR和ELISA检测人脂肪干细胞膜片相关促生长细胞因子及干性基因的表达水平。结果成功分离人ADSCs,流式细胞学鉴定发现其间充质干细胞表面标记分子CD29、CD44、CD90、CD105均为阳性,造血干细胞表面标记CD45分子为阴性,符合ADSCs表面分子表达特点;人ADSCs进行成脂和成骨诱导后,油红O与茜素红染色阳性,提示人ADSCs具有多向分化潜能;扫描电镜观察膜片中的细胞呈网格样叠加生长,细胞之间连接紧密;qRT-PCR检测结果显示人ADSCs膜片中TGF-β1、FGF2、HGF、VEGF、Col 1A1等促生长细胞因子和OCT4、NANOG等干性基因显著高表达。ELISA检测结果显示人ADSCs膜片上清液高表达促生长细胞因子TGF-β1、FGF、HGF、VEGF。结论我们成功利用人ADSCs诱导成人细胞膜片,该膜片可分泌更高含量的促生长细胞因子并表达更高水平的干性基因,为人ADSCs膜片应用于组织损伤修复提供了重要理论依据。

关键词： 脂肪酸结合蛋白质类   RNA干扰   肝肿瘤   细胞周期   细胞凋亡   Bel-7402细胞   人参川穹嗪  

摘要： 目的探讨通过siRNA干扰技术沉默表皮脂肪酸结合蛋白-5(FABP-5)基因表达对人肝癌Bel-7402细胞生物学特性及人参川穹嗪敏感性的影响。方法以人肝癌Bel-7402细胞为研究对象,根据FABP-5mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,瞬时转染Bel-7402细胞。将人肝癌Bel-7402细胞分为FABP-5siRNA组、阴性对照组、空白对照组。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测FABP-5基因的表达;CCK8法测定细胞体外增殖能力;流式细胞技术检测各组细胞周期和凋亡的变化情况;细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力;MTT法观察FABP-5基因沉默后Bel-7402细胞对人参川穹嗪的敏感性。结果 RT-PCR和Western blot显示,FABP-5 siRNA组较阴性对照组和空白对照组的FABP-5 mRNA和蛋白表达都明显下降;FABP-5 siRNA组细胞的生长速度明显减慢,细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少;与阴性对照组和空白对照组相比,FABP-5 siRNA组细胞的凋亡率明显升高(P<0.01),增殖、侵袭能力显著下降(P<0.05);FABP-5 siRNA组细胞对人参川穹嗪的敏感性显著增强(P<0.05)。结论特异性沉默FABP-5基因表达能够降低肝癌细胞的侵袭能力,抑制细胞的增殖,将细胞周期阻滞于G_0/G_1期,使其凋亡显著增加。

关键词： 磷酸戊糖途径   T细胞   记忆性   机制   中国医学科学院   代谢   糖原   细胞生物学  

摘要： 中国医学科学院基础医学研究所黄波教授团队揭示了T细胞记忆形成与维持的关键机制,相关研究结果发表于《自然-细胞生物学》.活化的CD8＋T细胞高效杀灭病毒感染的细胞以及肿瘤细胞,其发挥效应后,极少数T细胞存活下来,转变成为记忆性的T细胞,

关键词： 细胞生物学   教学内容   教学模式   考核方式  

摘要： 21世纪是生命科学的世纪,在近几十年取得了迅猛的发展,为了培养新世纪创新型人才,需要加强细胞生物学等基础课程的教学。当前高校细胞生物学的教学普遍遵循前人的教学模式和教学内容,已经很难适应学科知识的交叉和新内容的更新,因此有必要对细胞生物学的教学进行改革和补充。本文从教学内容、教学模式和考核方式等几方面入手,提出了高校细胞生物学教学改革策略。

关键词： 人直肠癌细胞   STIM1基因   细胞增殖   凋亡   迁移  

摘要： 目的研究STIM1基因干扰对人直肠癌SW837细胞增殖、凋亡及体外迁移的影响,以期为直肠癌临床防治及药物研发提供新的靶点。方法采用STIM1干扰慢病毒转染人直肠癌SW837细胞,实时定量PCR(q RT-PCR)和Western blot验证STIM1的干扰效果,分别采用MTT法和划痕试验检测细胞增殖及迁移情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 STIM1干扰慢病毒转染后,干扰组SW837细胞STIM1基因m RNA和蛋白表达均明显减少(P<0.05)。与对照组比较,干扰组细胞增殖、体外迁移能力均显著减弱(P<0.05);干扰组SW837细胞凋亡率较对照组显著升高(P<0.05),STIM1干扰促进SW837细胞凋亡与上调caspase-3、Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达水平有关。结论STIM1基因干扰可抑制人直肠癌SW837细胞的增殖活性和体外迁移能力,并促进其凋亡。

关键词： 医学细胞生物学   教学资源库   医学院校  

摘要： 为了给师生提供优秀的教学和学习参考资料。文章从构建教学资源库的必要性出发,从素材的类型、甄选原则、甄选途径及质量保障、素材的规划处理、整合方式及发布途径等方面阐明如何构建医学细胞生物学课程的优秀教学资源库。

关键词： TROP2基因   胰腺癌   NOTCH1信号通路  

摘要： 目的探讨抑制胰腺癌组织中肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法选取胰腺癌组织和相应的癌旁组织各46例。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并分析胰腺癌组织和癌旁组织中TROP2基因的m RNA表达情况;将人胰腺癌PANC-1细胞分为对照组、NC-si RNA组和TROP2-si RNA组,培养48 h后,采用蛋白质印迹法检测并分析TROP2、cleaved caspase 3、NOTCH1和HES1蛋白表达情况;采用CCK8法和流式细胞仪分别检测并分析细胞的增殖和凋亡情况。结果在胰腺癌组织中TROP2基因的m RNA表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P﹤0.01)。对照组、NC-si RNA组和TROP2-si RNA组中,TROP2蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率及cleaved caspase 3、NOTCH1、HES1蛋白表达比较,差异均有明显统计学意义(P﹤0.01);TROP2-si RNA组TROP2蛋白表达、细胞存活率及NOTCH1、HES1蛋白表达均明显低于对照组,细胞凋亡率和cleaved caspase 3蛋白表达均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01),而NC-si RNA组TROP2蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率及cleaved caspase 3、NOTCH1、HES1蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论抑制胰腺癌组织中TROP2基因表达,可以明显降低肿瘤细胞的增殖能力,促进细胞凋亡,其机制与阻断NOTCH1信号通路有关。