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关键词： microRNA-653   OIP5   mTOR信号通路   非小细胞肺癌  

摘要： 目的:探讨microRNA-653(miR-653)靶向调控OIP5基因介导mTOR信号通路对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞生物学特性的影响。方法:选取人正常内皮细胞BEAS-2B和4种NSCLC细胞系(H1650、H1975、A549和H292),分为control组、mimics组、mimics-NC组、inhibitor组和inhibitor-NC组进行瞬时转染,利用荧光定量PCR、蛋白印迹、MTT、划痕实验、Transwell侵袭实验、流式细胞术等方法分析miR-653对NSCLC细胞中OIP5、mTOR信号通路相关基因表达及增殖、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期分布的影响。结果:与control组、mimics-NC组和inhibitor-NC组相比,mimics组mTOR信号通路被抑制,细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低,凋亡率明显增加,细胞多停滞于G1期(均P<0.05);然而,inhibitor组mTOR信号通路被激活,细胞增殖、迁移、侵袭能力明显升高,而凋亡率明显降低,G1期细胞数量较少(均P<0.05)。结论:miR-653可通过负调控OIP5基因抑制mTOR通路激活,从而阻止NSCLC的发生与发展。

关键词： SCID小鼠   淫羊藿提取物   急性髓系白血病   细胞周期   白细胞  

摘要： 目的观察淫羊藿提取物对急性髓系白血病SCID模型小鼠细胞生物学特性的影响。方法 SCID小鼠共60只,随机选取其中的50只,采用腹腔注射对数生长期HL-60细胞株于经环磷酰胺预处理的SCID小鼠以建立急性髓系白血病SCID小鼠模型,4周后随机均分为模型组、阿糖胞苷组、观察1组、2组和3组,另10只正常小鼠设为空白对照组。观察1组、2组和3组分别用淫羊藿提取物10、5、2.5 m L/kg灌胃治疗5周,模型组和空白对照组灌胃等体积0.9%氯化钠注射液5周,阿糖胞苷组尾静脉注射阿糖胞苷。在治疗第5周时尾静脉采血,采用人工法计数外周血血象及分类;采用Western blotting法检测同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)和多聚腺苷二磷酸核糖多聚酶(PARP)蛋白表达;流式细胞学检测HL-60细胞膜CD13和CD71表达率及细胞各周期细胞百分率。结果观察2组、3组外周血白细胞、淋巴细胞和HL-60细胞总数明显降低,中性粒细胞升高,PARP蛋白表达量、CD13和CD71阳性表达率明显下降,PTEN蛋白表达量增加,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组HL-60细胞均被阻滞于G_1期,且G_1和S期细胞百分率呈浓度效应关系。结论淫羊藿提取物有与阳性药阿糖胞苷相似的药理作用,在体内对急性髓系白血病HL-60细胞株有一定的抑制作用,其机制可能通过下调CD13和CD71,裂解PARP以诱导急性髓系白血病细胞凋亡,增强PTEN蛋白表达并促使细胞阻滞于G_1期,从而发挥抑制白血病细胞的增殖作用。

关键词： 胃癌MGC-803   真核表达载体   翻译起始因子   细胞生物学行为   微小RNA   调控作用   细胞增殖   miR  

摘要： 本研究通过构建微小RNA（miRNA，miR）-171的真核表达载体，探讨其在调控胃癌MGC-803细胞增殖中的作用，并分析miR—171对真核翻译起始因子5A2（EIFSA2）的调控作用。

关键词： 脂肪组织   干细胞   成骨诱导   成骨细胞  

摘要： 目的研究冻存复苏后大鼠脂肪干细胞(ADSCs)的生物学特性及其体外诱导成骨细胞分化的潜能。方法冷冻保存6个月的大鼠ADSCs复苏后传代培养,显微镜下观察细胞形态;CCK8检测细胞增殖,流式细胞仪检测CD44,CD105。第3代细胞诱导成骨培养2~3周后碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色,观察成骨情况。结果复苏后ADSCs形态类似成纤维细胞,增殖迅速。成骨诱导培养后表现出成骨细胞特性,ALP染色活性增加,茜素红染色出现矿化结节。结论冷冻保存复苏后的ADSCs细胞生物性能稳定,定向诱导后可分化为成骨细胞,可作为骨组织工程的种子细胞。

关键词： 肝癌   肿瘤浸润淋巴细胞   蛋白激酶B抑制剂   中央记忆型T细胞  

摘要： 目的探讨蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)抑制剂对肝癌组织中肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)生物学活性的影响。方法肝癌患者4例,取其手术切除肿瘤组织标本密度梯度离心法分离TIL,并分为白细胞介素(interleukin,IL)-2组(6 000u/mL IL-2)和Akt抑制剂组(1mmol/L Akt抑制剂+6 000u/mL IL-2),培养第10天,2组均加入抗CD3抗体,继续原培养液培养20d。依据细胞增殖倍数绘制生长曲线检测TIL增殖活性;流式细胞法检测2组T淋巴细胞亚型及TIL分泌干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的能力;ELISA法检测TIL培养上清液中IFN-γ、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及IL-10水平。结果 Akt抑制剂组与IL-2组TIL数目在抗CD3抗体刺激前(培养第5、10天)、刺激后(培养第15、20、25、30天)比较差异均无统计学意义(P>0.05);培养第5、10、15、20、25、30天,Akt抑制剂组中央记忆型T细胞占CD8^+T淋巴细胞比率[(9.57±9.14)%、(13.98±3.92)%、(15.74±2.74)%、(16.05±2.36)%、(19.14±3.55)%、(14.33±3.66)%]均明显高于IL-2组[(9.14±3.06)%、(10.07±3.57)%、(11.10±3.32)%、(11.72±2.87)%、(12.80±4.20)%、(9.61±4.23)%](P<0.05);培养第25天,中央记忆型T细胞占CD8^+T细胞比率在Akt抑制剂组、IL-2组均最高;随培养时间延长,2组TIL上清中IL-10、IFN-γ、TNF-α分泌量均逐渐升高,且Akt抑制剂组IFN-γ分泌量自第5天开始明显高于IL-2组(P<0.05),TNF-α分泌量在第25天明显高于IL-2组(P<0.05),2组不同时间IL-10分泌量比较差异均无统计学意义(P>0.05);流式细胞法检测结果显示,培养第25天,Akt抑制剂组分泌IFN-γ的TIL比率[(11.35±0.47)%]明显高于IL-2组[(6.25±0.66)%](P<0.05)。结论 Akt抑制剂可提高肝癌组织TIL中中央记忆型T细胞比率,促进TIL分泌IFN-γ,且不影响TIL增殖活性。

关键词： GDF-15   H2O2   心肌细胞   增殖   凋亡   PI3K/AKT信号通路  

摘要： 目的:探讨上调生长分化因子-15(GDF-15)的表达对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:CCK8法检测不同浓度的H_2O_2处理H9C2心肌细胞后的细胞增殖情况;H9C2心肌细胞分为Control组、NC组、H_2O_2组、GDF-15+H_2O_2组,各组细胞处理24 h后收集细胞,RT-PCR及Western blot分别检测各组细胞中GDF-15的mRNA及蛋白表达;CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况;2',7'-二氯二氢荧光素黄二乙酸酯(DCFH-DA)探针检测细胞活性氧簇(ROS)水平;Western blot检测Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、PI3K、pAKT蛋白表达。10μmol/L的PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理H9C2心肌细胞,通过CCK8法及流式细胞术分别检测GDF-15+H_2O_2组及PI3K/AKT信号通路抑制剂组细胞活力及凋亡率,Western blot检测Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果:不同浓度H_2O_2处理H9C2心肌细胞后,细胞活力均受到抑制,且有浓度依赖性(P<0.05),由于200μmol/L的H_2O_2处理H9C2心肌细胞后可抑制将近一半的细胞增殖,选择200μmol/L的H_2O_2作为研究对象;与Control组比较,H_2O_2组GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著降低,凋亡率增加,ROS水平升高,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H_2O_2组比较,GDF-15+H_2O_2组细胞GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著增加,凋亡率降低,ROS水平降低,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低(P<0.05)。PI3K/AKT信号抑制剂组细胞活力及Bcl-2、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于GDF-15+H_2O_2组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于GDF-15+H_2O_2组(P<0.05)。结论:上调GDF-15表达可促进H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞增殖,降低细胞凋亡,其机制可能与调节细胞中ROS水平,Ki67、Bcl-2、Bax表达及PI3K/AKT信号通路有关。

关键词： 黑素瘤   原癌基因蛋白质c—cbl   RNA,小分子干扰   细胞增殖   细胞凋亡   细胞周期   基因,Cbl-b   A375细胞   短发卡RNA  

摘要： 目的 构建人泛素连接酶Cbl-b基因短发卡RNA（shRNA）重组慢病毒载体，探讨其对人黑素瘤A375细胞生物学行为的影响。方法 设计并合成3条沉默Cbl-b 基因的特异性shRNA及1条阴性对照shRNA，构建慢病毒载体。将A375细胞分成5组，即分别用3条特异性shRNA转染的CBLB-shRNA-1组、CBLB-shRNA-2组、CBLB-shRNA-3组，阴性对照组（阴性对照shRNA转染），空白对照组（转染空载体）。应用实时荧光定量PCR和Western印迹检测转染后72 h各组A375细胞沉默效率；CCK8法检测转染后24、48、72及96 h细胞增殖能力；流式细胞仪检测转染后72 h细胞凋亡情况、细胞周期，Transwell法检测转染后72 h细胞侵袭能力。结果 成功构建3条Cbl-b shRNA慢病毒载体，Western印迹示CBLB-shRNA-3蛋白沉默效率最高。CCK8检测表明，CBLB-shRNA-3组A375细胞增殖能力在转染后72 h和96 h较阴性对照组、空白对照组明显降低（均P 〈 0.01）。流式细胞仪检测示，CBLB-shRNA-3组凋亡率［（22.73 ± 6.58）%］明显高于阴性对照组［（6.08 ± 1.35）%］和空白对照组［（6.34 ± 1.07）%，均P 〈 0.01］。CBLB-shRNA-3组G1期细胞比例明显高于阴性对照组和空白对照组（P 〈 0.01），而S期细胞比例明显低于阴性对照组和空白对照组（P 〈 0.01）。Transwell检测示，阴性对照组、空白对照组和CBLB-shRNA-3组转染后72 h时穿膜细胞数分别为76.60 ± 1.82、73.20 ± 3.83、19.60 ± 1.14，差异有统计学意义（F = 794.50，P 〈 0.01）。结论 成功构建能高效沉默Cbl-b蛋白的CBLB-shRNA-3重组shRNA慢病毒载体，其可促进A375细胞凋亡，抑制A375细胞增殖、细胞周期进程和侵袭能力。

关键词： miRNA-19a   结肠癌   LoVo细胞   生物学特性  

摘要： 目的探讨微小RNA(miRNA)-19a对结肠癌LoVo细胞生物学特性影响的可能机制。方法采用脂质体介导的转染方法将miRNA-19a模拟物转染到人结肠癌细胞系LoVo细胞;检测转染后miRNA-19a基因的表达;利用CCK8试剂盒检测细胞的增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡影响,细胞侵袭小室法检测细胞的体外侵袭力,RT-PCR和Western blot检测Hsp90/Akt信号通路的变化。结果转染miRNA-19a的结肠癌LoVo细胞,miRNA-19a表达上调,细胞体外增殖能力增强,细胞凋亡减少,细胞的侵袭力增强;细胞Hsp90和Akt的基因和蛋白表达升高。结论 miRNA-19a可通过上调Hsp90/Akt信号通路表达,促进LoVo细胞增殖,减少细胞凋亡,增强LoVo细胞的侵袭能力。

关键词： 细胞生物学   教学改革   科研素质   创新能力  

摘要： 文章通过对生命科学领域国际化应用型人才需求现状和高校培养目标的分析,以细胞生物学为研究对象,根据课程目标和教学思想,对细胞生物学教学内容、教学方法和考核制度进行改革。构建适应需求的课程体系,完善理论课程和实验课程内容,注重学生科研素质培养;采用多样化教学模式,重视实验教学环节,理论联系实际,激发学生的学习动力,培养学生的科研创新能力;建立累加式的考核评价体系。这些改革和尝试取得了比较好的效果,促进了哈尔滨工业大学人才培养和重点课程的建设。

关键词： 人脐带   间充质干细胞   生物学特性   神经样细胞   分化  

摘要： 目的探究人脐带间充质干细胞具有的生物学特性,并对其向神经样细胞的分化进行研究。方法检测人脐带间充质干细胞细胞表面的标记;以β巯基乙醇与丹参诱导其向神经细胞分化,并为分化细胞与未分化细胞进行免疫细胞化学鉴定。此外,半定量RT-PCR检测细胞神经相关基因表达。结果分离自人脐带的贴壁细胞在体外可以生长成类似成纤维细胞的形态,在未分化状态下可以维持稳定增殖形态,且体外增殖远超10代,这类细胞表面标记CD105、CD59、CD44、CD29有较高的表达,而造血细胞的表面标记CD117、CD45、CD34、CD33、CD28、CD14则无表达或低表达,而与其相同表达的还有移植免疫排斥相关的表面标记,如CD86、CD80、CD40。经诱导分化的细胞表达神经元标记β-Ⅲ类神经微管和神经微丝、神经干细胞标记巢蛋白、神经胶质细胞标记的胶质纤维酸性蛋白。经过RT-PCR检测可知,经丹参诱导后的间充质干细胞表达神经干细胞的相关基因Neatin,而诱导前后间充质干细胞全部表达神经细胞基因Pleiotrophin并且在诱导后表达增强。结论人脐带间充质干细胞具有易于培养扩增的生物学特性,其表达间充质干细胞的表面标记,低或不表达造血细胞、与移植排斥有关的细胞标记。同时,其可以分化为神经样细胞并表达神经细胞的基因与相关标记,这种细胞可以作为肝细胞的一个来源,用于中枢神经系统细胞的移植。