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关键词： 宫颈癌   黏着斑激酶   小分子干扰RNA   丝氨酸/苏氨酸激酶/丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶   信号通路  

摘要： 目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默黏着斑激酶(FAK)基因对人宫颈癌Hela细胞生物学特征的影响。方法培养人宫颈癌Hela细胞,根据转染物的不同分为siRNA-FAK组、siRNA-阴性对照组和空白对照组,实时荧光定量聚合酶链反应技术检测细胞中FAK基因表达,噻唑蓝法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测各组细胞中FAK、RAF原癌基因丝氨酸/苏氨酸激酶-1(Raf-1)、磷酸化-Raf-1(p-Raf-1)、丝裂原活化蛋白激酶1/2(MEK1/2)、磷酸化-MEF1/2(p-MEK1/2)、细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化-ERK(p-ERK)蛋白表达。结果空白对照组、siRNA-阴性对照组、siRNA-FAK组细胞中FAK mRNA相对表达量、细胞凋亡率、细胞迁移细胞数、侵袭细胞数、FAK、Raf-1、p-Raf-1、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK和p-ERK蛋白相对表达量及细胞增殖能力比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组与siRNA-阴性对照组细胞中FAK mRNA的相对表达量、细胞增殖能力、细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数以及FAK、Raf-1、p-Raf-1、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK和p-ERK蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05);siRNA-FAK组细胞中FAK mRNA相对表达量、细胞增殖能力、迁移细胞数、侵袭细胞数以及FAK、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK蛋白相对表达量均显著低于空白对照组和siRNA-阴性对照组(P<0.05),细胞凋亡率及Raf-1、MEK1/2和ERK蛋白相对表达量均显著高于空白对照组和siRNA-阴性对照组(P<0.05)。结论特异性抑制人宫颈癌Hela细胞中FAK基因可减少细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,其机制可能与抑制Raf/MEK/ERK信号通路有关。

关键词： 细胞生物学   翻转课堂   教学方法   教学改革  

摘要： 细胞生物学是生命科学中的前沿学科,是现代高等医学院校重要的基础课程。为提高教学效果,文章阐述了在细胞生物学本科教学中运用翻转课堂教学法的实践过程,结合教学体会,分析了该教学法的优势与不足,并针对学生反馈,提出优化改进的思路,以期与其他同仁共同探讨相关的教学创新方法,提高课程的教学水平。

关键词： 结直肠肿瘤   肿瘤干细胞   微RNAs   细胞系   肿瘤  

摘要： 目的探讨长链非编码RNA（lincRNA）－ROR作为一个内源竞争RNA（ceRNA）结合miR－145对下游干性相关基因Oct4、Sox2和Nanog的表达，及对结直肠癌干细胞生物学特性的影响，并阐明这种分子调控网络的临床意义。方法收集2014年至2016年间河南省南阳市中心医院及南阳市第二人民医院胃肠外科结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织共52例，采用即时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测52例临床患者结直肠癌组织标本及结直肠癌细胞系中lincRNA－ROR、miR－145的表达；分析lincRNA－ROR和miR－145的表达与结直肠癌临床病理特征的相关性；流式细胞术从SW1116中分离CD44－CD133－和CD44＋CD133＋细胞；qPCR检测细胞中CD44、CD133、Oct4、Sox2、Nanog表达及CD44＋CD133＋细胞贴壁黏附后CD44、CD133、lincRNA－ROR、miR－145表达；生物信息学分析miR－145与lincRNA－ROR及核心转录因子Oct4、Sox2、Nanog之间靶向调控关系，双荧光素酶报告基因实验、qPCR、Western blot进行验证；噻唑蓝法、克隆形成检测沉默lincRNA－ROR对结直肠癌干细胞增殖及化疗敏感性的影响。结果结直肠癌组织中lincRNA－ROR高表达，miR－145低表达，两者呈显著负相关（P〈0.05）；lincRNA－ROR表达与肿瘤大小、淋巴结转移、远端转移有关（P〈0.05），miR－145表达与肿瘤大小、肿瘤位置有关（P〈0.05）；流式细胞术成功分选出CD44＋CD133＋和CD44－ CD133－细胞，CD44＋CD133＋细胞中CD44、CD133、Oct4、Sox2、Nanog、lincRNA－ROR较CD44－ CD133－细胞高表达，miR－145低表达（P〈0.05）；贴壁黏附后CD44、CD133、lincRNA－ROR表达明显降低，miR－145表达增加（P〈0.05）；lincRNA－ROR能够结合miR－145调控Oct4、Sox2和Nanog表达；沉默lincRNA－ROR可显著抑制结直肠癌干细胞增殖克隆形成能力，增加其对顺铂、紫杉醇敏感性。结论lincRNA－ROR结合miR－145调控核心转录因子Oct4、Sox2和Nanog表达来影响结直肠癌干细胞增殖及化疗敏感性，为后续研究结直肠癌发生发展中遗传网络组分之间相互作用的病理生理功能提供了新见解，为结直肠癌治疗提供新思路。

关键词： miR-195   细胞周期   CHEK1   非小细胞肺癌  

摘要： 目的探讨miR-195对肺癌A549细胞分裂增殖、侵袭力的影响及其机制。方法选取非小细胞肺癌A549细胞株为研究对象,分别转染miR-195及RNA阴性对照序列。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-195的表达水平;CCK8检测转染miR-195对肿瘤细胞分裂增殖能力的干预情况;Transwell侵袭实验分析和评价miR-195对细胞侵袭力的作用;流式细胞仪检测并评价转染miR-195对肿瘤细胞分裂周期的影响;Western blot探究miR-195对肿瘤细胞CHEK1、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达的调节。结果 CCK8实验表明高表达miR-195可明显抑制肺癌A549细胞的体外增殖能力;Transwell侵袭实验结果提示转染miR-195可导致肺癌A549细胞侵袭能力明显降低;流式细胞仪检测发现上调miR-195表达可使肺癌A549细胞阻滞于G0/G1期;通过三个RNA数据库查询和Western blot检测,发现下调CHEK1和cyclin D1表达可能是miR-195调控肺癌A549细胞生物学行为的途径之一。结论 miR-195在肺癌A549细胞生物学行为的调控中发挥重要作用,miR-195可能是潜在的治疗非小细胞肺癌的靶基因。

关键词： 骨质疏松   低强度高频率振动   成骨细胞   生物学特性  

摘要： 目的研究低强度高频率振动（low-magnitude high-frequency vibration,LMHFV）对成骨细胞生物学特性的影响。方法建立LMHFV加载MC3T3-E1细胞模型,观察不同频率LMHFV对MC3T3-E1细胞OPG/RANKL浓度比的影响,获得OPG/RANKL浓度比最高的频率（F）为后续研究频率;以0 Hz为对照,观察LMHFV对MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）m RNA和蛋白活性,及钙化结节形成的影响;LMHFV加载形成的条件培养液（CM_F）孵育RAW264.7细胞,观察CM_F对破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、多核破骨细胞形成、TRAP m RNA及蛋白活性的影响;观察LMHFV对MC3T3-E1细胞环氧化酶2（COX-2）蛋白水平的表达及COX-2抑制剂NS-398对LMHFV影响MC3T3-E1细胞分化的作用。结果 30 Hz LMHFV获得OPG/RANKL浓度比最高,促进ALP、OCN m RNA及蛋白活性增加,增加钙化结节形成。30 Hz LMHFV形成的CM抑制RAW264.7细胞向多核破骨细胞分化,抑制TRAP m RNA及活性;LMHFV可诱导COX-2蛋白水平增加,NS-398能抑制LMHFV促进成骨细胞分化。结论 30 Hz的LMHFV对MC3T3-E1细胞OPG/RANKL浓度比及成骨分化具有积极的影响,通过调控成骨细胞OPG/RANKL浓度比间接抑制骨吸收,COX-2通路参与了LMHFV对成骨细胞生物学特性的调节作用。

关键词： 团头鲂   骨组织细胞   细胞系   基因表达   生物学特性  

摘要： 为研究鱼类骨组织细胞的特征,实验建立了团头鲂骨组织细胞的体外分离培养方法,并对其生物特性进行了鉴定。以3月龄团头鲂尾椎骨及肋骨为实验材料,利用组织块培养法和胰蛋白消化法分别进行骨组织细胞培养,确定最佳培养条件:采用组织块培养法,28°C培养,M-199培养基中加入体积分数为20%的胎牛血清、25 ng/m L表皮生长因子EGF和25 ng/m L碱性成纤维生长因子b FGF。细胞生物学特性鉴定结果显示:细胞碱性磷酸酶、钙化结节茜素红染色及矿化结节von Kossa氏法染色均呈阳性,表明所培养的细胞具有典型成骨细胞的生物学活性;鱼骨钙素ELISA试剂盒检测培养细胞中骨钙素含量为997.25 ng/L;荧光定量PCR结果显示特异性调节成骨细胞分化的转录因子runx2a、runx2b和osterix基因在团头鲂骨组织细胞系中均有表达,且runx2b和osterix的表达量显著高于团头鲂肌肉细胞系。利用本方法可获得增殖活性良好,生长速率快,且细胞生物学特性稳定的团头鲂骨组织细胞系(MBCs),为日后鱼类骨组织体外实验研究奠定了基础。

关键词： 胃癌   Six1基因   侵袭   B7-H1   JAK2/STAT3信号通路  

摘要： 目的探讨抑制胃癌细胞Six1表达对癌细胞增殖侵袭及B7-H1表达的影响及机制。方法以人正常胃黏膜上皮细胞GES-1为对照细胞,Western印迹检测胃癌MKN45、BGC823和AGS细胞Six1的蛋白表达;参照LipofectamineTM2000转染说明将非特异性siRNA(NC组)和Six1特异性的siRNA(si-Six1组)转染BGC823细胞,并设置空白对照组,转染48 h,通过MTT及Transwell小室分别检测各组细胞活力及侵袭能力;Western印迹检测Six1、B7-H1及JAK2/STAT3信号通路磷酸化的JAK2、STAT3及下游分子细胞周期蛋白(cyclin)D1和基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达。结果胃癌MKN45、BGC823和AGS细胞Six1的表达均显著高于在GES-1细胞表达(P<0.05);转染si-Six1的BGC823细胞Six1的蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05);与NC组比较,si-Six1组细胞活力及侵袭能力均显著降低,B7-H1、p-JAK2、p-STAT3、cyclinD1和MMP-2的蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论下调胃癌细胞Six1表达可降低癌细胞活力及侵袭能力,降低B7-H1表达,机制可能是抑制JAK2/STAT3信号通路。

关键词： 研究性教学   细胞生物学   教学内容   教学方法   科研应用  

摘要： 研究性教学的目的是激发学生探索世界的动机、培养学生自主解决问题的意识、提高学生实践与创新的能力。本文针对细胞生物学的教学计划及培养目标,借鉴研究性教学在其他学科中的应用,结合扬州大学生物科学与技术学院本科专业,从教学内容、教学方法及科研应用等方面探讨了研究性教学在该课程教学中的应用以及提高学生实践应用能力的效果,以期为其他高校研究性教学的开展提供借鉴。

关键词： 生命科学   中国科协   十大   科学学会   同行专家   社会问题   基因突变   细胞生物学  

摘要： 近日,中国科协生命科学学会联合体组织22家成员学会推荐,经生命科学领域同行专家审核与评选,向社会公布2017年度＂中国生命科学十大进展＂评选结果。1.基因导致男性不育男性不育是当前备受关注的社会问题。中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所等专家,从男性不育症患者中筛查发现了Piwi基因突变导致男性不育。