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关键词： 舌鳞状细胞癌   鞘氨醇激酶1   细胞增殖   细胞迁移   细胞侵袭   上皮间质转化  

摘要： 目的研究鞘氨醇激酶1(Sphk1)在舌鳞状细胞癌(TSCC)组织中的表达及意义,并探讨其对舌癌Tca8113P160细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法采用免疫组化法检测50例TSCC、28例口腔白斑病及10例癌旁正常舌黏膜标本中Sphk1的表达水平,分析其与TSCC患者临床病理特征的关系。将舌癌Tca8113P160细胞分为N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)组和对照组,DMS组加入Sphk1抑制剂DMS,对照组加入无药物培养基。采用CCK-8法检测两组培养24、48、72 h的细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测Sphk1、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达。结果 Sphk1在TSCC组织中的高表达率高于白斑及正常舌黏膜组织(P均<0.01)。Sphk1在TSCC组织中的高表达与肿瘤临床分期、淋巴结转移、T分期及组织学分级有关(P均<0.05)。DMS组培养24、48、72 h的细胞增殖OD值均低于对照组(P均<0.05)。DMS组在迁移实验和侵袭实验中的穿膜细胞数均较对照组减少(P均<0.01)。与对照组相比,DMS组Sphk1、N-cadherin蛋白表达减少,E-cadherin蛋白表达增加(P均<0.05)。结论 Sphk1在TSCC组织中高表达,参与TSCC的发生发展;其表达下调可抑制舌癌细胞的增殖、迁移及侵袭,可能与逆转上皮间质转化有关,Sphk1有望成为TSCC治疗的潜在靶点。

关键词： 微弧氧化表面改性   粗糙度   细胞骨架   生物材料   3D打印钛合金支架   增殖和成骨分化   合金   生物学   干细胞   组织工程  

摘要： 背景:微弧氧化处理可提高钛合金植入体的生物学性能。目前研究多集中于钛合金片材,有关微弧氧化改性处理后3D多孔钛合金支架对细胞生长及分化的影响鲜有报道。目的:研究微弧氧化表面改性对3D打印多孔钛合金支架表面细胞生物学性能的影响。方法:将大鼠骨髓间充质干细胞分别接种于微弧氧化处理Ti6Al4V合金三维支架(实验组)与未经微弧氧化处理Ti6Al4V合金三维支架(对照组)上,培养4,7 d,进行扫描电镜观察、细胞骨架染色分析及细胞活力分析;培养4,7,11 d,检测细胞上清液中碱性磷酸酶和骨钙素水平;培养1,4,7,11 d,MTT法检测细胞增殖。结果与结论:(1)培养4,7 d时,live/dead染色显示骨髓间充质干细胞在两组材料上生长良好;细胞骨架染色分析显示,实验组细胞骨架呈立体多角形,对照组支架表面的细胞以扁平梭形状沿支架宏观结构铺展;扫描电镜显示,实验组细胞排列较为紧密,细胞伸展状态良好,细胞间的板状伪足与丝状伪足交叉连接,以锚状结构牢固地黏附于材料表面;对照组细胞伪足间的连接较少,细胞外基质较少,平铺在材料表面生长;(2)随着培养时间的延长,两组细胞上清液中碱性磷酸酶与骨钙素水平逐渐升高;实验组培养7,11 d的碱性磷酸酶水平高于对照组(P<0.05),培养11 d的骨钙素水平高于对照组(P<0.05);(3)MTT检测显示,随着培养时间的延长,两组细胞数量逐渐增加;实验组培养7,11 d的细胞数量明显多于对照组(P<0.05);(4)结果表明,微弧氧化处理后的钛合金支架更有利于细胞的黏附、增殖与分化。

关键词： 二狼山绒山羊   成纤维细胞系   年龄   生物学特性  

摘要： 采用胶原酶消化法建立细胞系,观察细胞形态、测定细胞冻存前和复苏后的存活率、绘制细胞生长曲线,并对染色体核型进行分析,研究不同年龄的二狼山绒山羊耳组织成纤维细胞的生物学特性,分析年龄对二狼山绒山羊耳组织成纤维细胞体外培养的影响。试验结果表明,年龄对细胞形态无影响;冻存没有降低细胞的存活率(P>0.05);细胞的生长曲线呈典型的S型且年龄对细胞的生长无明显影响(P>0.05);染色体核型分析显示,不同年龄的山羊耳组织成纤维细胞系的染色体数目均为2 n=60(XY/XY),无染色体畸形。说明不同年龄,甚至年龄比较大的二狼山绒山羊个体(13岁)都可以通过胶原酶消化法建成稳定的成纤维细胞系,本试验使二狼山绒山羊种质资源在细胞水平得到保存,为二狼山绒山羊成纤维细胞系的建立以及开展其种质资源的保存提供一定的参考。

关键词： 黑色素瘤   小凹蛋白-1   受体,表皮生长因子   细胞增殖   转移  

摘要： 目的探讨小凹蛋白-1(Cav-1)调控表皮生长因子受体(EGFR)活化对恶性黑色素瘤细胞生物学行为的影响。方法体外培养恶性黑色素瘤M2细胞,利用质粒转染技术建立过表达Cav-1的稳定细胞株M2(Cav-1)并验证;MTS法、细胞划痕实验以及Transwell侵袭实验分别检测稳定转染细胞株的增殖、迁移与侵袭能力;蛋白免疫印迹法检测稳转细胞株EGFR及其下游信号转导通路的活化水平。结果通过质粒转染技术得到的M2(Cav-1)细胞中Cav-1的表达量明显高于M2(pcDNA3.1)细胞(P<0.01)。在不同浓度表皮生长因子(EGF)刺激下,M2(Cav-1)细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力均低于M2(pcDNA3.1)细胞(P<0.01)。M2(Cav-1)细胞经EGF刺激后磷酸化EGFR、ERK及Akt水平明显低于M2(pcDNA3.1)细胞(P<0.01)。结论 Cav-1可通过调控恶性黑色素瘤M2细胞EGFR的活化水平,影响MAPK/ERK及PI3K/Akt信号转导通路激酶的活化,进而影响M2细胞的生物学行为。

关键词： 胃癌   eIF4A1   细胞增殖   细胞凋亡   细胞迁移   AKT  

摘要： 目的探讨沉默eIF4A1基因对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移的细胞生物学行为影响的机制。方法以eIF4A1沉默重组慢病毒颗粒(LV-EIF4A1-RNAi组)感染人胃癌SGC-7901为eIF4A1沉默组(eIF4A1-RNAi组),感染阴性对照慢病毒颗粒(CON077)的胃癌细胞为阴性对照组(CON077组),空白对照组(control组)不作任何处理。以每个副孔初始含4×10~3个细胞,CCK-8检测各组细胞增殖能力;流式细胞仪检测各组5×10~6个细胞凋亡和1×10~6个细胞周期分布;Transwell实验检测各组1×10~5个细胞迁移和侵袭能力;实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞eIF4A1和AKT基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 LV-EIF4A1-RNAi(44683-1)组eIF4A1基因的表达量最低为(0.31±0.04),因此选择该组为eIF4A1沉默组(eIF4A1-RNAi)。与CON077组和control组相比,eIF4A1-RNAi组细胞增殖活力明显降低,细胞凋亡率提高,细胞周期阻滞于S期,G1/G2期细胞减少,细胞的迁移、侵袭能力下降,eIF4A1和AKT基因的mRNA和蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);CON077组与control组比较,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论慢病毒介导eIF4A1基因沉默能抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖和迁移、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期于S期,其机制可能与AKT表达下调有关。

关键词： FHL1   肺腺癌   增殖   转移  

摘要： 目的研究FHL1的表达对人肺腺癌细胞株A549生物学特征的影响。方法以FHL1 mRNA及shRNA慢病毒载体转染肺腺癌细胞株A549,并采用Western blot及RT-PCR法筛选检测稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株模型及低表达细胞株模型;运用CCK-8实验、Transwell实验、流式细胞仪、细胞集落形成实验等方法对其增殖、侵袭、凋亡及锚定非依赖性生长生物学特性进行检测评估。结果 FHL1稳定过表达及低表达组的Western blot及RT-PCR法检测显示病毒转染效果可靠稳定;CCK-8实验提示低表达组的细胞增殖情况明显高于过表达组及空白组(P=0.002 2);流式细胞仪检测提示过表达组的细胞总体凋亡率为50.48%,明显高于两个低表达组(16.41%、20.12%)及空白对照组(25.90%),差异有统计学意义(P<0.001);Transwell实验提示过表达组细胞表现出的侵袭性明显低于低表达组及空白组差异有统计学意义(P<0.001);成集落实验显示过表达组细胞株形成的集落数为28.7±6.0,明显少于两个低表达组(157.0±6.4、150.7±9.5),差异有统计学意义(P<0.001)。结论稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株A549模型及低表达模型构建成功。FHL1的表达对于肺腺癌细胞株A549的增殖、侵袭及转移均有抑制作用,并能够诱导其加速凋亡。

关键词： 谷氨酰胺酶1   人胃肠道神经内分泌肿瘤   哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路   增殖   侵袭  

摘要： 目的观察干扰谷氨酰胺酶1（GLS1）表达对人胃肠道神经内分泌肿瘤细胞生物学特性的影响。 方法Western blot检测GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达；将正常对照（NS）-小干扰RNA（siRNA）、GLS1-siRNA1、GLS1-siRNA2、GLS1-siRNA3转染人胃肠道神经内分泌肿瘤细胞株BON-1，未转染任何siRNA的作为对照组，Western blot检测转染后各组细胞中GLS1蛋白表达；细胞计数试剂盒（CCK-8）检测转染12、24、48 h后细胞增殖；细胞转染24 h后，Transwell小室检测细胞侵袭数；Western blot检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、人核糖体蛋白S6激酶（rps6k）、磷酸化rps6k（p-rps6k）蛋白表达；细胞中加入10 nmol/L mTOR信号通路抑制剂雷帕霉素，检测其对细胞增殖侵袭的影响。 结果GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤组织中的表达显著高于瘤旁组织（P＝0.000）；GLS1-siRNA1、GLS1-siRNA2、GLS1-siRNA3组细胞中GLS1蛋白表达水平均显著低于对照组，选择GLS1-siRNA2作为后续研究；GLS1-siRNA组在12、24、48 h的细胞存活率为（85.31±4.42）%、（76.12±2.93）%、（69.22±3.62）%，均显著低于对照组[（97.02±2.21）%、（96.61±1.52）%、（97.11±2.32）%；t12 h＝4.104，P12 h＝0.015；t24 h＝10.752，P24 h＝0.000；t48 h＝11.235，P48 h＝0.000]；GLS1-siRNA组细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、p-mTOR、p-rps6k蛋白表达水平均显著低于对照组；加入抑制剂后的细胞增殖及侵袭结果与干扰GLS1表达的结果趋势一致。 结论GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤中呈高表达，抑制GLS1的表达能显著抑制BON-1细胞增殖和侵袭，其机制与mTOR信号通路的调控有关。

关键词： 增生性瘢痕   表皮干细胞   生物学特性   整形外科   缺损   修复  

摘要： 目的:探讨成熟期增生性瘢痕与正常皮肤来源表皮干细胞的生物学特性。方法:选择本院成熟期增生性瘢痕患者病理组织,正常皮肤为本院行游离皮片移植术患者的全厚皮片,分别进行分离培养,获取种子细胞,利用免疫细胞化学技术检测角蛋白19、整合素β_1在两组中的表达情况,应用CCK-8检测两组表皮干细胞生长曲线,酶标仪检测两组表皮干细胞450～630nm的吸光度值。结果:角蛋白19及整合素β1在两组中均呈阳性表达,差异无统计学意义(P>0.05);且两组表皮干细胞具有相似的生长曲线,其不同时间的450～630nm吸光度值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:成熟期增生性瘢痕组织中也存在表皮干细胞,且与正常皮肤来源表皮干细胞具有相近的生物学特性,为整形外科中成熟期增生性瘢痕组织表皮的再利用提供理论基础。

关键词： 二甲双胍   子宫内膜癌   胰岛素样生长因子-1   生物学行为  

摘要： 目的:研究二甲双胍(Met)对体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡、迁移的影响并探讨其机制。方法:Ishikawa细胞经Met作用后,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞法检测细胞凋亡及周期分布;划痕法和Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测胰岛素生长因子-1(IGF-1)的表达水平。结果:经Met处理后,Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭能力受到明显抑制,凋亡率显著增高;随着Met浓度地升高,IGF-1蛋白表达水平显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论:Met可通过下调IGF-1蛋白的表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞产生抑制增殖、诱导凋亡和降低迁移及侵袭等作用。

关键词： FAL1   长链非编码RNA   卵巢肿瘤   聚合酶链反应   丝裂原激活蛋白激酶激酶类  

摘要： 目的:探索上皮性卵巢癌细胞与正常人卵巢细胞中长链非编码RNA(lncRNA)FAL1的表达差异及沉默卵巢癌细胞株SKVO3中lncRNA FAL1的表达对卵巢癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测组织中lncRNA FAL1表达水平;设计并合成FAL1-siRNA引物序列转染SKVO3,通过细胞划痕试验检测卵巢癌细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力,流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡,蛋白质印迹(Western blotting)检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)蛋白的表达水平。结果:lncRNA FAL1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织([15.04±2.24)vs.(2.93±0.39),P<0.05]。沉默lnc RNA FAL1的表达后,卵巢癌细胞的凋亡能力显著增强([18.38±0.73)%vs.(2.86±0.09)%,P<0.05],而卵巢癌细胞迁移、侵袭能力均降低([6.68±1.49)μm vs.(12.85±2.56)μm,(25.80±2.59)个vs.(145.6±5.23)个,均P<0.05],MEK/ERK通路MEK1/2和ERK1/2蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论:lncRNA FAL1通过激活MEK/ERK通路影响上皮性卵巢癌细胞的侵袭、迁移及凋亡,其表达异常增高可能是卵巢癌发生发展的重要分子机制。